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复合维生素B中B2含量的快速测定

2020-08-03李伟珍吴定丽吴云妹陈梓云

化工技术与开发 2020年7期
关键词:预测值保健品光谱

李伟珍,吴定丽,王 琪,吴云妹,陈梓云

(嘉应学院化学与环境学院,广东 梅州 514015)

复合维生素B是由维生素B1、维生素B2、维生素B6等多种成分组成的复方制剂,临床上主要用于B族维生素缺乏所引起的营养不良、脚气病等疾病的辅助治疗。维生素B2(核黄素)与人类多种疾病有密切关系,在多种疾病的治疗和辅助治疗中显示出广阔的应用前景。维生素B2应用广泛,一般不会出现不良反应,但不能过量用药,否则会引起瘙痒、灼热、腹痛、血糖异常等症状[1-3]。

市售的复合维生素B产品分为药物和保健品两大类,是补充B类维生素及维生素B2的常见产品。药物类维生素B片常称为复合维生素B片,为复方制剂;保健品类维生素B片常称为B族维生素片,主要成分除含B族维生素预混料外,还含有明胶、香精、矿物质等。这两大类维生素B片产品中的维生素B2含量参差不齐。

目前测定复合维生素B中维生素B2含量的方法有高效液相色谱法、高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法、定量核磁共振法、中红外定量分析法[4-9]等。这些方法的操作较复杂,耗时较长,难以快速完成大批量的药品、食品监测任务。

近红外光谱分析是一种简便、准确、快速、无损、无污染的分析检测技术,近年来在食品分析、药物分析领域应用广泛[10-13]。本文采用近红外技术采集复合维生素B片的漫反射近红外谱图,结合偏最小二乘法,分别建立了药物复合维B片中B2含量的定量分析模型,以及保健品B族维生素片中B2含量的定量分析模型,建立了一种快速检测复合维生素B中B2含量的新方法。

1 实验部分

1.1 实验仪器

Antaris Ⅱ傅里叶变换近红外(FT-NIR)光谱仪,TQ Analyst光谱分析软件,LC-20AT型高效液相色谱仪,SS-01型Super-Shark IR震荡机。

1.2 实验药品及样品

维生素 B2(> 98.0%),甲醇 (GR),冰醋酸 (AR),1-己烷磺酸钠(99%)。实验样品见表1、表2。

1.3 实验方法

1.3.1 高效液相色谱法测定样品中B2的含量

以样品单位片重 (g)中所含的B2质量 (g)来表征B2的含量(%)。

色谱柱:Shimpack VP-ODSC18柱(4.6 mm i.d×150 mm,5 μm);流动相:己烷磺酸钠-甲醇-冰醋酸 (70∶30∶0.5);柱温 30℃ ;流速 1.0mL·min-1;进样量 10 μL;检测波长 267nm。

标准曲线的绘制:取1.5mg维生素B2置于100mL容量瓶中,加超纯水稀释到刻度线,作为对照品储备液。用移液管移取维生素B2储备液0.1、0.2、0.5、0.7、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL 分别置于 10mL棕色容量瓶,以超纯水为溶剂,配制系列浓度的标准溶液,避光操作。以质量浓度(X)为横坐标、色谱峰面积(Y)为纵坐标,做线性回归方程,得到维生素B2的线性回归方程。

表1 复合维生素B药品Tab.1 Multivitamin B drugs

表2 B族维生素保健品Tab.2 B vitamin health products

样品中维生素B2含量的测定:称取50mg样品粉末置于50mL的容量瓶中,用超纯水定容,超声10min,避光操作。每个样品取2个样本,取平均值作为样品中维生素B2的实测值。

1.3.2 样品近红外光谱的采集

光谱测定条件:以空气作背景,用AntarisⅡ傅立叶近红外光谱仪的积分球模块附件采样,设置波数范围为 10000 cm-1~4000 cm-1,扫描次数 64次,分辨率8cm-1,优化增益为1x。

近红外光谱的采集:根据药片大小取6~12片研磨成粉末,分成3份,用振荡机粉碎成粒度更细的粉末(振荡机的转速为4000r·min-1,震荡时间为1min),分别装入3个样品杯中。用积分球漫反射分析模块测定近红外谱图,每份样测5张谱图,每种样品共测得15张样本谱图。13种药物复合维生素B片,共测得195张谱图待用;10种保健品B族维生素片,共测得150张谱图待用。

1.3.3 复合维生素B药品中B2含量的定量分析模型(模型1)

以1.3.1中HPLC法得到的复合维生素药品中B2含量为参比,选择表1中的10批次(样品1~10)为建模的训练集样品。数据类型设置:每个样品任取12张谱图作为训练集样本(共120个),余下3张谱图设为内部验证集样本(共30个)。采用TQ Analyst 9.0软件中的偏最小二乘法(PLS),建立复合维生素药品中B2含量的定量分析模型(模型1)。

1.3.4 B族维生素保健品中B2含量的定量分析模型(模型2)

以1.3.1中HPLC法得到的B族维生素保健品中B2含量为参比,选择表2 中的8批次(样品1~8)为建模的训练集样品。数据类型设置:每个样品中任取12张谱图作为训练集样本(共96个),余下3张谱图设为内部验证集样本(共24个)。采用TQ Analyst 9.0软件中的偏最小二乘法(PLS),建立B族维生素保健品中B2含量的定量分析模型(模型2)。1.3.5 定量分析模型的外部验证

选择表1中未参与建模的样品(样品11~13)为建模的外部验证集,对所建的模型1进行外部验证。选择表2中未参与建模的样品(样品9#~10#)为建模的外部验证集,对所建的模型2进行外部验证。

2 结果与讨论

2.1 样品中B2含量的HPLC分析结果

样品的HPLC分析结果表明,13个批次的复合维生素B药品中,B2的质量百分比在1.83%~2.61%之间。10个批次的B族维生素保健品中,B2的质量百分比在0.025%~2.36%之间。

2.2 复合维生素B药品中B2含量的定量分析模型的建立

按1.3.3的方法建模,对光谱的数据形式、光谱范围、预处理方式进行选择,剔除可疑谱图,通过模型的内部验证、交互验证等方式优化模型,得到复合维生素B药品中B2含量的定量分析模型(模型1)的最佳条件:采用一阶导数光谱数据形式,建模波段 选 在 7364.98 cm-1~7017.52cm-1和 5198.72 cm-1~4424.31cm-1两个波段。模型1的校正均值方差(RMSEC)为0.0510,校正相关系数Rc为0.9768,样品预测均值方差(RMSEP)为0.0310,预测相关系数Rp为0.9826。模型1的性能指数为85.5,模型1见图1。

图1 复合维生素B药品中B2的模型预测值与HPLC测定值(模型1)Fig.1 Model prediction value and HPLC measurement value of B2 in multivitamin B drugs (Model 1)

2.3 B族维生素保健品中B2含量的定量分析模型的建立

按1.3.4的方法建模,对光谱的数据形式、光谱范围、预处理方式等进行选择,剔除可疑谱图;通过模型的内部验证、交互验证等方式优化模型,得到B族维生素保健品中B2含量的定量分析模型(模型2)的最佳条件:采用一阶导数光谱数据形式,建模波 段 选 在 8923.63 cm-1~8122.40 cm-1、6738.06 cm-1~5787.01 cm-1、5359.9 cm-19~4638.48 cm-1、4497.18 cm-1~4466.65cm-1等4个波段。模型2的校正均值方差(RMSEC)为0.0576,校正相关系数Rc为0.9976,样品预测均值方差(RMSEP)为0.0631,预测相关系数Rp为0.9972。模型2的性能指数为90.2,模型2见图2。

2.4 模型的外部验证

按1.3.5的方法对模型1和模型2进行外部验证,得到样品中B2含量的预测值,并计算绝对误差和相对误差,结果见表3、表4。

图2 B族维生素保健品中B2的模型预测值与HPLC测定值(模型2)Fig.2 Model prediction value and HPLC measurement value of B2 in B vitamin health products (Model 2)

表3的数据显示,复合维生素B药品中B2含量的定量分析模型(模型1)的预测值,与HPLC测定值的绝对误差为-0.10%~0.13%,相对误差为-4.66%~6.28%。表4的数据显示,B族维生素保健品中B2含量的定量分析模型(模型2)的预测值,与HPLC测定值的绝对误差为-0.01%~0.11%,相对误差为-3.22%~5.42%。

表3 模型1的预测值及其与HPLC测定值的误差Tab.3 The predicted value of model 1 and its error with the measured value of HPLC

表4 模型2的预测值及其与HPLC测定值的误差Tab.4 The predicted value of model 2 and its error with the measured value of HPLC

模型1和模型2的外部验证结果表明,模型1和模型2的预测准确性均较高,都可以用于快速检测复合维生素B药品或B族维生素保健品中维生素B2的含量。

3 结论

以高效液相色谱法为测定样品中B2含量的参比方法,采集样品的近红外光谱,用TQ Analyst软件,选用偏最小二乘法(PLS),建立了复合维生素B药品中B2含量的定量分析模型,以及B族维生素保健品中B2含量的定量分析模型。实际应用时,仅需把采集的近红外光谱导入模型,即可快速得到结果。由此建立了准确、快速、简便地检测复合维B中B2含量的新方法。

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