正交试验法优选完带汤颗粒的提取工艺研究

王浩骅

【關键词】完带汤颗粒;提取;成型;工艺

【中图分类号】R271.1 【文献标识码】B 【文章编号】1002-8714（2020）06-0004-02

完带汤已入选国家中医药管理局公布的第一批100种古代经典名方目录，是清代名医傅山在《傅青主女科》中为治疗白带所设的名方，“妇人有终年累月下流白物，如涕如唾，不能禁止，甚则臭秽者，所谓白带也。……治法宜大补脾胃之气，稍佐以舒肝之品，使风木不闭塞于地中，则地气自升腾于天上，脾气健而湿气消，自无白带之患矣。方用完带汤”[1]。组方为白术一两（土炒），山药一两（炒），人参二钱，白芍五钱（酒炒），车前子三钱（酒炒），苍术三钱（制），甘草一钱，陈皮五分，黑芥穗五分，柴胡六分，水煎服[2]。据现代学者文献考证，清代1两约合如今的37.3g[3-5]，每处方折合一日饮片为132.8g，日服用剂量较大，宜制成颗粒剂。至今未见有关完带汤颗粒工艺方面的报道，本实验对完带汤颗粒的提取和成型进行了优化，现报道如下。

1 仪器与材料

1.1 仪器与试剂

HS-337电子分析天平（邢台慧思科技有限公司），CAV313C电子分析天平（上海皆准仪器设备有限公司），岛津LC-20高效液相色谱仪（日本岛津），UC-120D超声波清洗器（宁波市双嘉仪器有限公司），DHG型鼓风干燥箱（郑州宏华仪器有限公司）;N-1300Sh-W旋转蒸发仪（上海助乘实业有限公司）。

乙腈、磷酸为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂为分析纯。

1.2 试药

芍药苷对照品（20mg，110736-201842，纯度为97.4%）购自中国食品药品检定研究院，白术等药材饮片均购自济南市建联中药有限公司。

2 方法与结果

2.1 提取样品的制备

按处方比例分别称取白术（土炒）224g，山药（炒）224g，人参45g，白芍（酒炒）112g，车前子（酒炒）67g，苍术（制）67，甘草22g，陈皮13g，黑芥穗13g，柴胡16g，共9份，每份共计802g，加水浸泡40min，提取，各提取液过滤后合并，精密吸取5mL，水浴蒸干，用70%甲醇转移至10mL量瓶中，超声处理30分钟，冷却至室温，用70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2 干膏率的测定

分别精密量取各提取液70mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸至近干后100℃干燥至恒重，放至室温，称重，计算。

2.3 芍药苷含量测定

2.3.1 色谱条件与系统适应性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-0.1%磷酸（15：85）为流动相，检测波长230nm[6]。

2.3.2 对照品溶液制备  取取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含60?g的溶液，即得。

2.3.3 供试品溶液制备  取装量差异项下的本品，研细，取约5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇100mL，按“2.1”项下制备方法，自“水浴蒸干”起制备，即得。

2.3.4 阴性样品溶液制备  按完带汤颗粒提取方法制备不含白芍的阴性样品，方法同“2.1”，即得。

2.3.5 线性与范围  精密称取芍药苷对照品10.28mg（纯度97.4%）置50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液;分别精密量取贮备液2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL、7.0mL置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为芍药苷对照品线性溶液。分别吸取上述对照品线性溶液注入高效液相色谱仪，并记录色谱图，以浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制线性图，回归方程为A=281835C+289201，R2=0.9995;结果芍药苷对照品在40.1～140.2?g/mL浓度范围内，峰面积与浓度线性关系良好。

2.3.6 精密度试验  取芍药苷对照品溶液（65.69?g/mL）注入高效液相色谱仪，连续进样6次，峰面积RSD为1.56%，精密度良好。

2.3.7 重复性试验  取同一批完带汤颗粒样品6份，按“2.3.3”项制备，重复测定6次，结果芍药苷含量的RSD为0.43%，含量测定方法重复性良好。

2.3.8 稳定性试验  取同一完带汤颗粒供试品溶液分别于0h、2h、4h、6h、8h、12h和18h分别进样，记录峰面积，结果芍药苷峰面积RSD为0.52%，完带汤颗粒供试品溶液在18h内稳定。

2.4 水提部分正交试验[7-10]

2.4.1 水提工艺正交试验

按“2.1”项下分别称取完带汤颗粒处方中白术（土炒）等饮片共9份，每份共计802g，参考相关文献，按表1进行正交试验，以干膏率和提取液中芍药苷含量为指标进行优选，因素水平等见下表。

表1   因素水平表

表2   正交实验设计与结果

表3   出干膏率方差分析

表4   芍药苷含量方差分析

从直观及方差分析可知，以提取液中出干膏率为指标时因素A2与A3、C2与C3无区别，可任意选择，B3>B2，应选B3;以提取液中芍药苷含量为指标时A3>A3>A1，B3>B2与B1，C3与C2>C1，C3与C2无区别，可任意选择;从可操作和生产成本等方面综合考虑，最终确定提取工艺A3B3C2（即处方中饮片加8倍量水提取3次，每次50分钟）。

2.4.2 提取验证试验

按“2.1”项下分别称取白术（土炒）等饮片3份，每份共计802g，分别按A3B3C2提取，测定干膏率和芍药苷含量，对提取工艺进行验证。

表5   提取工艺验证试验结果表

结果表明，完带汤的提取工艺（加8倍量水提取3次，每次50分钟）稳定。

2.5 成型工艺研究

2.5.1 润湿剂的选择

本品以水提取，日服剂量处方出干膏较多，在预试验中稠膏制粒时，软材粘性较大，不易制粒，需加入较多的赋形剂，故以干膏粉与赋形剂混合后制粒，分别按完带汤颗粒处方称取白术（土炒）饮片共5份，每份共计802g，加8倍量水提取3次，每次50分钟，合并滤液，滤过，滤液浓缩成清膏后干燥，粉碎成细粉，平均分成5份与辅料混匀，以不同浓度的乙醇为润湿剂制软材，尼龙筛网制粒，75℃干燥，整粒，结果见下表。

表6   润湿剂选择结果

由上表可知，干膏粉与赋形剂混匀后以50%乙醇作润湿剂时，颗粒成型率高，可操作性强，故选择以50%乙醇作润湿剂。

2.5.2 赋形剂的选择：

分别称取白术（土炒）饮片共5份，每份共计802g（6日剂量），制备5份完带汤颗粒干膏粉样品，混匀后平均分成5份，与辅料混匀，制50%乙醇制粒，干燥，整粒。以颗粒的成型率、制粒可操作性为评价指标，结果见下表。

表7   赋形剂选择结果

结果：以可溶性淀粉：糊精=4：5为赋形剂时，与干膏粉混合后制粒，可操作性强，颗粒成型率最佳。

2.6 颗粒中试工艺验证

按完带汤颗粒处方称取白术（土炒）、山药（炒）、人参、白芍（酒炒）、车前子（酒炒）、苍术（制）、甘草、陈皮、黑芥穗和柴胡按优选的工艺进行了3批中试验证，结果见表8。

表8   完带汤颗粒中试表

由上表可知，经3批中试验证，完带汤颗粒的生产工艺稳定。

3 討论

3.1 根据古代经典名方中药复方制剂简化注册审批管理规定第六条：古代经典名方制备方法除成型工艺外，其余制备方法应当与古代医籍记载基本一致，宜用水煎提取[11]，完带汤颗粒以水煎煮、浓缩，干燥粉碎成细粉后制成颗粒剂，既有经典名方的特色也保证了完带汤颗粒的疗效。

3.2 完带汤每日饮片剂量约133g，原方只写明水煎服，经试验，药材加水提取后得干膏率约22.5%，出干膏较多（每剂约出干膏30g），日服用3次，每次服用10g干膏，按颗粒剂的单剂量包装为15g，每次服用2袋g，为减少日服用量故将清膏干燥后与可溶性淀粉、糊精等湿法制成无糖颗粒。

3.3 参照优选的颗粒剂制备工艺，按完带汤颗粒每日处方量的750倍投料，进行了3批中试生产，清膏浓缩干燥后粉碎成细粉与辅料混匀后，以50%乙醇制软材，16目尼龙筛制粒，75℃减压干燥，结果完带汤颗粒剂的生产工艺稳定，适用于生产。

参考文献

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