宫颈高危型人乳头瘤病毒感染与阴道微生态及局部细胞免疫的关系

唐清华　李艳萍

[摘要] 目的 探究宫颈高危型人乳头瘤病毒（HPV）感染与阴道微生态及局部细胞免疫的关系。 方法 选取2017年2月～2019年6月昆明市妇幼保健院因宫颈炎就诊的女性患者218例为研究对象。所有患者均行高危型HPV检查，根据结果将其分为观察组（n = 80，高危型HPV阳性者）、对照组（n = 138，高危型HPV阴性者）。比较两组阴道微生态失调的情况及宫颈局部细胞免疫情况， Pearson相关性分析分析宫颈高危型HPV感染与阴道微生态及局部细胞免疫的关系。 结果 共检测出高危型HPV感染患者80例，阳性率为36.70%（80/218），其中以HPV16的檢出率最高（52.50%），其次是HPV52（22.50%）。观察组阴道微生态失调、支原体、解脲脲原体、衣原体、乳酸杆菌异常率、细菌性阴道炎发生率均高于对照组（均P < 0.05）。观察组CD4+、CD4+/CD8+均低于对照组（P < 0.05）。高危型HPV感染与宫颈局部CD4+、CD4+/CD8+呈负相关（r = -0.453、-0.421，P < 0.05），与细菌性阴道炎、衣原体、乳酸杆菌、解脲脲原体呈正相关（r = 0.432、0.525、0.504、0.472，P < 0.05）。 结论 宫颈高危型HPV感染与阴道微生态及局部细胞免疫息息相关，可加重患者的阴道微生态紊乱，降低患者局部细胞免疫功能。

[关键词] 高危型人乳头瘤病毒;阴道微生态;宫颈;局部细胞免疫;关系

[中图分类号] R737.33          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2020）06（c）-0107-04

[Abstract] Objective To investigate the relationship between high risk human papillomavirus （HPV） infection and vaginal microecology and local cellular immunity. Methods From February 2017 to June 2019， 218 female patients with cervicitis who came to Kunming Maternal and Child Health Hospital were selected as the study subjects. All patients were tested for high risk HPV examination， according to the results， they were divided into observation group （n = 80， high risk HPV positive）， control group （n = 138， high risk HPV negative）. The vaginal microecology disorders and cervical local cell immunity were compared between two groups. Pearson correlation analysis was used to analyze the relationship between cervical high risk HPV infection and vaginal microecology and cervical local cellular immunity. Results Eighty cases were found to be high risk HPV infection， the positive rate was 36.70% （80/218）， among which HPV16 was the highest （52.50%）， followed by HPV52 （22.50%）. The vaginal microecology disorder， mycoplasma， ureaplasma urealyticum， chlamydia， lactobacillus abnormal rate and bacterial vaginitis rate in observation group were higher than those in control group （P < 0.05）. CD4+， CD4+/CD8+ in observation group were lower than those in control group （P < 0.05）. High risk HPV infection was negatively correlated with CD4+， CD4+/CD8+ （r = -0.453，-0.421， P < 0.05）， while positively correlated with bacterial vaginitis， chlamydia， lactobacillus and ureaplasma urealyticum （r = 0.432，0.525， 0.504，0.472， P < 0.05）. Conclusion Cervical high risk HPV infection is closely related to vaginal microecology and cervical local cellular immunity， which can aggravate the disorder of vaginal microecology and reduce the local cellular immune function of patients.

[Key words] High risk human papillomavirus; Vaginal microecology; Cervix; Local cellular immunity; Relationship

宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一，早期常无症状体征，但伴随疾病的进一步发展，患者将会出现阴道流血、排液的情况，晚期可引起贫血、恶病质等全身衰竭表现，预后较差[1]。宫颈癌的发病过程极为漫长，多始于慢性炎症，逐步进展为上皮内瘤变，最终进展为宫颈癌[2]。宫颈癌病因明确，主要是由于高危型人乳头瘤病毒（HPV）的感染[3]。故临床多通过筛查高危型HPV以预防宫颈癌的发生。但现阶段研究认为，高危型HPV感染后，并非所有患者会发展为宫颈癌。多数患者依靠自身强大的免疫清除作用可消除高危型HPV感染，只有少部分患者无法自行清除而成为持续感染者，此类群体才易成为宫颈癌的高发群体[4-5]。另有研究显示，宫颈癌的发生还需要一些协同因素的刺激[6-7]。女性的阴道主要由阴道菌群、生理结构及免疫功能组成，具有抵抗感染及抑制炎性反应等作用[8-9]。因此，本研究分析宫颈高危型HPV感染与阴道微生态及局部细胞免疫的关系，以期为临床宫颈癌的防治提供数据支撑。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2017年2月～2019年6月昆明市妇幼保健院因宫颈炎就诊的218例女性患者的临床资料。纳入标准：①宫颈炎诊断标准参考《新编实用妇科学》[10]，宫颈管伴持续出血，或棉拭子有脓性黏液/脓性分泌物;②月经及性生活均正常者;③临床资料齐全者;④患者及其家属均签署同意书;⑤均为单一感染者。排除标准：①全子宫切除者;②合并免疫缺陷、急慢性感染史者;③合并其他恶性肿瘤者;④合并严重心肺肾等脏器功能不全者;⑤入组前1个月接受宫颈疾病治疗者;⑥入组前2周内服用抗菌、抗病毒药物者;⑦妊娠及哺乳期女性。

所有患者均行高危型HPV检查，根据检查结果将其分为观察组（n = 80，高危型HPV阳性者）、对照组（n = 138，高危型HPV阴性者）。其中对照组年龄26～55岁，平均（38.62±3.42）岁;体重指数20.6～25.8 kg/m2，平均（23.07±1.08）kg/m2。观察组年龄25～54岁，平均（38.59±2.96）岁;体重指数20.2～26.3 kg/m2，平均（23.11±1.16）kg/m2。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 高危型HPV检测  检查前3 d无阴道冲洗、用药、性生活，取扩阴器以暴露宫颈，于宫颈管内用无菌棉拭子顺时针旋转3周，放置于专用细胞保存液内待检。宫颈细胞液经13 000 r/min离心2 min，离心半径8 cm，取上清液，采用亚能生物HPV分型检测试剂盒（生产批号：20170112）检测，包括HPV68、59、58、56、52、51、45、39、35、33、31、18、16共13种高危型。实验步骤按照试剂盒说明书进行。

1.2.2 宫颈局部细胞免疫检测  取扩阴器以暴露宫颈，于宫颈管内用无菌棉拭子顺时针旋转3周，放置于盛有1 mL生理盐水的无菌EP管内，经1500 r/min离心10 min，离心半径8 cm，弃上清，随后加入生理盐水2 mL重悬下层细胞，放置于含肝素的抗凝管中，采用流式细胞仪（美国BD公司，FACS Calibur型）检测CD4+、CD8+，计算CD4+/CD8+。

1.2.3 阴道微生态检测  取3支无菌长棉签，于患者阴道侧壁刮取分泌物，1支滴10%氢氧化钾溶液，查看是否有氨气味;1支放置于盛有生理盐水的无菌管内用于检测支原体、滴虫、解脲脲原体及衣原体感染;1支用于制作涂片，用革兰染色，观察阴道内线索细胞、乳酸杆菌及霉菌的分布情况。

1.2.4 阴道微生态平衡检测  取1支无菌长棉签，于患者阴道侧壁刮取分泌物，采用阴道微生态联合测定试剂盒（山东仁智生物科技有限公司，生产批号：20161220）進行检测，包括白细胞酯酶（LE）、唾液酸苷酶活性（SNA）、过氧化氢（H2O2）三项。SNA显红色或紫色，H2O2<2 mmol/L呈蓝色，LE显绿色或蓝色为阳性。三者均为阴性者提示阴道微生态环境正常，出现一项阳性者则提示阴道微生态失调。

1.3 统计学方法

采用SPSS 25.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验;计数资料用百分率表示，组间比较采用χ2检验。宫颈高危型HPV感染与阴道微生态及局部细胞免疫的关系分析采用Pearson相关性分析。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 观察组高危型HPV感染情况

218例患者中，高危型HPV感染患者80例，阳性率为36.70%（80/218）。其中以HPV16的检出率最高，为52.50%（42/80）;其次为HPV52，检出率为22.50%（18/80）;HPV18检出率为10.00%（8/80）;HPV31检出率为7.50%（6/80）;HPV33检出率为5.00%（4/80）;HPV51检出率为1.25%（1/80）;HPV58检出率为1.25%（1/80）。

2.2 两组阴道微生态情况比较

两组滴虫、线索细胞、霉菌发生率比较，差异无统计学意义（P > 0.05）;观察组阴道微生态失调、支原体、解脲脲原体、衣原体、乳酸杆菌异常率、细菌性阴道炎发生率均高于对照组，差异均有统计学意义（均P < 0.05）。见表1。

2.3 两组局部细胞免疫情况比较

观察组CD4+、CD4+/CD8+低于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）;两组CD8+比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表2。

2.4 高危型HPV感染与阴道微生态及局部细胞免疫的相关性分析

高危型HPV感染与宫颈局部CD4+、CD4+/CD8+呈负相关（P < 0.05）;与细菌性阴道炎、乳酸杆菌、衣原体、解脲脲原体呈正相关（P < 0.05）;与支原体、滴虫、线索细胞、霉菌、CD8+、阴道微生态失调无相关性（P > 0.05）。见表3。

3 讨论

HPV通过感染、整合、癌变参与宫颈病变的发生、发展，此类观点已获得国内外学者的一致认同[11-13]。现全球范围内并没有有效清除HPV感染的药物，虽然已有HPV疫苗在临床取得了一定疗效，但现有的HPV疫苗药效时间较短，其长期预防效果仍未达到理想预期[14-15]。因此，如何有效避免或减少HPV感染，对预防宫颈癌的发生具有积极临床意义。随着对宫颈癌的深入研究，不少学者发现，较多HPV感染患者在发生宫颈癌前病变类疾病后可自行转归，并未发展为宫颈癌，只有少部分持续HPV感染患者才易成为宫颈癌的高危发病群体[16-20]。这使得研究人员得出HPV感染并非导致宫颈癌的唯一因素，其发病过程同样伴随着其他未知因素。在HPV感染的过程中，阴道微生态环境的改变作用重大。阴道内有多种微生物存在，与机体生理结构、免疫功能、内分泌调节功能组成阴道微生态环境，构成一个独特、动态的体系。当其处于失衡状态时，机体局部免疫功能降低，提高HPV感染的敏感性[21]。

既往研究显示[22]，有40多种HPV会引起生殖道的感染，高危型感染诱发宫颈癌，而低危型感染则多诱发尖锐湿疣等疾病。本研究结果显示，高危型HPV阳性率为36.70%（80/218），其中以HPV16的检出率最高，其次为HPV52。崔艳双等[6]研究结果显示，高危型HPV阳性率为39.2%，以HPV16的检出率最高，与本研究结果基本一致。维持阴道微生态的平衡是保障女性生殖道健康的关键，当其平衡被打破時，会促使厌氧菌大量生长，进而诱导宫颈细胞学发生变化。本研究结果显示，观察组阴道微生态失调、支原体、解脲脲原体、衣原体、乳酸杆菌异常率、细菌性阴道炎发生率均高于对照组（P < 0.05），可见宫颈高危型HPV感染者其存在阴道微生态失衡情况，乳酸杆菌是微生态系统中的优势菌群，不仅能抑制病原体的入侵、生殖道肿瘤的发生，还可激活黏膜免疫系统。当宿主感染HPV时，抑制机体细胞乳酸杆菌的生长，导致衣原体、厌氧菌等致病微生物大量繁殖，进而加速宫颈上皮细胞的突变，最终增加宫颈癌变的风险[23-24]。根据表面抗原可将T细胞分为CD4+、CD8+两种，CD4+主要参与炎性反应，CD8+参与抗肿瘤免疫应答，CD4+/CD8+可以反映机体细胞免疫调节与炎性反应的平衡状态[25]。本研究结果显示，观察组CD4+、CD4+/CD8+低于对照组（P < 0.05），可见宫颈高危型HPV感染者均存在一定程度的细胞免疫功能降低，宿主对HPV感染以局部免疫应答为主，当存在持续感染时，局部免疫功能降低。相关性分析结果显示，高危型HPV感染与宫颈局部CD4+、CD4+/CD8+呈负相关，与细菌性阴道炎、衣原体、乳酸杆菌、解脲脲原体感染阳性呈正相关。可见宫颈高危型HPV感染与阴道微生态及局部细胞免疫息息相关，后续可考虑成为临床防治宫颈癌病变的新靶点。

综上所述，宫颈高危型HPV感染与阴道微生态及局部细胞免疫息息相关，可加重患者阴道微生态紊乱，降低患者局部细胞免疫功能。

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（收稿日期：2019-11-06  本文编辑：刘明玉）