淡水水体中含细菌水样保存时间研究

姜永伟

摘要    本文研究了国内外标准对含细菌水样保存时间的规定，4 ℃和10 ℃条件下开展了低、中、高3个浓度水样连续24 h条件试验。结果表明，4 ℃和10 ℃条件下，24 h内测定细菌总数的结果在统计学意义上无显著性差异;4 ℃条件下，24 h内中浓度水样细菌总数计数结果在统计学意义上无显著性差异;低浓度和高浓度水样有显著性差异。建议水樣的保存时间不宜超过6 h。

关键词    含细菌水样;保存时间;条件试验;淡水水体

中图分类号    X832        文献标识码    A

文章编号   1007-5739（2020）15-0182-02                                                                                     开放科学（资源服务）标识码（OSID）

Abstract    The domestic and international standards for the preservation time of water samples containing bacteria were studied. The 24 h continuous condition test of water samples with low， medium and high concentrations were carried out at 4 ℃ and 10 ℃. The results showed that there was no significant difference in the total bacteria in 24 hours between 4 ℃ and 10 ℃. At 4 ℃，there was no significant difference in the total bacteria in the medium concentration samples within 24 hours， but there were significant differences between low concentration and high concentration samples. It is suggested that the preservation time of water sample should not exceed 6 hours.

Key words    water sample containing bacteria; preservation time; condition test; fresh water

《水质 细菌总数的测定 平皿计数法》（HJ 1000—2018）[1]中规定，细菌总数是指36 ℃培养48 h，样品在营养琼脂上所生长的需氧菌和兼性厌氧菌菌落总数。在水环境微生物检测中，由于细菌繁殖速度快，含细菌的水样保存时间限制成为远距离运输难以克服的困难。

国内外标准对于水样的保存时间多规定在6 h以内（表1），个别标准如 《水质-大肠杆菌和大肠菌群的计数-最大可能数法》（ISO 9308-2—2012）[2]将时间延长至18 h。为验证细菌样品的最大保存时间，本文选取低、中、高3个浓度水样，在4 ℃和10 ℃保存温度下，开展了1次/h、连续24 h的条件试验。

1    试验方法

就近采集低浓度、中浓度和高浓度3个浓度水样，充分混匀后分装于一系列样品瓶内，然后分别放置在4 ℃和10 ℃冰箱中冷藏保存，每小时取1瓶水样，混匀后用平皿计数法在无菌操作间中接种并培养48 h后，计数平皿上生长的细菌菌落总数。

2    结果与分析

48 h平皿上生长的细菌菌落总数结果见表2。同时，将以上结果经对数处理后进行配对T检验，结果见表3。

由表3可见，在4 ℃和10 ℃条件下，低、中、高3种浓度下24 h内测定细菌总数的结果在统计学意义上无显著性差异（P=0.334、P=0.611、P=0.297）。

在4 ℃保存条件下，选取低、中、高3种浓度细菌总数结果差异最大的不同时间段的值经对数处理后进行配对T检验，结果见表4。

结果表明，4 ℃条件下，24 h内中浓度水样细菌总数计数结果在统计学意义上无显著性差异（P=0.163）;低浓度和高浓度水样有显著性差异（P=0.000、P=0.001）。

3    结论与讨论

试验结果表明，4 ℃和10 ℃条件下，24 h内测定细菌总数无显著差异;本试验中，4 ℃条件下，中浓度水样低温保存24 h后无显著差异，但是基于日常检测中水样浓度的未知性和历史数据的延续性（国内标准对含细菌水样的保存时间均为6 h），建议水样保存时间不宜超过6 h[9-10]。

4    参考文献

[1] 生态环境部.水质 菌落总数的测定 平皿计数法：HJ 1000-2018[S].北京：中国环境出版社，2018.

[2] International Organization for Standardization.Water quality-enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria-Part 2：Most probable number method：ISO 9308-2-2012[S/OL].（2020-07-01）[2020-01-04].https：//www.iso.org/standard/52246.html.

[3] United States Environmental Protection Agency.Monitoring methods of water and wastewater environmental microorganism：EPA-HQ-OW-2013[S/OL].（2013-07-07）[2020-01-04].https：//www.epa.gov/laws-regulat-ions/laws-and-executive-orders.

[4] European Norm.Water quality-detection and enumeration of Escherichia coli coliform bacteria-Part 1：Membrane filtration method：ISO 9308-1：2000 [S/OL].（2001-07-01）[2020-01-04].https：//www.scirp.org/reference/ReferencesPapers.aspx？ReferenceID=1101476.

[5] APHA.Standard analytical methods for water and waste water：APHA 9215-2012[S/OL].（2016-01-19）[2020-01-04].https：//www.scirp.org/reference/ReferencesPapers.aspx？ReferenceID=2333411.

[6] 中華人民共和国环境保护部.水质 总大肠菌群和粪大肠菌群的测定 纸片快速法：HJ 755-2015[S].北京：中国环境科学出版社，2015.

[7] 国家环境保护总局.环境监测技术规范[M].北京：中国环境出版社，1986.

[8] 国家环境保护总局《水和废水监测分析方法》编委会.水和废水监测分析方法[M].4版.北京：中国环境科学出版社，2002.

[9] 陆慧慧，陆茸.关于国标中氨氮水样保存方法的探讨[J].北方环境，2012，24（3）：169-170.

[10] 徐志标，骆其君，徐继林，等.水样中氮磷营养盐含量的稳定性及保存方法比较研究[J].水产科学，2005（4）：10-14.