一例副猪嗜血杆菌病的诊断与分析

2020-07-02尧国民李中波侯强红

吉林畜牧兽医 2020年5期

尧国民，舒鸣，王湘，李中波，侯强红

怀化职业技术学院，湖南怀化 418000

近年来，怀化市生猪养殖发展迅速，规模化养殖模式占比逐渐提高，同时养猪业给当地政府和养殖户带来巨大经济收入。在生猪养殖过程中，特别是饲养管理水平较低的情况下，猪群易感染诸多病原，从而引发疾病，甚至导致死亡。其中副猪嗜血杆菌病在猪场中较为常见，不同阶段猪群对该病均易感，但由于保育猪或仔猪免疫性能低下，更易受到该病的感染，同时引发严重的临床表现，如脑膜炎、关节炎和全身性浆膜炎等，且发病率和死亡率均较高，给猪场造成巨大经济损失[1，2]。

龙剑[3]等对湖南部分地区规模化猪场发病仔猪进行细菌感染情况调查，结果发现副猪嗜血杆菌（HPS）检出率高达30%（24/80），且分离的菌株对部分常用抗生素耐药；河南及周边地区发病猪群HPS 分离率为21.7%（531/2445），且血清型众多，但主要以4 型为主，提示HPS 在我国猪场流行情况严重，给养殖业造成经济损失巨大。本文以一例保育猪副猪嗜血杆菌病为例，对其临床和实验室诊断过程进行阐述，同时根据药敏试验结果对猪群用药，最终使疫情得到有效控制。

1 猪场发病情况

怀化市某规模化猪场饲养保育猪约900 余头，该猪场为自繁自养模式。2019 年11 月初，由于天气突然降温，其中一栋栏舍部分保育猪发病，病猪主要临床症状包括体温升高（约40 ℃）、精神沉郁、采食量下降、少部分发病严重的病猪咳嗽、呼吸困难、且四肢关节肿胀，卧躺在地，不愿合群。

2 病理变化与样品采集

对死亡不久的病猪进行解剖，其腹股沟淋巴结和颌下淋巴结肿大，且切面多汁；胸腔内蓄积大量浑浊液体，且肺部实变，肺部表面组织与腹腔黏连，大量纤维状物质渗出；剖开肿胀关节，有大量清亮积液流出。

无菌采集病变明显组织器官，如淋巴结和肺脏等，并分别收集腹腔和关节处积液，分别标记后，进行实验室诊断。

3 实验室诊断

3.1 细菌性病原检测

3.1.1 细菌分离培养与鉴定

取适量病变组织和积液入灭菌研钵，用灭菌眼科剪将组织充分剪碎，其后以1:10 比例加入无菌生理盐水，充分混匀后用无菌纱布过滤；用灭菌接种环蘸取少量过滤液分别在普通琼脂培养基和10%乳牛血清的TSA 培养基表面平板划线，放置于37 ℃恒温箱内培养，分别于24 h 和48 h 观察平板培养基表面菌落生长情况。结果：普通琼脂培养基表明无任何菌落生长，而TSA 培养基表面出现露珠状、透明而光滑的菌落。将单一菌落均匀涂抹在玻璃片上，以革兰氏染色法对样品进行处理，其后油镜下观察菌落形态：菌株为革兰氏阴性菌，形态为单个或成对丝状杆菌。

3.1.2 小鼠致病性试验与药敏试验

用灭菌牙签随机挑取3 个菌落接种于TSB 培养基，37 ℃培养24 h，其后将菌液（100 µL）腹腔注射至5 只健康小鼠体内（试验组I、II 和III），并设置对照组（注射等体积生理盐水），观察不同组小鼠存活情况。结果发现3 组试验组小鼠死亡率高达100.0%、100.0%和80.0%，而对照组小鼠一直存活，且将试验组小鼠病变组织处理后染色镜检，菌株形态和大小与之前检测结果一致，说明小鼠是因感染副猪嗜血杆菌而死亡，同时本次试验分离的副猪嗜血杆菌分离株均为强毒株。

将其中一株副猪嗜血杆菌强毒株进行扩增培养，同时用L 型玻棒将适当浓度菌液均匀涂抹在固体培养基表面，于37 ℃干燥2 ～3 min，其后将14 种不同药敏纸片贴在培养基表面（4 种纸片/培养基），并固定。将培养基放在37 ℃恒温箱内培养，24 h 后判定菌株对不同抗生素的敏感性。药敏试验结果显示：菌株对头孢噻呋、氟苯尼考、氧氟沙星、阿莫西林和卡那霉素高度敏感，对阿米卡星、头孢氨苄、新霉素、链霉素和四环素中敏，对环丙沙星、诺氟沙星、庆大霉素和青霉素高度耐药。

3.2 病毒性病原检测

取发病明显组织，适当处理用商用试剂盒提取组织DNA 和RNA 核酸，并用核转录试剂盒将RNA反转录为cDNA，以DNA 或cDNA 样品为模板，使用PCR 或RT-PCR 法检测样品中是否存在猪圆环病毒、猪伪狂犬病毒、猪蓝耳病毒和猪瘟病毒病原。结果发现，被检样品中均未检测出以上病原，提示发病猪群未感染以上4 种病毒。