依非韦伦和齐多夫定检测方法进展

杨浩冉

（儿童发展与学习科学教育部重点实验室，东南大学 生物科学与医学工程学院，江苏南京 210096）

截至2018年底，我国报告的现存活艾滋病病毒（HIV）感染者/病人86万例，其中，2018年新发现14.9万例，死亡3.8万例，平均每小时新发现17例[1]。针对这一严峻现状，我国采用多种药物联合用药的高效抗逆转录病毒疗法，以降低HIV感染者和艾滋病者的发病率和死亡率。越来越多的证据表明，抗逆转录病毒疗法的依从性对抑制病毒、提高生存率和生活质量有着重要的作用。在实际治疗过程中，药物不良反应、服药困难、社会歧视等许多因素都会影响患者的依从性，无法达到最佳疗效。目前，可以通过检测不同生物基质中抗逆转录病毒药物的浓度，来评估患者服药依从性，从而达到改善治疗效果的目的。依非韦伦和齐多夫定是中国一线治疗方案中的主要抗逆转录病毒药物，现有一些研究已经建立了依非韦伦和齐多夫定药物浓度准确定量的方法。但由于它们选择的生物基质以及依托的检测技术不同，各有优缺点。本文将从生物基质的选取和检测技术两个角度出发，依非韦伦和齐多夫定不同检测方法的优点和不足，为其他抗逆转录病毒药物浓度的定量研究提供参考。

1 生物样品

选择生物样品是药物浓度检测研究中重要的环节，与实验目的相匹配的生物样品更有利于研究的开展。通过查阅文献，发现现有研究已选择多种生物样品进行依非韦伦和齐多夫定药物浓度水平的定量检测。回顾现有研究，发现选择的生物样品可以分为两大类，一类是液体样本（以血浆为代表），另一类是固体样本（以头发为代表）。由于血浆中依非韦伦和齐多夫定浓度较高，因此对仪器检测要求低。但是血浆的采集复杂，属于侵入性采集，储存成本高。血样药物浓度反映的是药物短时间内的浓度变化。而头发中药物浓度较低，故对检测技术要求高。但头发样品的采集较为简单，属于无创采集，且易于储存。头发药物浓度反映的是药物长期的浓度变化。因此，从研究目的来看，如果监测短时间药物浓度和服药依从性，应该选用血浆作为生物样本；如果监测长时间药物浓度和服药依从性，应该选用头发作为生物样本。

2 检测技术

目前广泛应用于依非韦伦和齐多夫定分析检测的方法有液相色谱-紫外法（LC-UV）、气相色谱串联质谱法（GC-MS）、液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）等。表1展示了不同生物样品中的依非韦伦和齐多夫定检测方法的一些重要参数，本文通过比较各种检测方法的方法验证参数，分析他们的优点和不足。

液相色谱-紫外法可以可以快速分离待测物，再通过待测物质对于紫外光的不同吸收波长来测定待测物质成分从而达到定量的目的。许多研究者已经将液相色谱-紫外法用于多种待测物的定量分析。由于血浆中药物浓度水平较高，李燕青等[2]曾采用LC-UV在波长268nm处测定血浆中齐多夫定含量，定量限为50 ng/mL。Nitin等人[3]在血浆中建立了检测血浆中依非韦伦的LC-UV方法，该方法下检测依非韦伦定量限为50 ng/mL。液相色谱-紫外法对实验室的检测设备要求较低，操作相对容易上手，检测的精确度和准确度较好，但是该方法下定量限比较高，不适合检测一些残留浓度较低的生物样本。

气相色谱法是指用气体作为流动相的色谱法，由于样品在气相中传递速度快，所以样品组分在流动相和固定相之间可以瞬间达到平衡，质谱检测器具有高灵敏选择性。气相色谱串联质谱法可将气相色谱的高效分离能力与质谱独特的生物灵敏选择性相结合，早期常被用来准确定量血浆中药物浓度。Patrick等人[4]对人血浆中的依非韦伦和其他药物进行气相色谱串联质谱法检测，该方法下依非韦伦的定量限是72 ng/mL，与其他方法相比，定量限较高。GC-MS与LC-UV相比，能够减少杂峰干扰，同时该方法也具有较好的灵敏度和选择性。存在的不足之处就是，该方法下部分待测物衍生化过程比较复杂，定量限也较高。

由于质谱和色谱灵敏度相当，且色谱可以作为质谱的进样系统，质谱可以作为色谱的检测仪器，具有分离效果好、响应速度快、应用领域广等优点。液相色谱串联质谱法成为目前用于定量微量级有机混合物的最好方法。由于该方法的检测限较低，所以无论是血浆还是头发中，都可选择LC-MS/MS作为同时检测的分析方法。张丽军等人[5]和Valluru等[6]分别建立了血浆中齐多夫定和其他药物的LC-MS/MS检测方法，该方法下定量限分别为25 ng/mL和5 ng/mL，回收率也符合检测标准。Hélène等人[7]建立了检测血浆中依非韦伦和其他药物的LC-MS/MS方法，该方法下依非韦伦的定量限为5 ng/mL。尽管头发中药物浓度较低，Chu等人[8]利用LC-MS/MS方法同时准确定量10mg头发中依非韦伦和齐多夫定浓度，该方法下依非韦伦的定量限为36 pg/mg，齐多夫定的定量限为16 pg/mg。此外，Jenna等人[9]建立了0.2mg头发中齐多夫定和其他药物浓度的LC-MS/MS方法，实现了在更少发量中的齐多夫定的定量检测，说明液相色谱串联质谱法具有高的灵敏度和高特异性。LC-MS/MS表现出较好的检测性能，因此目前被广泛用于生物样品中抗HIV药物浓度的研究。然而，质谱仪目前采购成本和维护成本均比较昂贵，还没有在实验室普及。

3 结语

以上关于依非韦伦和齐多夫定含量检测的研究，可以发现生物样本的选取在早期以血浆样本为主，而目前多种生物样本被共同用于药物检测研究，进一步来评价服药依从性。深层次的原因是检测技术的发展，由于早期检测的定量限较高，研究人员只能选择药物浓度较高的血浆作为生物样本，来评价患者短期的服药依从性。随着科技的进步，检测技术也得到进一步提高，以LC-MS/MS方法为代表的检测技术降低了仪器检测的定量限，从而使得研究人员能够在更多的生物样本中探究药物浓度变化。头发作为新型生物样本，由于其自身的无创采集和可反映患者长期服药情况的优点，目前被逐渐选作生物样品用于药物浓度研究，来评价患者的长期依从性，以此来使患者获得更好的治疗效果。

表1 生物样品中依非韦伦和齐多夫定检测的方法参数

本文对于国内外依非韦伦和齐多夫定定量检测方法的研究进行了梳理，从生物样本和检测技术两个方面进行比较，阐述了各个选择的优点和不足，为后续药物浓度水平检测研究提供了借鉴。