5′-NT及其与ALT联合检测在鉴别ALP升高的恶性肿瘤骨转移中的价值

崔婵娟 高佳 李佳 于梦瑶 张浩 崔巍

[摘要] 目的 研究血清5′核苷酸酶（5′-NT）及其與丙氨酸氨基转移酶（ALT）联合检测在鉴别血清碱性磷酸酶（ALP）升高的恶性肿瘤骨转移中的价值。 方法 选取2018年12月～2019年8月中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院就诊恶性肿瘤患者176例。其中血清ALP水平升高但无骨转移患者88例为ALP升高肝癌组;血清ALP水平升高但其余肝功能指标均正常的骨转移患者88例为ALP升高恶性肿瘤骨转移组;同期选取健康志愿者50名为正常对照组。测定三组血清5′-NT及ALT水平。 结果 ALP升高肝癌组5′-NT阳性率高于ALP升高恶性肿瘤骨转移组（P < 0.01），ALP升高肝癌组血清5′-NT水平高于ALP升高恶性肿瘤骨转移组及正常对照组（P < 0.01）。血清5′-NT或ALT水平升高为ALP升高恶性肿瘤患者骨转移的保护因素。5′-NT判断ALP升高为恶性肿瘤骨转移的曲线下面积（AUC）为0.966，当临界值<5.6 U/L，灵敏度为90.91%，特异性为89.77%;5′-NT联合ALT检测时AUC为0.980，特异度可提高至96.49%。 结论 5′-NT及ALT联合检测在鉴别ALP升高的恶性肿瘤骨转移中具有一定的临床价值。

[关键词] 5′核苷酸酶;碱性磷酸酶;肿瘤;骨转移

[中图分类号] R730.4          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2020）06（b）-0109-04

The value of serum 5′-nucleotidase and its combination with alanine aminotransferase in identifying bone metastases in cancer patients with elevated ALP

CUI Chanjuan   GAO Jia   LI Jia   YU Mengyao   ZHANG Hao   CUI Wei▲

Department of Laboratory Medicine， National Cancer Center  National Clinical Research Center for Cancer  Cancer Hospital， Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College， Beijing   100021， China

[Abstract] Objective To explore the value of serum 5′-nucleotidase （5′-NT） and its combination with alanine aminotransferase （ALT） in identifying bone metastases in cancer patients with elevated alkaline phosphatase （ALP）. Methods A total of 176 cancer patients who enrolled from Cancer Hospital， Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College from December 2018 to August 2019 were selected. Among them， 88 cases with elevated ALP but without bone metastasis were named the liver cancer with elevated ALP group; other 88 cases with bone metastasis and elevated ALP but normal liver function were named the cancer with bone metastasis and elevated ALP group; 50 healthy volunteers were named the normal control group at the same time. The levels of serum 5′-NT and ALT were detected in three groups. Results The positive rate of 5′-NT in the liver cancer with elevated ALP group was higher than that in the cancer with bone metastasis and elevated ALP group （P < 0.01）. The serum levels of 5′-NT in liver cancer with elevated ALP group were higher than those in the cancer with bone metastasis and elevated ALP group and the normal control group （P < 0.01）. The increased serum 5′-NT or ALT levels were protective factors for bone metastases in cancer patients with elevated ALP. The area under the curve （AUC） of 5′-NT to judge the elevation of ALP to malignant tumor bone metastasis was 0.966， and the sensitivity was 90.91% and the specificity was 89.77% when the critical value was < 5.6 U/L. The AUC of 5′-NT combined with ALT was 0.980， and the specificity was increased to 96.49%. Conclusion The combined detection of 5′-NT and ALT has a certain clinical value in differentiating bone metastases of malignant tumors with elevated ALP.

[Key words] 5′-nucleotidase; Alkaline phosphates; Cancer; Bone metastases

恶性肿瘤骨转移居全身转移性肿瘤第三位[1]。骨转移临床诊断常采用影像学检查，但有辐射伤害，且费用高。近年来，人们越来越关注实验室指标的作用。血清碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性升高主要来源于肝脏和骨骼[2]。如何简便、快速鉴别恶性肿瘤患者血清中ALP升高的来源是目前临床上亟待解决的问题。有研究报道[3]，与ALP比较，血清中骨型碱性磷酸酶（serum bone specific alkaline phosphates，sBAP）能更好地反映骨代谢，但sBAP在鉴别肿瘤骨转移的敏感度仅为40%～80%，特异性仅为75%～90%[4-5]。5′核苷酸酶（5′-NT）是一种磷酸酶，血清中该酶活性升高仅来源于肝胆组织，而骨骼系统疾病一般不升高[2]。因此本研究探讨5′-NT及其与丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）联合在鉴别诊断ALP升高的恶性肿瘤骨转移中的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年12月～2019年8月中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院（以下简称“我院”）就诊恶性肿瘤患者176例。其中血清ALP水平升高但无骨转移患者88例为ALP升高肝癌组，男61例，女27例;年龄21～81岁，平均（57±11）岁;血清ALP水平升高但其余肝功能指标均正常的骨转移患者88例为ALP升高恶性肿瘤骨转移组，男51例，女37例;年龄29～87岁，平均（58±11）岁。此外，选取我院体检中心就诊的健康志愿者50名为正常对照组，男29例，女21例，年龄34～78岁，平均（54±10）岁。三组一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会批准，受试者均为自愿，均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂  Cobas e702全自动生化分析仪器（ROCHE）;ALT和ALP试剂均由上海罗氏诊断产品有限公司提供;5′-NT（批号：2019010901）由威尚生物技术（合肥）有限公司提供。

1.2.2 样本采集  采用带有惰性分离胶真空采管（BD Vactutainer）抽取受试者清晨空腹外周静脉血4 mL，3846×g离心10 min，4 h内完成检测或-80℃冻存备用。

1.2.3 检测方法  Cobas e702全自动生化分析仪检测5′-NT、ALT和ALP水平。5′-NT检测方法：5′-次黄嘌呤核苷酸在5′-NT、嘌呤核苷磷酸化酶及氧化酶等作用下，生成尿酸和过氧化氢（H2O2），H2O2与4-氨基安替比林在过氧化物酶作用下生成醌亚胺，通过测定醌亚胺吸光度变化计算5′-NT活性。ALT检测方法：L-丙氨酸和2-酮戊二酸在ALT催化下生成丙酮酸，丙酮酸与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）在乳酸脱氢酶催化下生成L-乳酸以及NAD+，通过测定NADH吸光度变化计算ALT活性。ALP检测方法：磷酸对硝基苯酯经ALP酶解为磷酸和对硝基苯酚，通过测定对硝基苯酚吸光度变化计算ALP活性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 16.0统计学软件进行数据分析，Kolmogorov-Smirnov test进行正态分布检验，不符合正态分布的计量资料用中位数（M）和四分位间距（P25，P75）表示;三组5′-NT水平比较用Kruskal-Wallis秩和检验，组间两两比较用Mann-Whitney U检验;相关性分析用Pearson相关分析;logistic回归用于ALP升高恶性肿瘤骨转移因素分析。采用受试者工作特征曲线（ROC）分析血清5′-NT及ALT判断ALP升高恶性肿瘤骨转移的效能。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组血清5′-NT水平比较

ALP升高肝癌组血清5′-NT水平为15.10（9.75～24.00）U/L，ALP升高恶性肿瘤骨转移组为2.10（1.78～2.50）U/L，正常对照组为2.60（2.10～3.50）U/L。ALP升高肝癌组血清5′-NT水平高于ALP升高恶性肿瘤骨转移组及正常对照组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）;ALP升高肝癌组血清5′-NT阳性率（73.86%）高于ALP升高恶性肿瘤骨转移组（3.41%），差异有高度统计学意义（P < 0.01）。见图1。

2.2 血清5′-NT与ALP相关性分析

血清5′-NT与ALP呈正相关（r = 0.910，P < 0.05）。见图2。

2.3 血清5′-NT和ALT判断ALP升高恶性肿瘤患者骨转移的效能

2.3.1 发生骨转移恶性肿瘤类型比例  骨转移肿瘤类型包括肺癌39例（44.32%）、结直肠癌4例（4.55%）、前列腺癌17例（19.32%）、乳腺癌21例（23.86%）、肾癌2例（2.27%）、宫颈癌1例（1.14%）、骨肿瘤2例（2.27%）、胃癌2例（2.27%）。

2.3.2 ALP升高恶性肿瘤患者骨转移的因素分析  血清5′-NT及ALT水平增高为ALP升高恶性肿瘤患者骨转移的保护因素。见表1。

2.3.3 血清5′-NT和ALT判断ALP升高恶性肿瘤患者骨转移的效能  5′-NT判断ALP升高为恶性肿瘤骨转移的曲线下面积（AUC）为0.966，当临界值<5.6 U/L时，灵敏度为90.91%，特异性为89.77%;ALT判断ALP升高為恶性肿瘤骨转移的AUC为0.854，当临界值<28 U/L时，灵敏度为87.50%，特异性为71.60%;5′-NT联合ALT检测时AUC为0.980。见图3，表2。

3 讨论

据统计，65%～85%恶性肿瘤患者存在不同程度的骨转移[6-8]，已诊断的骨转移远低于实际发病率[8]。骨转移严重威胁患者生命。由于骨活检和影像学检查存在一些缺点，因此，人们越来越关注实验室指标的作用。血清ALP主要用于辅助诊断肝胆和骨骼系统疾病。临床上很多恶性肿瘤易发生骨转移（如前列腺癌、乳腺癌），尤其是晚期患者[9-11]。如何简便、快速鉴别恶性肿瘤患者血清ALP升高的来源是目前临床亟待解决的问题。

血清5′-NT活性升高仅来源于肝胆组织[2，12-13]。本研究结果显示， ALP升高肝癌组5′-NT阳性率高于ALP升高恶性肿瘤骨转移组，且血清5′-NT水平显著高于ALP升高恶性肿瘤骨转移组和正常对照组（P < 0.01）。該结果与Raghavendra等[14]研究结果相似。提示血清5′-NT可更好鉴别血清ALP升高的恶性肿瘤骨转移患者。5′-NT与ALP活性升高均可见于胆道梗阻、胆汁淤积等情况[1，15]，因此，本研究亦显示这两种酶呈显著相关性。回归分析显示血清5′-NT及ALT水平增高为ALP升高恶性肿瘤患者骨转移保护因素。5′-NT及ALT均是与肝胆系统疾病相关的指标[16-19]，但与ALT比较，血清5′-NT判断ALP升高恶性肿瘤骨转移的灵敏度和特异性更高。有研究显示[20]，骨显像判断恶性肿瘤骨转移患者的灵敏度可达95.4%，特异性为87.5%。本研究中血清5′-NT判断恶性肿瘤骨转移患者的灵敏度和特异性与骨显像结果相似[18]。5′-NT与ALT联合检测时，其诊断效能可进一步提高。

本研究局限性：本研究仅进行横向比较。对于ALP升高的肝癌骨转移患者以及因放化疗等导致肝损伤的肿瘤骨转移患者仍需影像学来进一步鉴别。

综上所述，血清5′-NT与ALT联合检测在鉴别血清ALP升高恶性肿瘤骨转移中具有一定的临床价值，并且无辐射，无创伤，便于对病情动态监测。

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（收稿日期：2019-11-06  本文編辑：刘明玉）