不同种源黑老虎根茎中总木脂素含量分析及综合评价

郭霞，陆文，李善志，林旭俊，李晓斌

（海南省林业科学研究院，海南海口 571100）

黑老虎 (Kadsuracoccinea(Lemaire)A.C.Smith)，是五味子科南五味子属的木质藤本植物，具有较高的食用、药用价值[1-2]。果实较大、味酸甜，富含多种人体必需的氨基酸和微量元素，无毒并具有调节血脂的作用[3-4]，是一种具有较好市场前景的珍稀水果[5-7]；根及藤茎中含有大量的木脂素成分，具有抗肿瘤、抗艾滋病毒、抗炎以及血小板活化因子拮抗等广泛的生物活性[8-12]。该研究从黑老虎药用价值角度出发，对收集到的6 个种源黑老虎的根、茎中木脂素含量进行测定，比较分析不同种源间的差异，并进一步进行分析，同时结合苗木生长情况，筛选出在海南生长的、品质最佳的黑老虎种源。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验材料

该研究收集的种源分别是海南乐东、海南陵水、湖南怀化、广西龙盛、海南昌江、海南万宁，根、茎来自于2 年生的种子苗。选择管理、生长状况一致的植株，每株作为1 个处理，共3 个重复。

1.1.2 仪器

0.1mg 电子天平；恒温鼓风干燥箱；电热恒温水浴锅；紫外分光光度计等。

1.2 方法

1.2.1 样品预处理

采取无病虫害的样本，清理干净，置于50℃恒温鼓风干燥箱中烘36h 后，粉碎并过筛，待测试用。

1.2.2 木脂素测定

该研究以五味子酯甲为标准对照，采用紫外分光光度法测定不同种源黑老虎根、茎中总木脂素的含量。

样品处理：0.3g 样品粉末，加入100ml 甲醇，水浴回流2h。过滤，滤液减压浓缩，转移至25ml 容量瓶，甲醇定容。

对照品溶液制备：精密称取五味子酯甲对照品(纯度95.2%)5.84mg，置于10ml 容量瓶中，甲醇溶解并定容，摇匀，即得浓度为0.556mg/ml 的对照品溶液。

标准曲线制定：精密吸取对照品溶液160μl、320μl、480μl、640μl、800μl 于试管中，另取480μl 甲醇做空白，待溶剂挥发后(水浴加热蒸干溶剂)，依次加入1ml 10%变色酸溶液，6ml 浓硫酸，加蒸馏水补足至10ml，沸水浴30min，冰浴冷却，与571nm 处测吸光度。

测定：精密吸取供试品溶液480μl，照标准曲线制备项下的方法，自“挥发”起，同法操作，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中五味子酯甲的含量。

1.3 数据处理

利用Excel 2010 和spss21.0 软件对试验数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 不同种源黑老虎根部总木脂素含量测定

6 个种源地的黑老虎根部总木脂素含量测定都是基于同一个标准曲线下进行测定。不同种源黑老虎根部总木脂素含量测定结果见表1：

表1 不同种源黑老虎根部总木脂素含量测定Tab.1 Determination and evaluation of total lignans in roots of Kadsuracoccinea from different provenances

根据表1，可以看出总木脂素含量均值顺序为：怀化＞龙盛＞昌江＞乐东＞陵水＞万宁。

变异系数的数值越大，反映性状的离散程度越大，种源间总木质素含量的离散程度也就越大。根据表1 可以看出陵水种源变异系数达到41.1%，其次是龙盛种源（37.28%），最小的是怀化种源（15.97%）。结合总木脂素含量的均值与变异系数，可以看出怀化种源总木脂素含量最丰富的，且离散程度最小。

该研究采取了S-N-K 方法进行差异性分析，如表2：

表2 不同种源黑老虎根部总木脂素含量差异性Tab.2 difference of total lignans content in roots of Kadsuracoccinea of Different Provenances

根据表2，可以更加直观的看出6 个种源之间总木脂素含量的差异性。陵水、乐东、昌江、龙盛、怀化之间差异性不显著，但是万宁种源和龙盛、怀化种源之间差异显著，通过LSD 方法验证，万宁种源与龙盛、怀化种源显著性p 值分别为0.06、0.003，均小于0.05，两者结果一致。

2.2 不同种源黑老虎根茎部总木脂素含量测定

根据表3 数据统计，黑老虎茎部总木脂素含量龙盛种源最多，其次为万宁、昌江、怀化、乐东；根据变异系数可知，乐东种源离散程度最大，万宁种源离散程度最小。

表3 不同种源黑老虎茎部总木脂素含量测定Tab.3 Determination and evaluation of total lignans in stem of Kadsuracoccinea from different provenances

该研究采取了S-N-K 方法进行差异性分析，如表4，6 个种源间茎部总木脂素含量差异不显著。

表4 不同种源黑老虎茎部总木脂素含量差异性Tab.4 difference of total lignans content in stem of Kadsuracoccinea of Different Provenances

3 结论与讨论

大量研究表明，五味子木脂素类成分有消炎、抗氧化、抵抗病毒等药用作用，并且对肝脏的保护具有明显效果[13-14]。木脂素为黑老虎的主要有效活性成分之一，该研究以五味子酯甲为标准对照[15-18]，采用紫外分光光度法测定不同种源黑老虎中总木脂素含量，通过不同种源在海南生长情况的对照，综合评定最佳种源，为黑老虎在海南的推广提供参考。

根据观察，目前长势最好的是陵水（平均株高2.26m）和怀化（平均株高2.31m）；根部总木脂素含量差异性分析表明万宁种源和龙盛、怀化种源之间差异显著，另外怀化种源含量最高；6 个种源的茎部总木脂素含量差异性分析不显著，6 个种源的含量都在0.7 以上。综合评价，2 年生的6 个黑老虎种源中，怀化种源长势和总木脂素含量表现最佳，为后续不同种源黑老虎的加工利用、选择优良种源提供参考。