HPLC法测定中药制剂芦荟散中芦荟苷的含量

王建荣 林诗瑶

福州市第二医院药剂科，福建福州 350007

芦荟作为药用植物被应用的历史已经达几千年[1]，在2015年版《中国药典》一部中记载芦荟为百合科植物库拉索芦荟Aloe barbadensis Miller、好望角芦荟Aloe ferox Miller或其他同属近缘植物叶的汁液浓缩干燥物。芦荟的原产地在非洲干燥沙漠地带，如今在热带及亚热带地区有着较广泛的分布[2]。芦荟是在唐代中期传入中国，现今我国主要的种植地区集中在广东、海南、福建、云南等热带亚热带地区。芦荟中的芦荟苷，又称芦荟大黄素苷或芦荟素，是芦荟的主要活性成分[3-4]。一种传统的中药制剂以芦荟和甘草为主要原料制成的芦荟散，主要具有清热下泄、消炎解毒等功效，主要用于治疗湿癣抓搔有黄汁[5]。目前检测含有芦荟苷成分的方法主要有紫外分光光度法、薄层色谱法及高效液相色谱法[6-7]，芦荟苷的检测方法主要采用HPLC法，该中药制剂成分简单，采用HPLC法能够准确有效的对制剂中芦荟苷进行测定，并进行方法学研究，进一步验证该方法的准确有效性。

1 材料与方法

1.1 实验材料及仪器

实验用芦荟散由实验室提供；芦荟苷对照品购自中国食品药品检定研究院。乙腈、甲醇均为色谱级，其余实验用溶剂为分析级，实验用水均为纯净水。实验用仪器为戴安 Ultimate3000高效液相色谱仪（Thermo四元泵，紫外检测器），电子天平产自梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司，超声提取器产自济宁天华超声电子仪器有限公司。

1.2 方法

观察指标包括：线性试验、重复性试验、回收率试验、耐用性试验、检出限试验及测定样品含量。

表1 线性关系试验结果

1.2.1 对照品溶液的制备 取芦荟苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并制成每1mL含0.4mg的对照品溶液。

1.2.2 供试品溶液的制备 取芦荟散粉末（过120目筛）约0.2g，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇适量，超声振提处理（功率250W，频率33k Hz）30min，放置至室温，以甲醇定容至刻度。摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

1.2.3 测定 分别将对照品液与供试品液取上清液，过0.45μm滤膜，注入液相色谱仪，测定，计算。1.2.4 色谱条件 色谱柱：ACE C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈－水（25∶75）；柱温：30℃；波长：355nm；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。

1.2.5 计算 试样中芦荟苷的质量分数X，数值以g/100g表示：

式中：

X—试样中芦荟苷的含量（g/100g）；A1—试样中芦荟苷的峰面积；C—标准液的质量浓度（mg/mL）；A2—标准液中芦荟苷的峰面积；V—试样定容体积（mL）；m—试样的质量（g）。

2 方法学考察

2.1 线性关系考察

精密称取芦荟苷对照品适量，用流动相溶解并定容至10mL，混匀，制成0.4mg/mL标准液。分别吸取芦荟苷标准液，配制成 0.04，0.08，0.10，0.15，0.20，0.25mg/mL的系列标准液，按1.2.4项下色谱条件进行分析。以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制线性标准曲线，得线性标准曲线方程为：y=192.84x+1.2883，R2=0.9996，表明线性关系良好。见表1。

图1 线性关系图

2.2 重复性考察

分别称取6个芦荟散样品，按1.2.2项下项下供试品溶液制备，并按1.2.4项下色谱条件进行分析，结果：RSD=1.56%，证明此方法重复性良好。

2.3 加样回收率考察

分别称取芦荟散样品约0.1g，共6份，精密称定，分别精密加入相应对照品，按上述方法测定含量，计算回收率，结果：回收率均在92%～105%，RSD=0.92%，证明此方法的回收率良好。见表2。

2.4 耐用性试验

分别考察不同流速（0.8、1.0、1.2mL/min）、不同柱温（25℃、30℃、35℃）、不同色谱柱条件下样品的含量变化。结果：RSD分别为0.79%、0.17%、0.57%，表明此方法耐用性较好。

2.5 稳定性试验

考察样品在24h内的稳定性，同一样品每2h进样一次测定峰面积，结果：RSD为2.07%，表明此方法在24h内稳定性较好。

2.6 检出限试验

分别稀释对照品浓度为 0.004、0.01、0.02μg/mL，进样分析。试验结果：空白峰高为0.004，为空白峰高3倍的浓度为0.01μg/mL，故芦荟苷的检出限为0.01μg/mL。见图 1 。

2.7 不同批次样品含量测定

精密称定6个芦荟散样品0.1g，按1.2.2项下供试品溶液制备，并按1.2.4项下色谱条件进行分析，结果表明：芦荟苷平均含量为9.31g/100g。

3 讨论

医药领域对于芦荟的研究由来已久，历经时间累积的研究证实，芦荟中含有几十种生物活性成分，对人体具有积极有益的药理作用，具有促进创面愈合、润肠通便、抗菌消炎等药理作用[8-11]，因此又被称为“多效良药”“天然美容医生”“植物大夫”等。随着现代科学的进步及发展，人类对芦荟的研究与开发也在不断的进步和深化。由于芦荟具备的多种药用价值，现今在药品、保健食品、化妆品及其他工农业等多个领域被广泛应用[12]。综上，芦荟目前是极具研究与开发前景的一种药用植物，因此对芦荟的化学成分研究也是重中之重，那么构成芦荟主要药用价值的芦荟苷的测定具有一定的研究价值及意义。

我国在20世纪80年代初才开始了对芦荟的研究，当时的研究主要集中在芦荟的分布情况、特性、栽培技术及生态环境需求等方面，而在化学成分、生物活性组成成分、产品生产加工工艺及临床试验等方面的发展研究与国外相比发展较慢，因此对芦荟苷这种单一的成分测定及方法学研究分析也是目前鉴别及衡量芦荟品质的一项重要手段[13]。

本研究应用高效液相色谱法对芦荟散中芦荟苷进行含量测定及方法学研究，试验结果为：芦荟苷在0.04～0.25mg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为y=192.84x+1.2883，R2=0.9996；重复性RSD为1.56%，重复性良好；回收率平均值为96.52%，RSD为0.92%，回收率良好；耐用性考察不同流速、不同柱温、不同色谱柱条件下样品的含量，RSD分别为0.79%、0.17%、0.57%，耐用性良好；芦荟苷的检出限为0.01μg/mL。经研究证明，该方法准确可靠、切实可行，在试验过程中发现，在对供试品和对照品进行处理时，必须采用现用现配原则，而且需要避光进行试验，在超声过程当中，超声提取的时间不可过长，建议在超声过程中控制温度，可以适当加些冰块进行超声，试验前期处理完成后应立即进行测定，检测时间最好不要超过1d，避免因为操作过程中时间延长使芦荟苷不稳定导致测定数值不准确[14]。

有研究表明，芦荟苷大部分是芦荟苷A和芦荟苷B的混合体，其中芦荟苷A具有较高的药用价值[15]，对于芦荟苷A产生药用价值的机理，仍需进一步研究。