巨幼红细胞性贫血患者血浆维生素B9和维生素B12水平对骨髓组织p53表达的影响研究

张 蓉，李国辉，王 颖，刘 赞，赵会迎，梁英民

（1.西安高新医院血液科,西安 710065；2.空军军医大学唐都医院血液科，西安 710038）

巨幼红细胞性贫血(megaloblastic anemia,MBA)又称巨细胞性贫血，其特征是红细胞数量减少，以及存在体积异常和发育不良的红细胞(巨母细胞)。由于该类红细胞体积较大，无法进入血液循环[1]。MBA主要与叶酸(VB9)或维生素B12(VB12)的缺乏相关，具体而言，由于抑制前红细胞DNA的合成和诱导细胞凋亡，从而阻碍向网织红细胞的转化，最终导致全血细胞的减少[2-3]。然而诱导细胞凋亡的关键因子之一是p53，其可以通过保护DNA和核苷酸以发挥维持遗传物质的完整性的作用[4]。因此，本研究旨在探究MBA患者血浆中VB9和VB12水平对p53表达的影响。现报道如下。

1 材料和方法

1.1 研究对象 选择2015年3月～2018年5月西安高新医院68例MBA患者为病例组，另选取同期68例健康者为对照组。两组的一般资料差异无统计学意义(P＞0.05)。所有研究对象均自愿参加且签署知情同意书，本研究经由我院医学伦理委员会批准。

纳入标准：参照WHO中关于巨幼红细胞性贫血的诊断标准[5]，确诊为MBA者。

排除标准：精神疾病者、全身免疫性疾病者、并发恶性肿瘤者。

1.2 仪器与试剂 采用同型半胱氨酸测定试剂盒(bsk00589，博奥森)，VB9测定试剂盒（JL47806，江莱生物），VB12测定试剂盒（JL11843，江莱生物)分别对血浆中同型半胱氨酸浓度(2.5～80μmol/L)，VB9(5.00～5.90ng/ml)和VB12(124.00～201.00pg/ml)进行测定。采用免疫组化法分析骨髓标本石蜡包埋块p53的表达情况，具体操作步骤严格按照说明书进行[6]。

1.3 方法 探究两组VB9和VB12的分布情况。

比较p53在不同程度VB9和VB12分布中的表达水平。免疫组化结果按照染色强度进行判断，轻度染色表示着色细胞阳性率＜10%；中度染色表示着色细胞阳性率10%～50%；重度染色表示着色细胞阳性率＞50%。未染色和轻度染色视为结果阴性，中度和重度染色视为结果阳性。

比较两组间同型半胱氨酸的含量和分布情况。

低VB9和VB12的MBA患者同型半胱氨酸的含量与p53表达的相关性。

1.4 统计学分析 采用SPSS 18.0统计学分析软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差（±s）表示，计数资料以n(%)表示。两组间比较采用Student’st检验。采用线性回归分析两连续变量之间的线性关联性。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者一般情况及VB9，VB12及p53水平比较 见表1。对照组VB9，VB12及p53水平均高于病例组,差异有统计学意义（P＜0.05）。

表 1 病例组及对照组VB9，VB12及p53水平比较（±s）

表 1 病例组及对照组VB9，VB12及p53水平比较（±s）

项 目 病例组 对照组 t P VB9(ng/ml) 5.28±0.36 5.73±0.45 -6.44 ＜0.000 1images/BZ_19_1737_824_1741_824.pngVB12(pg/ml) 144.51±28.17 176.33±31.54 -6.20 ＜0.000 1 p53(%) 43.21±4.47 13.16±2.39 48.89 ＜0.000 1

2.2 两组患者VB9和VB12分布情况比较 见图1。在VB9和VB12含量均偏低时，病例组患者的分布频数显著高于对照组(t=4.847，P＜0.05)。在VB9和VB12含量均正常时，对照组的分布频数明显高于病例组(P＜0.05)。两组间低VB9和正常VB12，正常VB9和低VB12的分布频数比例相当，差异不具有统计学意义(P＞0.05)。

图1 两组VB9和VB12分布情况比较

2.3 p53在不同程度VB9和VB12分布中的表达水平比较 见图2。在VB9含量偏低且VB12含量正常时，对照组中细胞p53表达未染色和轻度染色的比例显著高于中、重度染色的比例(P＜0.05)。在VB9和VB12含量均偏低时，病例组细胞p53表达中、重度染色的比例显著高于未染色和轻度染色的比例，并且与其余两组病例组的差异具有统计学意义(t=7.551，P＜0.05)。

图2 p53在不同程度VB9和VB12分布中的表达水平比较

2.4 两组患者同型半胱氨酸的含量和分布情况 见图3。病例组的同型半胱氨酸含量为43.21µmol/L，且同型半胱氨酸患者分布比例为80%，对照组的同型半胱氨酸含量为13.16µmol/L，且同型半胱氨酸分布比例为20%，两组间的差异具有统计学意义(t=4.226，P＜0.05)。

图3 比较两组间同型半胱氨酸的含量和分布情况

2.5 低VB9和VB12的MBA患者同型半胱氨酸含量与p53表达的相关性 见图4。由2.2结果可知，在VB9和VB12含量均偏低时病例组患者的分布频数可达75%，因此接下来探究在这种类型患者中同型半胱氨酸含量与p53表达比例的相关性，结果显示两者之间呈现正相关性(Y=0.655X+12.42，r=0.661)。

图4 低VB9和VB12的MBA患者同型半胱氨酸的含量与p53表达的相关性

3 讨论

MBA的特征是红细胞数量减少，以及存在体积异常和发育不良的红细胞(巨母细胞)，其主要是由VB9和VB12的缺乏所致[7]。同型半胱氨酸水平是血浆中低VB9和VB12的指示剂[8]。

本研究探究两组VB9和VB12的分布情况，结果显示在VB9和VB12含量均偏低时，病例组患者的分布频数显著高于对照组(P＜0.05)。在VB9和VB12含量均正常时，对照组的分布频数明显高于病例组(P＜0.05)，这可再次验证上述说法。

本研究比较p53在不同程度VB9和VB12分布中的表达水平，结果显示在VB9和VB12含量均偏低时，病例组细胞p53表达中、重度染色的比例显著高于未染色和轻度染色的比例，并且与其余两组病例组的差异具有统计学意义(P＜0.05)，可能存在的作用机制是：p53作为修复受损DNA第一线，它是细胞核DNA的主要保护因子，保护细胞DNA免受各种损伤，它通过触发细胞凋亡来消除受损的细胞[9-11]。因而可在MBA细胞中发现p53的高表达，这可能是对低水平VB9和VB12引起的细胞损伤的一种反馈性应答机制[12-15]。

本研究比较两组间同型半胱氨酸的含量和分布情况，结果显示病例组的同型半胱氨酸含量为43.2µmol/L且同型半胱氨酸患者分布比例为80%，对照组的同型半胱氨酸含量为13.1µmol/L时同型半胱氨酸分布比例为20%，两组间的差异具有统计学意义(P＜0.05)。

最后，本研究探究低VB9和VB12的MBA患者同型半胱氨酸的含量与p53表达的相关性，结果表明在MBA患者中两者呈正相关(Y=0.655X+12.42，r=0.661)。

综上所述，本研究发现在MBA病例中VB9和VB12低水平,并伴随同型半胱氨酸和p53的高表达。因此，测定贫血患者中p53的表达可能有助于MBA的诊断。但是由于本研究中样本量较小，实验结果可能存在偏颇，后续研究仍将继续围绕此类课题更深入、全面的开展。