云南德宏地区αβ复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因型与血液学特点分析*

桑国鑫，黄 铠，林克勤，易 薇，孙 浩，黄小琴，马绍辉，褚嘉祐，杨昭庆△

(1.昆明医科大学，云南昆明 650500；2.中国医学科学院/北京协和医学院/医学生物学研究所医学遗传学研究室,云南昆明 650118;3.德宏傣族景颇族自治州人民医院检验科，云南德宏 678402)

珠蛋白生成障碍性贫血(下称地贫)是世界范围内最常见的遗传性疾病之一，是由于珠蛋白基因缺陷影响红细胞膜的功能和稳定性的一类溶血性贫血[1-2]。我国南方是地贫的流行地区，一些地区的人群中有较高的基因突变携带率，尤其是在云南西南部，αβ复合型地贫比例上升[3-5]，当αβ复合型地贫患者与单纯α地贫患者或β地贫患者婚配，可能生育中间型或重型地贫患儿，父母均为αβ复合型地贫患者时，生育重型患儿的可能性更大[6]。有研究表明αβ复合型地贫临床严重程度与α基因缺陷的数量和β基因突变类型密切相关[7-9]。而目前我国不同地区αβ复合型地贫血液学特点的数据还相对较少，明显制约了对该类疾病的临床诊疗和遗传咨询。本文对云南德宏地区αβ复合型地贫患者的基因型和血液学指标进行研究分析，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 研究对象来源于2014-2018年在云南省德宏傣族景颇族自治州人民医院就诊的αβ地贫患者，排除血液学特点复杂的新生儿和儿童患者，选择年龄在18～60岁的1 416例地贫患者为研究对象，将纳入的地贫患者分为试验组和对照组，其中试验组427例，同时含有α地贫突变和β地贫突变；对照组989例，仅含有β地贫突变。研究中样本和数据的采集按照知情同意原则进行。

1.2方法

1.2.1血常规检查 获取2 mL乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝静脉血，血常规各项指标采用XT-1800i全自动血细胞分析仪(Sysmex公司，日本)检测。

1.2.2地贫常见基因突变检测 从患者静脉血中提取DNA，采用地贫(α/β)基因检测试剂盒(PCR-流式荧光杂交法，达安基因，广州)，基于Magpix液态悬浮芯片检测平台(Luminex,美国)检测23种地贫基因突变。包括--SEA、-α3.7、-α4.2、αWS、αQS、αCS、βCD41-42、βIVSⅡ-654、βCD17、β-28、βCD26、βCD71-72、βCD43、β-29、βInt、βCD14-15、βCD27-28、β-32、β-30、βIVS-I-1、βIVS-I-5、βCD31和βCap。

2 结 果

2.1αβ复合型地贫的基因突变类型及构成比 在427例αβ复合型地贫中，共检出5种α突变类型，最常见的是-α3.7(69.00%)，其次为--SEA(17.00%)和αCS(9.70%)；检出6种β突变类型，最常见的是βCD26(85.70%)，其次为βCD17(5.90%)和βCD41-42(4.80%)。见表1。

2.2αβ复合型地贫的基因型 共检测出38种基因型，其中-α3.7/βCD26基因型最常见(49.20%)，其次分别为--SEA/βCD26(8.70%)和ααCS/βCD26(6.60%)。见表2。

表1 427例αβ复合型地贫的突变类型及构成比

表2 427例αβ复合型地贫的基因型(n)

注：-α/αα表示1个α基因缺失；αTα/αα表示1个α基因突变；--/αα表示2个α基因缺失或突变；--/-α表示3个α基因缺失或突变；β+表示β链部分合成；β0表示β链完全不能合成；-表示无数据。

表3 αβ复合型地贫的血液学特点

注：β+/βA组、β0/βA组、β+/β+组、β+/β0组中，与基因型αα/αα比较，aP<0.05。

2.3αβ复合型地贫的血液学特点 将αβ复合型地贫按照其β地贫突变类型的不同分为4组(β+/βA组、β0/βA组、β+/β+组、β+/β0组)，各组内不同α突变类型分别与αα/αα突变类型(即仅含有β突变的对照组)进行比较，结果显示β+/βA合并-α/αα、αTα/αα时，平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)高于单纯β+/βA组，差异有统计学意义(P<0.05)。β+/βA合并--/αα、--/-α时，血红蛋白、MCV、MCH明显低于单纯β+/βA组，差异有统计学意义(P<0.05)。β0/βA合并--/-α时，MCV、MCH明显低于单纯β0/βA组,差异有统计学意义(P<0.05)。其余复合型地贫的血液学指标与仅含β突变的对照组(即α突变类型为αα/αα)比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

3 讨 论

本研究对云南德宏地区αβ复合型地贫的基因突变类型和基因型进行了分析，共检出11种突变类型，38种基因型。除了单一α突变复合单一β突变(78.80%)、单一α突变复合复合β突变(6.50%)、复合α突变复合单一β突变(13.50%)、还发现2例罕见的4个突变类型共存的基因型(-α3.7/-α3.7复合βCD26/βCD26、-α3.7/αCSα复合βCD26/βCD26)，表明云南德宏地区的αβ复合型地贫具有明显的遗传异质性。本研究中云南德宏地区αβ复合型地贫以-α3.7和βCD26突变为主，这与该地的地贫分子流行病学特征相符[4,10]。在我国其他地区，β地贫突变类型90%以上为β-28、βCD17、βCD41-42、βCD71-72、βIVS-Ⅱ-654[11]，而βCD26突变在我国云南地区及相邻的东南亚地区高发，这可能与恶性疟原虫的自然选择作用有关[4]。本研究中αβ复合型地贫常见的基因型为-α3.7/βCD26，与广西、广东和海南地区常见的基因型--SEA/βCD41-42、--SEA/βCD41-42和-α3.7/βCD41-42有所不同，这主要是因为各地区人群中α地贫和β地贫的突变谱及构成比不同[12-14]。本研究结果表明αβ复合型地贫的突变谱和基因型存在地域异质性，与各地区的珠蛋白基因突变分子流行病学特征有关。

本研究结果显示αβ复合型地贫的血液学特征与α基因的缺陷个数及具体的β突变类型有关，当β+/βA型复合单个α基因缺陷(缺失突变和点突变)时，MCV、MCH升高，这与以前的研究结果一致[15]。而β0/βA型复合单个α基因缺陷时，MCV、MCH差异无统计学意义(P>0.05)，这可能是由于α链和β链的合成都减少，缓解了α链和β链的不平衡程度，从而影响血液学指标[16-17]。但这种不平衡缓解的能力是有限的，当β链的合成严重减少时，单个α基因异常对其血液学指标的影响不明显。β+/βA型复合2个α基因异常时，各研究中MCV、MCH的变化情况不一致，在伊朗人群中发现其MCV、MCH高于单纯β地贫[17]。在泰国人群中发现β-28地贫杂合子(β+/βA型)合并2个α基因异常时，其MCV、MCH与单纯的β地贫杂合子差异无统计学意义(P>0.05)[15]；而当βCD26突变(β+/βA型)复合2个α基因异常时，其MCV、MCH低于单纯β地贫杂合子[8]，这与本研究结果相似。本研究中βCD26突变在β+/βA型中占97.69%，β+/βA型合并2个α基因异常时，其血红蛋白、MCV、MCH低于单纯β+/βA组。这表明各研究结果的不一致可能与地理人群以及β+/βA的具体基因型有关，进一步表明αβ复合型地贫的血液学特点存在较大异质性，与构成它的α、β突变类型及其相互作用有关。

本研究结果显示，αβ复合型地贫的MCV、MCH的均值在地贫的血液学筛查异常范围内(MCV<82 fL、MCH<27 pg)，提示该筛查截断值在αβ复合型地贫初筛过程中有较好的诊断价值。从表3可以看出-α3.7/βCD26型地贫虽然多表现为小细胞低色素，但并未表现出贫血，在临床上呈现无症状，在筛查和诊断时容易被忽略，并且在地贫流行区有较大概率与携带其他地贫突变型的人婚配而增加生育中、重型地贫患儿的风险。这提示在地贫高发区要重视αβ复合型地贫的筛查并有针对性地制订合理的筛查和防控策略。因此建议在地贫高发区除了血液学常规检查外，对婚育人群尤其是妇女进行地贫基因突变检测，以降低漏检率，从而减少重症患儿的出生，降低当地的卫生经济负担。

4 结 论

本研究初步揭示了德宏地区αβ复合型地贫患者的基因型与血液学特点，表明复合型地贫突变谱复杂多样、血液学特征存在较大异质性。除了珠蛋白基因突变类型以外，修饰基因等其他遗传因素以及营养和感染等环境因素均可对地贫的表型产生影响，这些因素对αβ复合型地贫的基因型和表型特征的影响还需要进一步在不同地区和民族人群的更多样本中进行探讨和分析。建议在地贫高发区除了血液学常规检查外，对婚育人群尤其是妇女进行地贫基因突变检测，以降低漏检率，从而减少重症患儿的出生，降低当地的卫生经济负担。