TRAP1、EGF在食管癌中的表达及其与临床病理的相关性

王凯斌，贺伯伟，徐军，王志斌

陕西省核工业二一五医院肿瘤科，陕西 咸阳 712000

食管癌是常见的消化道恶性肿瘤，发病率和死亡率各国间差异较大，而我国是食管癌的高发地区，据流行学调查显示，2012年我国食管癌的死亡病例高达29.7万例，占全球死亡人数的一半，严重威胁我国人群的生命[1]。食管癌的临床表现无明显症状，通常发现已是中晚期，预后较差，因此，早期预测食管癌的发生，提早采取干预措施，在临床中具有十分重要的意义[2-3]。研究显示，干扰肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(tumor necrosis factor receptor-associated protein 1，TRAP1)可导致肿瘤细胞凋亡，对正常细胞无影响，对肿瘤细胞发挥重要作用[4]。TRAP1 是热休克蛋白90家族的重要成员，具有抗氧化和抗凋亡的作用，可以避免细胞的氧化损伤以及凋亡[5]。表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)是一种强有力的有丝分裂剂，具有广泛的生物学活性，能够刺激多种组织细胞分裂和增生，促进肿瘤细胞浸润和转移，提高细胞内代谢水平。EGF已在多种肿瘤中过度表达，但其在食管癌中的相关报道较少[6]。以上两种指标与食管癌的发生密切相关，但其具体临床意义还需进一步探讨。本研究通过观察TRAP1、EGF在食管癌中的表达水平及其与临床病理的相关性，旨在为临床治疗食管癌提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013 年3 月至2017 年3 月在陕西省核工业二一五医院肿瘤科治疗的50 例食管癌患者进行研究(观察组)。纳入标准：(1)符合早期食管癌诊断与治疗进展诊断标准[7]；(2)预计生存期≥3个月；(3)认知功能无障碍。排除标准：(1)过敏体质或对治疗药物过敏者；(2)合并心、肝、肾及造血功能障碍患者；(3)不能配合本次研究样品采集者。观察组患者中男性31 例，女性19 例；年龄38～69 岁，平均(48.67±7.35)岁。选择同期于我院体检的健康人群50例作为对照组，其中男性30 例，女性20 例；年龄39～70 岁，平均(48.72±7.43)岁。两组受检者的性别和年龄比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准，所有受检者均知情并签署同意书。

1.2 方法 收集食管癌患者的手术切除组织，制作石蜡切片，使用10%福尔马林固定标本后，石蜡包埋，得到4 μm厚度的切片，并使用SP免疫组织化学法观察染色结果，SP免疫组化通用试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司。收集健康人群的正常食管黏膜组织，采用上述方法进行处理。

1.3 结果判断标准 于高倍镜观察下，选择10个视野观察1 000个细胞[8]，首先观察肿瘤细胞着色的深浅程度，0分为无色，1分为淡黄色，2分为黄色，3分为棕黄色；再观察阳性细胞所占百分比，0分为＜10%，1 分为10%～30%，2 分为31%～60%，3 分为＞60%；两项结果相加，总分＞2为阳性，反之为阴性。

1.4 统计学方法 应用SPSS18.0 统计软件进行数据分析，计数资料比较以率表示，采用χ2检验，相关性采用Spearman相关性分析法，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组受检者的血清TRAP1、EGF 水平比较 观察组患者的血清TRAP1、EGF阳性表达率明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 两组受检者血清TRAP1、EGF水平比较[例(%)]

2.2 观察组TRAP1、EGF表达水平与临床病理的关系 在食管癌组织中，TRAP1、EGF 表达水平与发病部位、分化程度、淋巴转移及TNM分期均有密切关系(P＜0.05)，见表2。

表2 观察组TRAP1、EGF表达水平与临床病理的关系[例(%)]

2.3 TRAP1、EGF 表达水平与临床病理的相关性 将发病部位、分化程度、淋巴转移及TNM分期作为因变量，将血清TRAP1、EGF 分别作为自变量，Spearman 相关性分析结果显示，血清TRAP1、EGF 表达水平与肿瘤的发病部位、分化程度、临床分期及淋巴转移之间均呈正相关(P＜0.01)，见表3。

表3 血清TRAP1、EGF水平与临床病理的相关性

3 讨论

食管癌是临床常见的恶性肿瘤，发病率较高，多发生于40岁以上的男性。发病机制较为复杂，可能与多种因素有关。患者早期无特异性症状，仅在吞咽食物时有不同程度的不适，且进展缓慢，中晚期癌已侵犯食管外组织，出现肝、脑等脏器转移等恶病质状态[9-10]。近年来，食管癌早期诊断方面取得了很大进步，但患者预后仍然较差，因此，研究食管癌病情进展机制，寻找新的治疗靶点是改善患者预后的关键[11]。近年来，随着医疗技术的发展，靶向药物对点治疗肿瘤快速发展，研究肿瘤组织中突变靶向已成为近年来治疗肿瘤的热点。

TRAP1可导致肿瘤细胞凋亡，对正常细胞无影响，在肿瘤细胞中可以发挥重要作用，因此靶向抑制TRAP1的表达有望成为治疗或干预肿瘤生长的重要靶点。EGF作为一种强力的有丝分裂剂，其受体在多种肿瘤组织中被发现。EGF靶向药物对EGF突变的肿瘤患者疗效显著，但其在食管癌中的相关报道较少[12-13]。两种指标均是靶向药物对点治疗，但其与食管癌的具体意义还需进一步探讨。

TRAP1 由645 个 氨基酸构成，包 含ATP 结 合区域，能够阻止受损蛋白解折叠，抑制活性氧族ROS 功能，维持线粒体的完整，其在肿瘤细胞中过度表达能影响患者肿瘤的进展，已被证实在多种肿瘤中表达异常[14]。有研究显示，TRAP1 在食管癌组织中表达过量，与疾病的发生关系密切[15]。本研究结果显示，食管癌患者TRAP1 阳性表达率明显高于健康体检者，TRAP1和发病部位、分化程度、淋巴转移及TNM分期均关系密切，且其与分化程度、临床分期及淋巴转移之间呈正相关。HAQUE 等[16]研究也表明，TRAP1 在食管癌的表达过量。说明，当患者发生食管癌时，血清TRAP1阳性率升高，在食管癌的发生过程中具有重要作用，可作为食管癌预后的标志物。分析是因为TRAP1 能够抑制AMP 依赖的蛋白激酶的活化，克服代谢应激，从而促进肿瘤细胞的转移，激活氨酸/苏氨酸蛋白激酶，增强TRAP1 丝氨酸磷酸化，同时其水平的下调能够增加活性氧族ROS的产生，导致线粒体功能性损伤，从而发挥其抗肿瘤细胞凋亡的作用，导致食管癌发生转移。

EGF是一种强烈的促细胞有丝分裂剂，其受体被发生得益于肿瘤组织的诸多报道，肿瘤细胞株受到EGF 的刺激而生长，从而分裂，促进肿瘤细胞的生长，其在肿瘤中的突变已成为近年来研究肿瘤发展的热点。将EGF加入细胞培养液内，能加速致癌作用的转化，恶性肿瘤细胞能够分泌EGF 的生长[17-18]。有研究显示，EGF在食管癌中呈高表达，与食管癌的发生、发展关系密切[19]。本研究结果显示，食管癌患者EGF阳性表达率明显高于健康体检者，EGF 和发病部位、分化程度、淋巴转移及TNM分期均有密切关系，且其与分化程度、临床分期及淋巴转移之间呈正相关。国外研究显示，EGF在食管癌中表达过量，与疾病的发生、发展关系密切[20]，与本次研究结果相似，说明EGF 可预测早期癌发生，并参与了肿瘤细胞向恶性转化的过程。这可能是因为EGF 的高表达能减弱细胞间黏附能力，使癌细胞侵袭能力相对增加，促使细胞向基底膜转移，从淋巴管进入淋巴结，进一步发生转移，还能通过与跨膜表皮生长因子受体相结合，控制细胞的代谢与癌变。但本次研究样本较少时间较短，且未分析治疗前后各项指标的变化，为更深入探讨其机制，今后仍需扩大样本量，延长实验时间进一步深入研究。

综上所述，在食管癌组织中TRAP1、EGF 的高表达与临床病理存在着密切关系，可促使疾病进展，为靶向药物治疗食管癌提供了新思路。