柞蚕雌蛾女性功能食品配方筛选及其对小鼠生殖器官及性激素的影响

邵长波 钱 琨 周 影 孙继红 刘隽彦

(吉林省蚕业科学研究院,吉林吉林 132012)

柞蚕雌蛾为大蚕蛾科昆虫柞蚕的雌性成虫，其性味咸、温、归肝肾经，具有补肝益肾，温脾助胃、宁心安神、调气活血的作用，可用于调整内分泌失调[1-3]。另据报导，柞蚕雌蛾提取液含有多种人体类激素，其中含有相对丰富的类雌性激素，对更年期综合征有一定疗效[4]。基于上述理论，近多年来，我们以柞蚕雌蛾为主要原料，研究其最佳配方、安全性及功能性[5-6]，开发其新的功能食品，其中重点进行了配方筛选的试验研究。本试验在前期试验的基础上通过连续给予小鼠不同剂量的柞蚕雌蛾保健食品数天，观察柞蚕雌蛾女性功能食品不同配方对小鼠体重增长、小鼠睡眠的影响，根据小鼠血清孕酮(P)、雌二醇(E2)的含量变化及卵巢、子宫等生殖器官重量变化指标等筛选最佳配方。试验结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 试验材料与试剂

1.1.1 试验材料

柞蚕雌蛾取春秋两季制种未交尾或交尾的雌蛾。葛根、茯苓、薏苡等中药材购于当地药材公司。试验动物选用SPF级昆明种雌性小鼠，18～22 g，购自吉林大学基础医学院动物实验中心，许可证号SCXK-(吉)2003-0001。

1.1.2 试验试剂

血清孕酮放射免疫分析药盒及血清雌二醇放射免疫分析药盒，购自科大创新股份有限公司忠家分公司，批号20071225； 碘[125I]雌二醇放射免疫分析药盒(国药准字S10950191)，碘[125I]孕酮放射免疫分析药盒(国药准字S10950195)，天津新湾生物科技有限公司生产。大豆异黄酮，规格1 200 mg/片，(卫食健字(2004)第0968号，香港天力堂医药国际有限公司监制，河南省郑州市旭龙生物医药科技开发有限公司生产)。S-9肝微粒体酶由本试验室制备，经已知突变物试验结果，酶活性良好。菌株来源 TA98、TA100、两个菌株由卫生部药品生物制品检定所购进。

1.1.3 仪器与设备

JJ500电子天平，常熟双杰测试仪器厂；DHG-9140型电热恒温鼓风干燥箱，上海恒升科技有限公司；BDC-207型冰柜，青岛澳柯马股份有限公司生产；WF-系列万能粉碎机，江阴市亿丰机械设备有限公司；全自动微粒子化学发光免疫分析仪，美国Beckman公司。

1.2 试验方法

1.2.1 样品的制备

柞蚕雌蛾粉：于相应的时间收集新鲜柞蚕雌蛾，去翅，处死后置于60 ℃烘箱内干燥，研磨粉碎，过100目筛备用。

中药材粉：葛根、茯苓、薏苡和红景天分别取原药材，除去木质茎残根及杂质，抖净灰屑，研磨粉碎，过100目筛，备用。

1.2.2 小鼠生殖器官系数的测定

小鼠按要求分笼饲养，室温20～25 ℃，相对湿度45%～52%。食固体饲料，食水自由，灌胃给药，每日1次，连续15日，于末次给药1 h后称重，眼眶取血，断颈法处死，取其子宫及卵巢并称重。按以下公式求出卵巢(子宫、阴道)系数：卵巢(子宫、阴道)系数=卵巢(子宫、阴道)重量(mg)/体重(g)。

1.2.3 小鼠血清性激素含量的测定

小鼠按“1.2.2”项饲养，眼眶取血后，将血液置离心机中3 000 r/min离心10 min，分离血清，-20 ℃保存备用，采用放射免疫分析试剂盒测定小鼠血清孕酮和雌二醇的含量。

1.2.4 柞蚕雌蛾粉的原料筛选

设置7个试验组，1号：春蚕雌蛾，且交尾产卵的全蛾；2号：春蚕雌蛾，且未交尾产卵的全蛾；3号：春蚕雌蛾，且未交尾产卵的头胸部；4号：春蚕雌蛾，且未交尾产卵的全蛾，加入中药；5号：春蚕雌性蛾，未交尾产卵的全蛾，加中药；阳性对照组：大豆异黄酮和空白对照组。

取雌性小鼠70只，随机分为空白对照组、0.4 g/kg大豆异黄酮组、1-5号试验组4 g/kg，七个组，每组10只。按“1.2.2”和“1.2.3”项进行小鼠生殖器官系数的测定和小鼠血清雌二醇的测定。

1.2.5 复方柞蚕雌蛾粉的最佳配方筛选

选取最佳单方柞蚕雌蛾粉组，加入葛根、茯苓、薏苡、红景天等几味中草药按不同量配制，分为6号、7 号、8号、9号和10号五个组；阳性对照同上。

取雌性小鼠70只，随机分为空白对照组、0.4 g/kg大豆异黄酮组、6-10号试验组4 g/kg，七个组，每组10只。按“1.2.2”和“1.2.3”项进行小鼠生殖器官系数的测定和小鼠血清雌二醇的测定。

1.2.6 柞蚕雌蛾女性保健食品对小鼠生殖器官和性激素的影响

选取最佳复方柞蚕雌蛾粉作为柞蚕雌蛾女性保健食品的初步配方进行动物试验。

1.2.6.1 柞蚕雌蛾女性保健食品对小鼠体重的影响

取小鼠30只，随机分为空白对照组、高剂量组(4 g/kg)和低剂量组(2 g/kg)，每组10只。灌胃给药，连续给药21 d，每天1次。试验前以及试验期间每周称量小鼠体重1次并记录。

1.2.6.2 柞蚕雌蛾女性保健食品对小鼠生殖器官和性激素的影响

另取雌性小鼠40只，随机分为空白对照组、高剂量组(4 g/kg)、中剂量组(2 g/kg)和低剂量组(1 g/kg)，每组10只。按“1.2.2”和“1.2.3”项进行小鼠生殖器官系数的测定和小鼠血清雌二醇的测定，考察其对小鼠生殖器官和性激素的影响。

1.3 统计处理

以上数据采用SPSS13.0数理统计软件进行单因素方差分析。

2 结果

2.1 柞蚕雌蛾粉原料对小鼠生殖器官系数的影响

由表1可知，与阳性对照组相比，2号样的子宫系数差异显著(P<0.05)。其次是4号样增重较大，但无统计学意义。卵巢系数以2号增重较大，其次5号，但均无统计学意义(P>0.05)。说明春蚕雌性未交尾产卵的全蛾对小鼠子宫和卵巢具有促进生长的作用，交尾蛾虽有作用但影响不显著。

表1 不同处理对小鼠生殖器官系数的影响

注：* 表示P<0.05

2.2.2 柞蚕雌蛾粉原料对小鼠血清雌二醇的影响

由表2可知，2号和5号小鼠的血清雌二醇含量与对照组相比有显著性差异(P<0.05)，说明未交尾蛾有明显增加小鼠体内雌二醇含量的作用，交尾蛾的此作用不明显；柞蚕雌蛾体的不同部位对小鼠体内雌二醇的含量无显著性差别(P>0.05)。以上结果表明：在选择柞蚕雌蛾作为保健食品原料时，选择未交尾的雌性全蛾即可。

表2 不同配方的小鼠血清雌二醇含量

注：* 表示P<0.05

2.3 柞蚕雌蛾复方最佳配方筛选

以2号柞蚕雌蛾粉为主要原料，按几种不同比例配以葛根、茯苓、薏苡、女贞子、红景天等中药材，分成6～10号五组复方，考察复方柞蚕雌蛾粉对小鼠生殖器官和血清雌二醇含量的影响，结果如下。

2.3.1 复方柞蚕雌蛾粉对小鼠生殖器官系数的影响

由表3可见，不同组方对小鼠生殖器官的重量系数影响不同，6号组的子宫和卵巢的重量系数与阳性对照组相比有显著性差异(P<0.05)，但与空白对照组相比差异不明显。其它组子宫和卵巢的重量系数与阳性对照组相比无显著性差异(P>0.05)，说明无增重作用。

表3 不同组方对小鼠生殖器官系数的影响

注：* 表示P<0.05。

2.3.2 复方柞蚕雌蛾粉对小鼠血清雌二醇的影响

从表4可知，6号、7号组小鼠血清雌二醇含量高于空白对照组和阳性对照组，但没达到显著性水平(P>0.05)。其他组没有增加小鼠血清雌二醇含量的作用。

综合以上结果，拟选用6号组作为柞蚕雌蛾女性保健食品的初步配方，进行进一步试验。

表4 柞蚕雌蛾对小鼠血清雌二醇的影响

2.4 柞蚕雌蛾女性保健食品的配方筛选

2.4.1 柞蚕雌蛾女性保健食品对小鼠体重的影响

从表5可见，小鼠经21天给予柞蚕雌蛾女性保健食品，小鼠体重没有明显的变化，但有一定的促进作用(P>0.05)，没有发胖和消瘦、生病和死亡。由此说明小鼠日取食4 g/kg较大剂量的雌蛾保健食品对其生长发育无不良影响。

表5 柞蚕雌蛾女性保健食品对小鼠体重增长的影响[6]

2.4.2 柞蚕雌蛾女性保健食品对小鼠生殖器官系数的影响

从表6可见，低剂量组柞蚕雌蛾女性保健食品可显著增加卵巢的重量系数(p<0.05)，中、高剂量组均达到了极显著水平(p<0.001)。各剂量组子宫的重量系数也有所增加，但无统计学意义。说明柞蚕雌蛾女性保健食品具有促进动物性器官发育的作用。

表6 柞蚕雌蛾女性保健食品对小鼠生殖器官系数的影响

注：* 表示P<0.05， **表示P<0.001。

2.4.3 柞蚕雌蛾女性保健食品对小鼠血清孕酮、雌二醇的影响

从表7可知，高剂量的柞蚕雌蛾女性保健食品可极显著提高小鼠血清孕酮和雌二醇的含量(P<0.001)。中、低剂量组有提高小鼠血清孕酮、雌二醇的含量的作用，但无统计学意义。

表7 柞蚕雌蛾女性保健食品对小鼠血清孕酮、雌二醇的影响

注：**表示P<0.001。

3 讨 论

卵巢是雌性动物的生殖器官之一。卵巢的功能是产生卵子和分泌类固醇激素、雌激素和孕激素以及少量的雄性激素，卵巢衰老后则分泌的各种激素自然减少，卵巢的功能也随之衰退。卵巢功能衰退可使女性带来月经失调、排卵率低下、骨蒸潮热、失眠多梦等症状。30岁以后的女性，步入了卵巢功能衰退期，卵巢早衰是引起体内一系列变化的根本原因。卵巢功能改善后，可从本质上延缓女性衰老[4,7]。

本研究表明：柞蚕雌蛾女性保健食品对小鼠体重增长无不良影响，没有增重和减重作用；且能显著增加卵巢的重量，提高小鼠血清中孕酮和雌二醇的含量。由此可推论柞蚕雌蛾女性保健食品副作用低，并具有促进动物性器官发育和类雌性素样作用，是良好的女性保健食品。