桂枝茯苓丸等剂型挥发性成分的对比分析

马银宇 卢金清 罗贝贝

摘要：利用顶空固相微萃取（HS-SPME）结合气质联用（GC-MS）技术对桂枝茯苓丸、桂枝茯苓片、桂枝茯苓胶囊3种不同剂型的挥发性成分进行了分析，并且计算了各成分相对百分含量。结果表明，从桂枝茯苓丸中检测出22个峰，鉴定出17种成分，占挥发性成分的98.41;从桂枝茯苓片中检测出15个峰，鉴定出12种成分，占挥发性成分的89.12%;从桂枝茯苓胶囊中检测出30个峰，鉴定出26种成分，占挥发性成分的99.46%。桂枝茯苓丸及其他剂型之间挥发性成分的组成和含量均发生了变化。

关键词：桂枝茯苓丸;桂枝茯苓胶囊;桂枝茯苓片;顶空固相微萃取;气质联用技术;挥发性成分

中图分类号：O657.7⁺1;5567 文献标识码：A

文章编号：0439-8114（2020）09-0155-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2020.09.033

桂枝的供药有两种，一种是菌桂，又称小桂，其皮为肉桂，或简称筒桂;另一种是牡桂，又称大桂，或单称桂，其皮为官桂，嫩枝为桂枝。桂枝首見于《神农本草经》，“其味辛温，主治上气咳逆。结气喉痹吐吸，通利关节，补中益气，久服可以通神轻身不老。”桂枝产于中国云南及广东、广西等地，性温无毒，为解肌发表的要药。主要能温经通脉，治疗表虚中风，手足痛风，伤寒头痛，无汗时能发，有汗时能止，通行肺气，散寒祛邪，调和营卫，横通肢节。临床上多以桂枝与其他药物一起配合治疗疾病。桂枝茯苓丸首次载于《金匮要略》[1]，“妇人宿有癓病，经断未及三月，而得漏下不止，胎动在脐上者，为癥痼害。妊娠六月动者，前三月经水利时，胎下血者，后断三月下血也。所以血不止者，其癓不去故也。当下其癓，桂枝茯苓丸主之。”目前市面上流通着以桂枝、茯苓、牡丹皮、桃仁、白芍/赤芍为主要成分，以不同工艺制成的丸剂、片剂、胶囊3种剂型，但三者功效均为活血、化瘀、消癓。因处方中的药都含有挥发性成分，其中也有发挥药效的成分。本研究从挥发性成分的角度，首次采用HS-SPME-GC-MS技术对桂枝茯苓丸及其他剂型的挥发性成分进行分析，并对比其不同剂型中的挥发性成分种类及相对百分含量，主要考察不同制剂工艺对其挥发性成分种类和含量的影响。

1 材料与方法

1.1 仪器

手动固相微萃取装置，IKA公司;Agilent6890/5973型气-质联用仪，Hewlett-Packard公司;顶空瓶（15mL）;65μm PDMS/OVB萃取纤维头，Supelco公司;JY1002型电子夭平，上海浦春计量仪器有限公司，d=0.01g。

1.2 试药

桂枝茯苓丸购于益丰大药房，桂枝茯苓胶囊购于国大药房，桂枝茯苓片购于济德大药房。

1.3 方法

1.3.1 GC-MS色谱与质谱条件

1）GC条件。HP-SMS石英毛细管柱（30m×0.25mm，0.25μm）;程序升温：50℃^10℃/min130℃^2℃/min185℃^10℃/min230℃;载气为高纯He，流速0.8mL/min，进样口温度230℃。

2）MS条件。E1源;离子源温度230℃，电离能70eV;四级杆温度150℃;扫描质量范围35～550m/z。

1.3.2 顶空固相微萃取条件经过综合考察样品进样量、平衡时间、平衡温度、萃取时间、萃取温度、解吸时间，最终确定顶空固相微萃取最佳条件为：称取桂枝茯苓丸粉末（过16目筛）样品0.6g，置于15mL顶空瓶中，插入装有65μm PDMS/DVB萃取纤维头的手动进样器，在100℃下预平衡10min后，再压缩手柄伸出萃取头萃取15min，取出进样器，立即插入气相色谱仪进样口（进样口温度230℃）解吸3min，不分流进样;桂枝茯苓片和桂枝茯苓胶囊的试验条件同上。

2 结果与分析

通过化学工作站对试验数据进行处理，再利用面积归一法对桂枝茯苓丸、桂枝茯苓片及桂枝茯苓胶囊的总离子流分别计算出3个样品中各成分的相对百分含量。然后通过NIST08质谱数据库对各样品的质谱峰进行检索并确定各成分。从桂枝茯苓丸样品中检测出22个峰，鉴定出17种成分，占挥发性成分的98.41%，其中含量最高的为肉桂醛（58.37%）;从桂枝茯苓片中检测出15个峰，鉴定出12种成分，占挥发性成分的89.12%，其中含量最高的为丹皮酚（60.15%）;从桂枝茯苓胶囊样品中检测出30个峰，鉴定出26种成分，占挥发性成分的99.46%，其中含量最高的也为丹皮酚（59.43%）。具体结果见图1、图2、图3和表1。

3 小结与讨论

研究结果表明，桂枝茯苓丸、桂枝茯苓片和桂枝茯苓胶囊挥发性成分的种类和含量均发生了不同程度的变化。3种剂型共有挥发性成分为7种，其中肉桂醛和丹皮酚相对百分含量最高。桂枝茯苓丸中含量最高的是肉桂醛（58.37%），其次是丹皮酚（27.61%）。在桂枝茯苓片中含量最高的是丹皮酚（60.15%），其次是肉桂醛（22.18%）。在桂枝茯苓胶囊中含量最高的是丹皮酚（59.43%），其次是肉桂醛（28.58%）。桂枝茯苓丸中肉桂醛含量最高（58.37%），远大于桂枝茯苓片（22.18%）和桂枝茯苓胶囊（28.58%）的含量。研究[2-7]表明，肉桂醛在代谢疾病和循环系统疾病方面具有抗糖尿病、抗肥胖作用，可用于心肌疾病、缺血性心脏病等，还具有抗菌、抗寄生虫和抗肿瘤的作用，可促进血管的形成、保护神经等。丹皮酚在桂枝茯苓片中的含量最高（60.15%）、其次是桂枝茯苓胶囊中（59.43%），远高于在桂枝茯苓丸中的含量（27.61%）。丹皮酚具有抗肿瘤、抗菌消炎、抗氧化、调节免疫等作用[8-10]。市面上售卖的桂枝茯苓丸、桂枝茯苓片及桂枝茯苓胶囊3种剂型的主要功效都是活血、化瘀、消癥。

从3种不同剂型的制法角度探索其差异的来源。桂枝茯苓丸的制法：桂枝、茯苓、牡丹皮、赤芍、桃仁，以上五味1：1粉碎成细粉，过筛，混匀，每100g粉末加炼蜜90～110g制成大蜜丸，即得。桂枝茯苓片的制法：桂枝、茯苓、牡丹皮、桃仁、白芍，以上五味1：1，牡丹皮用水蒸气蒸馏法提取丹皮酚备用。桂枝、白芍、桃仁及茯苓粉碎成粗粉，混匀，加入提取过的牡丹皮药渣，再加90%乙醇，提取两次合并滤液;药渣加水提取两次合并滤液，把两种提取液分别减压浓缩至相对密度为1.20～1.25（80～85℃）的清膏。合并两浓缩液，加入剩余的茯苓细粉，混匀，干燥，粉碎，加70%糖浆适量，制粒，加入丹皮酚细粉，混匀，压片，包薄膜衣即得。桂枝茯苓胶囊的制法：桂枝、茯苓、牡丹皮、桃仁、白芍，以上五味1：1，取适量茯苓粉碎成细粉。牡丹皮用水蒸气蒸馏法提取挥发性成分备用。药渣与桂枝、白芍、桃仁及剩余的茯苓用90%乙醇提取二次，合并提取液，回收乙醇至无醇味，减压浓缩至适量。药渣再加水煎煮二次合并提取液，减压浓缩至适量，上述二种浓缩液，与茯苓细粉混匀，干燥，粉碎，加入适量的糊精，制颗粒，干燥，加入牡丹皮挥发性成分，混匀，装入胶囊即得。由以上制法可知，桂枝茯苓丸是各味药直接粉碎制得，其中肉桂醛在生药中的含量最高，桂枝茯苓片和胶囊是先用水蒸气蒸馏提取丹皮酚再与其他药加热提取物混合而得，桂枝中的肉桂醛在加热情况下部分挥发或者热分解，片剂和胶囊剂中丹皮酚的检测含量较丸剂高。如果按此处方比例，桂枝药材粉碎备用，牡丹皮提取丹皮酚备用，其他各味按照胶囊剂制法制备，所得制剂各主要有效成分含量保持在较高水平，其活血、化瘀、消癥功效可能会更好，但有待进一步研究。

参考文献：

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收稿日期：2020-03-05

基金项目：湖北省技术创新专项重大项目（2016ACA146）

作者简介：马银宇（1994-），男，河南新乡人，在读硕士研究生，研究方向为中药及其天然产物活性成分，（电话）18064113331（电子信箱）996343549@qq.com;通信作者，卢金清，男，教授，主要从事中药及其天然产物活性成分的研究，（电话）027-68890101（电子信箱）ljq59169@sohu.com。