瑶药冻你美的生药鉴别

龙 莉 黄琳芸 黄瑞松

广西国际壮医医院,广西 南宁 530219

瑶语所称“冻你美”或“巴腩美”，民间也称为“母猪藤”，俗名红冻你美、母猪菜、五叶藤、止血藤等。植物来源为葡萄科植物乌蔹莓Cayratiajaponica(Thunb.) Gagnep.，广西金秀、恭城瑶族民间多以全草作为药材使用。瑶医认为，冻你美味酸、苦，性寒；属风药，具有清热利湿、解毒消肿、活血止血、利尿的作用，主要用于治疗肺痈、肺痨咯血、尿路感染、血尿、尿浊、黄疸肝炎、痛症、无名肿毒、腮腺炎及风湿骨痛、痢疾、跌打损伤、骨折、痈肿疮疖、无名肿毒、乳痈[1～2]。近年来研究表明，冻你美含黄酮类、内脂类、香豆素类和咖啡酸类等多种成分[3]。但有关其生药鉴别的方法目前未见有报道，给临床用药造成一定的混乱。为科学辨别瑶药冻你美药材的真伪，确保其临床用药的安全有效，本研究对瑶冻你美进行了药材生药学方面的研究，建立了该药材性状、显微和薄层鉴别的方法，为该药材质量标准的制订提供了技术支撑。

1 材料与仪器

1.1 材料 样品采自南宁市武鸣区、靖西市城区等地区，样品信息表见表1。所用样品经我院黄瑞松主任药师、广西中医药大学韦松基教授、广西中医药研究院黄云峰副研究员鉴定，为葡萄科植物乌蔹莓Cayratiajaponica(Thunb.) Gagnep.

表1 12批冻你美样品采集信息

1.2 仪器 徕卡切片机(德国)、摇摆式粉碎机(浙江)、尼康高级生物显微镜及视频成像装置(日本)、数控超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)、紫外分析摄影仪(武汉药科新技术开发有限公司)。

1.3 试剂 稀甘油(广东光华科技股份有限公司)、水合氯醛(天津市大茂化学试剂厂)、无水乙醇(国药集团化学试剂有限公司)、二甲苯(国药集团化学试剂有限公司)、石蜡(国药集团化学试剂有限公司)、藏红T(国药集团化学试剂有限公司)、固绿(国药集团化学试剂有限公司)、中性树胶(中国上海标本模型厂)，薄层所用化学试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 性状鉴别 通过看、摸、闻、尝及水试、火试的直观方法观察药材的形状、大小、色泽、表面、质地、气、味等特征。通过对11批药材进行观察，药材性状为根圆柱形，扭曲，直径可达2～3 cm，表面棕褐色至黑褐色，有纵皱纹，质疏松，易折断，断面浅白色至黄白色。茎圆柱形，有纵棱纹，绿色至黄绿色，有分支，质轻脆易折断，折断面髓部明显，类白色，海绵状或中空。卷须二岐分叉，与叶对生。叶皱缩易碎，深绿色或黄绿色，完整者展平后呈鸟足状5小叶，中央小叶长椭圆形或椭圆披针形，长2.5～4.5 cm，宽1.5～4.5 cm，侧生小叶椭圆形或长椭圆形，长1～7 cm，宽0.5～3.5 cm，边缘具疏锯齿；叶柄长1.5～10 cm，中央小叶柄长0.5～2.5 cm，侧生小叶无柄或有短柄，侧生小叶总柄长0.5～1.5 cm。气微清香，味淡。见图1。

图1 冻你美药材图

2.2 显微鉴别 选取具代表性根、茎、叶，用FAA固定液固定24 h。取出进行软化处理，脱水，浸蜡，切片，染色和封固备用。将全株药材打成粉末，取适量药材粉碎过五号筛后按粉末制片法制作粉片，所有制片置于Ni-U尼康高级生物显微镜及视频成像装置观察并拍摄成像。

2.2.1 根横切面 呈不规则棱形，木栓层细胞数列，扁方形，有的已经脱落。栓内层窄，细胞类圆形，在棱角处有的有2～3个异型维管束分布。外韧型维管束环状，韧皮部较宽，韧皮射线呈喇叭状延伸至皮层，韧皮薄壁细胞与韧皮纤维相间排列。束间形成层明显。木质部较宽，导管单个或几个相连放射状分布，直径30～200 μm，木射线细胞4～20余列。含草酸钙针晶束的黏液细胞广泛分布于皮层、韧皮部及射线组织中。见图2。

图2 冻你美根横切面显微图1.木栓层 2.栓内层 3.韧皮部 4. 韧皮纤维 5.木质部 6.射线 7.黏液细胞

2.2.2 茎横切面 呈六棱状或不规则多棱形，表皮细胞1列，方圆形。皮层窄，棱角处有厚角组织分布，有的薄壁细胞内有棕黄色分泌物。外韧型维管束数个排列成环，维管束上方有大小不一的纤维束环状排列；韧皮部较宽，韧皮薄壁细胞内有的有棕黄色分泌物；木质部由木薄壁细胞、导管和木纤维组成，导管单个或几个相连放射状分布，直径20～180 μm，射线细胞3～10余列。髓部较宽，细胞类圆形。本品有的薄壁细胞内存在草酸钙簇晶，直径12～21 μm，黏液细胞含草酸钙针晶束，广泛分布于皮层、髓部及射线组织中。见图3。

图3 冻你美茎横切面显微图1. 表皮 2.中柱鞘纤维 3.皮层 4.黏液细胞 5.厚角组织 6.韧皮部 7.木质部 8.非腺毛 9.髓部 10.射线

2.2.3 叶横切面 上下表皮细胞1列，长方形或方圆形，上、下表皮均有非腺毛；栅栏组织细胞1列，不通过主脉。主脉维管束1～7个，上方单个的维管束较小，外韧型，木质部导管几个相连放射状排列，韧皮部较窄。中脉上下有2～3列厚角组织细胞。上表皮中脉尖凸，下表皮中脉凸出。中脉周围及叶肉组织内有含草酸钙针晶束的黏液细胞散在。见图4。

图4 冻你美叶横切面显微图1.非腺毛 2.上表皮 3.栅栏组织 4.海绵组织 5.黏液细胞 6.木质部 7.韧皮部 8.下表皮

2.2.4 粉末鉴别 粉末灰绿色。纤维成束或分离，先端圆钝或折断，纤维壁较薄，直径15～25 μm。非腺毛由2～10余个细胞组成，稍弯曲，壁薄，长12～395 μm，直径18～33 μm。草酸钙针晶束较多，成束散在或存在于黏液细胞内，针晶长 80～160 μm；草酸钙簇晶散在或存在于薄壁细胞内，直径6～65 μm。导管为具缘纹孔导管和螺纹导管，直径30～120 μm。见图5。

图5 冻你美粉末显微图1.非腺毛 2.草酸钙针晶 3.纤维 4.草酸钙簇晶 5.导管

2.3 薄层鉴别 取11批本品样品粉末各0.5 g，加50%乙醇10 ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加95%乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取冻你美对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版四部0502)试验，吸取供试品溶液0.5～2 μL，对照药材溶液2 μL分别点于同一聚酰胺薄层板上，以冰醋酸-水(5∶5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯(365 nm)下检视。在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点。见图6。

图6 12批冻你美TLC色谱图1.对照药材 2-12.冻你美 A:黄色荧光斑点

3 讨论

冻你美在是广西瑶族民间常用药材。为了确保该药材临床用药的安全有效，有必要建立药材质量标准。本实验对冻你美进行生药学鉴别研究。所建立的性状、显微、薄层鉴别方法操作简便易行，实验结果稳定可靠，专属性和重现性好，可作瑶药冻你美鉴别真伪的依据。

通过以上实验结果表明，药材性状鉴别点为卷须二歧分叉，与叶对生；叶皱缩，展平后为鸟足状复叶，小叶5。显微鉴别点为根、茎、叶的黏液细胞含草酸钙针晶，茎薄壁细胞存在草酸钙簇晶。粉末呈灰绿色。有非腺毛，草酸钙针晶束较多，成束散在,或于黏液细胞内；草酸钙簇晶散在或存在于薄壁细胞内。陆大忠[4]、李晓晨[5]、郭琰[6]、王太霞[7]分别对乌蔹莓茎、叶进行显微鉴别，肖文[8]对乌蔹莓根、茎进行显微鉴定研究，实验结果均表明乌蔹莓根、茎、叶黏液细胞含有草酸钙针晶。本研究发现冻你美根、茎、叶黏液细胞含有草酸钙针晶，与文献报道一致。陈慧浓[9]曾报道乌蔹莓含黄酮类成分。本研究首次对乌蔹莓黄酮类成分进行薄层鉴别。薄层鉴别中，11批药材与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主荧光斑点。实验结果稳定可靠，专属性好，可作为其薄层鉴别的依据。