粪便多标DNA检测分析在结直肠癌筛查及诊断中的价值研究

武曼群，杨少奇，胡建平

大肠癌(CRC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一，据统计全世界每年约有超过60.8万人死于结直肠癌[1]。随着我国生活习惯和饮食结构的改变以及人口老龄化进程的加快，结直肠癌发病率近几年一直呈上升趋势[2]，给患者家庭及社会带来了沉重的经济负担，如何通过专项筛查提早规避患癌风险已成为癌症预防领域一大难题。目前我国用于结直肠癌筛查的检测手段，绝大多数难以符合在人群进行结直肠癌普查或筛查时应具备的方法敏感、特异、简单易行，经济实用的要求。多靶点粪便DNA检测，是一项基于基因检测的新方法，在保证高灵敏度、高特异性的同时，还拥有着无创无痛、操作简便等优势[3]。本研究将利用这一技术，对拟行结肠镜检查的患者，预先进行粪便多标DNA (DNA)及(Fecal Occult Blood Test，FOBT)检测，结果与结肠镜及病理检查结果进行比对分析，旨在了解粪便多标DNA对于检测结直肠癌的敏感性及特异性。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取我院2016年12月-2018年11月住院及门诊拟行肠镜检查的患者300例，年龄30～80岁，平均年龄(52.67+16.35)岁；男性209例，女性91例。根据肠镜及病检结果，将其分为正常组247例、结直肠癌组23例及结直肠腺瘤组30例3组。

1.2 研究方法：患者均于拟行肠镜检查前，留粪便标本分别行FOBT和粪便多标DNA 检测，记录结果，后常规肠道清洁，次日行结肠镜检查，对息肉及可疑癌变组织行病理活检，记录结果。FOBT试剂盒及检测方法均按我院中心实验室常规标准检测，粪便多标DNA 试剂盒购自诺辉公司独家引进的美国 Enterix 公司粪便多标DNA检测产品试剂盒进行检测。

1.3 电子结肠镜检查：应用日本OlympusH260电子结肠镜检查。

2 结果

2.1 结直肠癌组、结直肠腺瘤组、正常组粪便多标DNA 阳性率的比较：结直肠癌组与结直肠腺瘤组的粪便多标DNA阳性率分别为86.96%、80.0%，二者比较差异有统计学意义(P<0.05)；FOBT在结直肠癌组阳性率为24.00%，结直肠腺瘤组12.00%，2组比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 3组患者粪便多标DNA 阳性率的比较[n(%)]

2.2 粪便多标DNA:诊断结直肠癌的敏感性为80.95%，特异性为86.54%，阳性预测值为53.1%，阴性预测值为81.77%，见表2。

表2 粪便多标DNA诊断结直肠癌的敏感性和特异性(%)

3 讨论

结直肠癌在宁夏范围内高发癌中占第4位[4]。无症状人群结直肠癌普查是防治结直肠癌的主要手段,能早期发现结直肠癌及癌前病变,通过早期治疗,可达到治疗、预防结直肠癌的目的。而目前我国结直肠癌筛查领域，涉及肠癌初筛方式主要为粪便隐血和肛门指检，如果初筛结果为阳性，则需要肠镜进一步确诊。这一流程中也存在一些问题。首先，结直肠癌筛查过程中，承担初筛角色的粪便隐血检测易受食物、药物等影响，导致灵敏度较低；虽有随机对照试验已经证实每年或每2年进行粪便隐血试验可以降低15%～33%的结直肠癌死亡率，但在无症状人群中进行一次粪便隐血试验仅能检测出13%～50%的结直肠癌患者[2]。另外，现实中能够坚持定期做粪便隐血试验筛查的人较少，这也使粪便隐血试验作为筛查手段的有效性受到限制和影响。肛门指检只能检测出肛门附近有无肠癌征兆，具有一定局限性。其次，作为结直肠癌的临床筛查“金标准”，肠镜由于准备过程繁琐，检测过程疼痛难忍，并伴有肠穿孔等风险，导致肠镜依从性差。因此，需要寻找一种精准高效的结直肠癌早期筛查技术，提高肠癌筛查灵敏度，优化我国结直肠癌筛查路径，同时提高筛查人群依从性和结直肠癌筛查率。近年来粪便多标DNA 作为一种敏感性及特异性较高的试剂，受到关注，被认为有较高的应用价值[8-15]。来自印第安纳大学医学院研究所的Imperiale 等[16]人的研究结果显示，使用多靶点粪便 DNA 检测结直肠癌的敏感性可达到92.3%，而晚期肿瘤的检出敏感性有42.4%，均显著高于之前的研究数据，在敏感性上明显优于粪便免疫化学试验(FIT)(分别为 73.8% 和 23.8%)。2016年美国预防医学工作组[14](USPSTF，U.S.)更新了关于大肠癌筛查建议的指南，其中就包括多靶点粪便DNA检测，因为现有研究均显示(MT-sDNA)除了无创无痛、操作简便、具有较高的灵敏度和特异性等优点之外，其对肠镜筛查大肠癌的检出率和质量也具有一定的影响，阳性结果会影响肠镜检出率和质量。目前多靶点粪便DNA检测已通过美国食品药品监督管理局批准，在平均风险人群中进行结直肠癌筛查。

本研究利用粪便多标DNA 这一技术手段，对拟行肠镜检查的受试者300例分别行粪便多标DNA 及便潜血检测，后完成肠镜检查，对经肠镜与病检确诊的结直肠癌和结直肠腺瘤患者及结肠镜检查未见异常者的粪便血红蛋白量进行比对、分析，结果显示粪便多标DNA在结肠镜检查正常的247例受试者中仅9例有表达，30例结直肠腺瘤组中表达阳性24例，23例结直肠癌组中表达阳性20例。正常人群组粪便多标DNA 阳性率为3.6%与结直肠癌组的86.95%相比较，差异有统计学意义(P<0.05)。结直肠腺瘤组与正常人群组粪便多标DNA相比较，差异有统计学意义(P<0.05)；结直肠癌组与结直肠腺瘤组的粪便多标DNA阳性率相比较，差异无统计学意义(P>0.05)，考虑可能结直肠腺瘤本身为结直肠癌最重要的癌前病变；粪便多标DNA诊断结直肠癌的敏感性为86%，特异性为87.8%，阳性预测值为68%，阴性预测值为95.3%，这一结果与Imperiale等人[8-16]研究报道结论一致，但敏感性偏低，考虑是否与人种及所用试剂生产公司不同有关。当应用FOBT法筛查时，结直肠癌组阳性率为24%，结直肠腺瘤组12%，正常受试者为10%,两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)，这一结果与目前文献报道的FOBT对结直肠癌检出率范围一致且更为偏低，说明FOBT作为结直肠癌筛查手段敏感性及特异性均不理想，且受多因素影响。