酸枣仁珍珠粉胶囊改善小鼠睡眠作用研究

杜显龙 李 卓 孙雨薇 郭 婉

失眠是困扰老年人的常见临床问题，我国老年人群体中存在睡眠障碍的患病率为47.2%，女性高于男性，随着年龄的升高患病率逐步升高[1]。《神农本草经》中记载：“补中益肝，坚筋骨，助阴气，皆酸枣仁之功也。”明代李时珍《本草纲目》中记载，枣仁“熟用疗胆虚不得眠，烦渴虚汗之症；生用疗胆热好眠，皆足厥阴少阳药也。”临床研究表明，食用酸枣仁有宁静安神、养肝敛汗功效，同时也可以降血压、降血脂，是失眠、神经衰弱人群的不二之选[2]。据《本草纲目》记载，珍珠具有镇静安神、养阴息风、明目消翳、解毒生肌等功效。有报道珍珠具有改善睡眠作用[3]。珍珠中含多种氨基酸、微量元素及牛磺酸[4]，主要化学成分碳酸钙水解后除易被机体吸收，利于牙齿、骨骼生长发育和保持血液电解质平衡，也有一定的安神作用。本品在酸枣仁和珍珠粉的基础上还添加了茯苓提取物和远志提取物。

本试验以小鼠为研究对象，研究酸枣仁珍珠粉胶囊对正常小鼠改善睡眠功能的影响。根据《保健食品检验与评价技术规范》[5]，对酸枣仁珍珠粉胶囊进行改善睡眠功能动物实验。

1.材料与方法

1.1 样品 酸枣仁珍珠粉胶囊由某公司提供。人体口服推荐量为每日2次，每次2粒，成人体重按60kg计算，折合剂量0.02g/(kg·bw)。酸枣仁珍珠粉胶囊含有酸枣仁提取物、珍珠粉、茯苓提取物、远志提取物等。

1.2 动物 长沙市开福区东创实验动物科技服务部提供SPF级昆明种雌性小鼠120只。

1.3 实验环境条件 实验条件为屏障环境。温度23～24℃，湿度52%～54%。

1.4 仪器与试剂 秒表、电子天平、生理盐水、戊巴比妥钠、巴比妥钠。

1.5 方法

1.5.1 剂量设定：将实验动物分为三个实验组，分别为延长戊巴比妥钠睡眠时间实验(实验Ⅰ组)、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验和直接睡眠试验(实验Ⅱ组)、巴比妥钠睡眠潜伏期实验(实验Ⅲ组)，三组实验组再根据动物体重随机分为四个亚组，每组10只。设对照组及低[0.l0g/(kg·bw)]、中[0.20g/(kg·bw)]、高[0.60g/(kg·bw)]三组剂量(分别相当于人体推荐剂量的5倍、10倍、30倍)。试验时，分别取l.00g、2.00g、6.00g酸枣仁珍珠粉胶囊内容物加蒸馏水至200ml，配成相应剂量受试液，供各剂量组灌胃。对照组给予等体积蒸馏水。每日灌胃1次，灌胃量0.2ml/(10g·bw)，连续30天。实验期间动物自由摄食饮水。观察动物每天的活动及生长情况。

1.5.2 直接睡眠实验：参考《保健食品检验与评价技术规范》。

1.5.3 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验：参考《保健食品检验与评价技术规范》。

1.5.4 戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验：参考《保健食品检验与评价技术规范》。

1.5.5 巴比妥钠睡眠潜伏期实验：参考《保健食品检验与评价技术规范》。

1.5.6 统计学方法 用SPSS 11.0软件进行数据转化和统计分析。先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐，则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐的目的，改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Tamhane’sT2检验进行两两比较。

2.结果与分析

2.1 样品对小鼠体重的影响 由表1～表3可以看出，酸枣仁珍珠粉胶囊各剂量组与对照组比较，实验期间体重均无显著性差异(P>0.05)；动物生长良好，未见明显异常反应。

表1 Ⅰ组小鼠体重

表2 Ⅱ组小鼠体重

表3 Ⅲ组小鼠体重

2.2 直接睡眠实验 由表4可见，酸枣仁珍珠粉胶囊各剂量组与对照组经口灌胃后小鼠均不出现睡眠现象。

表4 小鼠直接睡眠实验的影响

2.3 延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间试验 由表5可见，酸枣仁珍珠粉胶囊各剂量组对戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间有延长趋势，中、高剂量组与对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。

表5 对戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响

2.4 戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验 由表6可见，酸枣仁珍珠粉胶囊高剂量组小鼠睡眠发生率与对照组比较，差异有显著性(P<0.01)。

表6 对阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠发生率的影响

2.5 巴比妥钠睡眠潜伏期实验 由表7可见酸枣仁珍珠粉胶囊各剂量组巴比妥钠睡眠潜伏期与对照组比较，差异无显著性(P>0.05)。

表7 对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响

3.讨论

本研究以0.l0g/(kg·bw)、0.20g/(kg·bw)、0.60g/(kg·bw)剂量的酸枣仁珍珠粉胶囊给小鼠灌胃30天，剂量组小鼠体重与对照组比较，差异无显著性(P>0.05)。对受试动物无直接睡眠作用。0.20g/(kg·bw)、0.60g/(kg·bw)剂量能延长阈剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间，0.60g/(kg·bw)剂量能增加阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠发生率，与对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.0l)，对巴比妥钠睡眠潜伏期无明显影响。因此认为酸枣仁珍珠粉胶囊具有改善睡眠作用。

目前可以改善睡眠状况的原料有酸枣仁、林蛙油、珍珠粉、茯苓、远志、五味子等。张荣标[6]等人的研究探讨了复方酸枣仁茯苓口服液改善小鼠睡眠作用。韩俊伟[7]等人的研究探讨了酸枣仁复方制剂改善睡眠功能。梁东[8]等人的研究探讨了酸枣仁林蛙油复方胶囊改善睡眠功能。王丽云[9]等人的研究探讨了超细珍珠粉对小鼠改善睡眠。酸枣仁为药食同源的保健食品原料，酸枣仁中所含的酸枣仁总皂苷等具有改善血液微循环、镇静催眠以及抗惊厥作用，镇静催眠效果较好[10]。珍珠作为一种名贵的中药材,在我国的应用已有几千年的历史，珍珠性寒，味甘、咸，具有安神定惊、明目清翳、解毒生肌之功效，主治惊悸失眠、惊风癫痫、目生云翳、疮疡不敛等症[11]。茯苓用于水肿尿少，痰饮眩悸，脾虚食少，便溏泄泻，心神不安，惊悸失眠。远志安神益智、解郁，治惊悸，健忘，梦遗，失眠，咳嗽多痰，痈疽疮肿。实验证明酸枣仁珍珠粉胶囊具有改善睡眠功效，可以成为研究改善睡眠保健食品的一个方向。