升阳益胃汤对糜烂性胃炎患者HGF/c-Met信号通路的影响

2020-05-15周锐钧陈渠发周光辉

现代消化及介入诊疗 2020年4期

周锐钧,陈渠发，周光辉

糜烂性胃炎属消化系统常见疾病，国内检出率占胃镜检查的6.4%～9.8%，临床多表现为上腹部不适、泛酸嗳气、腹胀等症状，与生活习惯、自身免疫、幽门螺杆菌感染、精神因素、胃酸-胃蛋白酶等密切相关[1]。另有报道证实，肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)及HGF受体(c-Met)参与慢性糜烂性胃炎的发生及进展[2]。目前西医治疗本病主要采取对症治疗(如抗幽门螺杆菌或镜下治疗、保护胃黏膜、抑制胃酸等)，虽可取得良好的近期疗效，但易反复，副作用较大，如长期使用质子泵抑制剂类药物可引起胃肠道营养物质吸收异常、肠道菌群失调，促使感染、消化道黏膜病变等风险增加，诱发质子泵抑制剂相关性萎缩性胃炎[3]。祖国中医学认为，本病属“胃脘痛”、“呃逆”等范畴，多因外感六淫、劳逸失度、情志所伤、饮食不节或药物刺激发病，病机在于脾胃气虚、湿热内蕴、清阳不升，病理性质以本虚标实、虚实夹杂为主，主张以益气升阳、祛湿清热为法则，以辛甘温之剂，补其中而升其阳，其中升阳益胃汤属于经典名方，升阳益气，祛湿清热，疏理气机，在慢性胃炎治疗中具有重要作用[4-5]。但目前鲜有报道探讨升阳益胃汤对糜烂性胃炎患者HGF/c-Met信号通路的影响，故本文展开相关研究，旨在为该病治疗提供参考，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

纳入2017年2月至2019年2月于我院收治的100例糜烂性胃炎患者为对象，开展前瞻性研究。按照抽签随机方法，将入选患者分为两组，各50例。两组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。本研究经我院医学伦理委员会(批号：2017-28号)批准，所有患者及家属均签署知情同意书。

表1 两组一般资料比较

1.2 诊断标准

(1)西医诊断标准：参照《中国慢性胃炎共识意见》[6]：①平坦型：胃黏膜单或多个糜烂灶，糜烂灶自针尖样至直径数厘米不等；②隆起型：单或多个丘疹样、膨大皱襞状、疣状隆起，直径约为5～10 mm，顶端显现黏膜缺损，或呈脐样凹陷，中央存在糜烂；(2)中医诊断标准：参照《慢性胃炎中西医结合诊疗共识意见》[7]，辨证为脾胃湿热证：①主症：胃脘痞胀或疼痛；②次症：胃脘灼热，恶心呕吐，口苦口臭，大便黏滞；③舌脉：舌质红，苔黄腻或黄厚，脉滑数或濡数。符合上述全部主症兼有舌脉及任何1项次症即可诊断。

1.3 纳入标准

(1)符合上述西医、中医诊断标准；(2)年龄≥18岁，首次发病；(3)中医辨证为脾胃湿热证；(4)病程>12个月；(5)入组前2周内未接受升阳益胃汤及其他中药等治疗。

1.4 排除标准

(1)严重心、肾、肝等重要脏器功能不全；(2)精神类疾病、传染病；(3)十二指肠溃疡、胃溃疡及胃黏膜病理确诊恶变；(4)恶性肿瘤、感染性疾病；(5)胃泌素瘤、药物等特殊原因所致糜烂性胃炎；(6)过敏体质或对本研究药物过敏者；(7)妊娠或哺乳期妇女。

1.5 治疗方法

所有患者均接受基础治疗，包括规律饮食、维持水电解质和酸碱平衡等。在此基础上对照组服用阿拉坦五味丸(乌兰浩特中蒙制药有限公司，国药准字Z20073018，规格0.2 g/粒重)，口服，11～15粒/次，1～2次/d。观察组在基础治疗前提下加用升阳益胃汤加减治疗。组方：炒白术、党参、炙黄芪、茯苓各15 g，炒白芍10 g，独活、升麻、醋柴胡、法半夏、羌活、防风各6 g，川连、炙甘草各3 g。辩证加减：饮食不香者辅以炒麦芽、炒谷芽、六神曲各15 g；嗳气甚者加紫苏梗、炒枳壳各10 g，陈皮、厚朴各6 g；反酸者加乌贼骨15 g，吴茱萸1 g；寐差且苔黄腻者加竹茹、枳壳各10 g。上述中药材均属精制饮片，由四川新荷花中药饮片股份有限公司提供。中药服法：1剂/d，水煎2次取汁400 mL，分早、晚饭后温服。两组均持续治疗24周。

1.6 观察指标

(1)血清HGF表达水平：分别于治疗前及治疗结束后，采集患者清晨空腹外周静脉血3 mL，以500 r/min的速度离心15 min，血清分离后置入-30 ℃保存待测。采用反向竞争酶联免疫吸附测定法行血清HGF检测，试剂盒由上海蓝基生物科技有限公司提供；(2)胃黏膜组织内HGF、c-Met表达水平：基于胃镜下在胃窦部糜烂处留取2～3块胃黏膜组织(复查时显示糜烂消失，则尽可能于原部位活检钳取2～3块胃黏膜组织)，活检深度须达黏膜肌层。经10%福尔马林固定(6 h)、常规脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、切片、烤片处理后封片。采用免疫组化SP法染色，行胃黏膜组织中HGF、c-Met表达测定，经烤片、二甲苯Ⅰ及Ⅱ浸泡、枸橼酸修复液修复、正常山羊血清封闭、滴加一抗、滴加二抗、滴加三抗、二氨基联苯氨显色、苏木素-伊红(hematoxylin eosin，HE)染色、二甲苯Ⅰ及Ⅱ透明、中性树胶封片处理后进行结果判定。阴性对照用磷酸盐缓冲液代替一抗予以孵育，阳性表达均为细胞质有黄棕色颗粒出现，每张切片高倍镜下(40×)随机选择阳性区域5个，借助Image-pro plus软件(美国Media Cybernetics公司)行光密度分析，统计HGF、c-Met的累积光密度值(Integrate optical density，IOD)，取各切片5个视野的均数纳为统计值。HGF多克隆兔抗人抗体购自Abgent公司，c-Met多克隆兔抗人抗体购自proteintech公司，二氨基联苯氨显色试剂盒及兔SP试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.7 统计学方法

2 结果

2.1 两组治疗前后血清HGF表达水平比较

两组治疗后血清HGF表达水平均显著低于治疗前(P<0.05)，且观察组治疗后血清HGF表达水平显著低于对照组(P<0.05)，见表2。

表2 两组治疗前后血清HGF表达水平比较

注：与同组治疗前比较，#P<0.05

2.2 两组治疗前后胃黏膜组织内HGF表达水平比较

观察组治疗后胃黏膜组织内HGF表达水平显著低于治疗前(P<0.05)，对照组治疗后胃黏膜组织内HGF表达水平较治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05)；观察组治疗后胃黏膜组织内HGF表达水平显著低于对照组(P<0.05)，见表3及图1。

表3 两组治疗前后胃黏膜组织内HGF表达水平比较

注：与同组治疗前比较，#P<0.05

2.3 两组治疗前后胃黏膜组织内c-Met表达水平比较

两组治疗后胃黏膜组织内c-Met表达水平均显著低于治疗前(P<0.05)，且观察组治疗后胃黏膜组织内c-Met表达水平显著低于对照组(P<0.05)，见表4及图2。

2.4 慢性糜烂性胃炎患者HGF与c-Met的相关性分析

胃黏膜组织中HGF与c-Met呈正相关性(r=0.898，P=0.000)，胃黏膜组织HGF与血清HGF呈正相关性(r=0.889，P=0.000)。

图1 两组治疗前后HGF表达水平(HE，×400) A：观察组治疗前，存在HGF过表达；B：观察组治疗后，HGF表达明显下调;C:对照组治疗前，存在HGF过表达；D：对照组治疗后，HGF表达较治疗前无显著变化

表4 两组治疗前后胃黏膜组织内c-Met表达水平比较

注：与同组治疗前比较，#P<0.05

3 讨论

慢性糜烂性胃炎属消化系统疾病中常见病和多发病，胃黏膜病变程度与症状轻重并非一致，常与慢性浅表性胃炎、消化性溃疡等伴发，发病率呈逐年增长趋势，但目前病因及发病机理尚未完全明确，可能与幽门螺杆菌感染、癌基因和抑癌基因异常表达、免疫因素、胃酸增多等有关[8-9]。目前西医治疗本病主张以对症治疗为主，包括幽门螺杆菌根除治疗、抑制或中和胃酸、保护胃黏膜、促进胃肠动力、补充消化酶、调节胃肠神经、抑制胆汁反流、调节自身免疫等，虽可取得良好的近期疗效，但长期服用西药副作用较大，患者不规律服药，致病情反复，迀延难愈。

祖国中医认为，本病病因在于饮食不节、素体脾虚、情志不畅，诸因致脾胃功能失调、水湿不化、湿浊中阻、日久蕴积化热、酿生浊毒，浊毒内蕴属本病病机，故以化浊解毒为法则，清热解毒，化浊利湿，去邪正安。而本研究中患者脾胃气虚，运化不利，水湿内停，湿阻气机，循环往复，浊阴不降，湿邪阻滞中焦，湿邪蕴久化热，故辨证属脾胃湿热证，脾胃虚弱属病理基础，湿热阻络为病变主要机理。而有报道显示，脾胃湿热证属浊毒内蕴证中的一种类型，遂治疗以升阳益气、祛湿清热、疏理气机为大法，方药施以升阳益胃汤[10]。多项研究表明，升阳益胃汤可改善脾胃虚弱型慢性萎缩性胃炎患者胃脘隐痛、痞闷、泛酸等症状，逆转慢性萎缩性胃炎癌前病变胃黏膜状态，促使胃动力作用增强[11-12]。但关于该方药对糜烂性胃炎患者血清及胃黏膜组织内HGF、c-Met水平的影响，目前鲜有报道分析，故笔者对此进行深入研究。

本研究结果显示，观察组治疗后血清HGF表达水平、胃黏膜组织内HGF及c-Met表达水平均明显低于对照组，预示血清HGF和胃黏膜组织HGF、c-Met表达异常升高可能致慢性糜烂性胃炎的发生、发展，而升阳益胃汤可抑制HGF、c-Met异常表达。王彦刚等[13]发现，浊毒内蕴组血清HGF和胃黏膜组织HGF、c-Met表达明显高于肝胃不和组，预示“浊毒”与慢性糜烂性胃炎的发生密切相关；分析其具体机制，可能是血清HGF和胃黏膜组织HGF、c-Met表达异常增多，促使HGF/c-Met信号通路被异常激活，诱发一系列异常信号级联反应，引起胃黏膜损伤及修复延迟，导致细胞异常生长、凋亡减少，从而进展至肠上皮化生或异型增生，最终引发慢性糜烂性胃炎。HGF多由间质细胞形成，可促进多种类型细胞(如肝细胞、内皮细胞等)生长、迁移、形态改变，正常条件下可诱发多种细胞反应(如有丝分裂等)；而C-Met蛋白属HGF受体，为原癌基因c-Met编码产物，酪氨酸激酶活性明显[14-15]。HGF/c-Met正常状况下仅短暂激活，与组织再生、血管生成等相关，组织损伤时发挥体内平衡维持作用，而一旦正常细胞HGF过度表达时，则诱发细胞癌变[16-17]。既往报道发现，慢性糜烂性胃炎患者胃黏膜组织中HGF、c-Met均呈高表达，预示慢性糜烂性胃炎胃黏膜组织细胞呈高度分裂增殖状，癌变倾向明显[18]。本研究中，发现胃黏膜组织中HGF与c-Met呈正相关性，且血清HGF与胃黏膜组织HGF呈正相关性，证实HGF结合c-Met后激活 HGF/c-Met信号通路，诱发一系列信号传导的酶促反应，可能经构建自身分泌环，持续激活信号通路，诱导c-Met胞质内酪氨酸残基出现自身磷酸化，吸引更多分子、酶停靠，影响胃黏膜细胞分裂增殖，导致细胞外基质蛋白被降解，诱发胃黏膜损伤或癌变。因此，HGF、c-Met过度表达可能是引发慢性糜烂性胃炎发生、发展及恶变的关键原因。而李晓晓等[19]报道认为，升阳益胃汤可保护慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜，可能与其抑制TLR4介导的信号传导途径，促使白介素-6介导信号通路受阻，引起黏膜损伤减少，最终修复黏膜。此外，有报道认为，升阳益胃汤可降低胃黏膜组织核转录因子κB、B淋巴细胞瘤-2基因、原癌基因等表达，调控细胞凋亡，减轻胃癌前病变胃黏膜损害，缓解胃黏膜组织炎症[20]。笔者认为，升阳益胃汤由炒白术、党参、炙黄芪、茯苓、炒白芍、独活、升麻、醋柴胡、法半夏、羌活、防风、川连、炙甘草组成，其中炒白术、党参、炙黄芪、川连等能改善胃黏膜病理状态，减轻胃黏膜损伤，促进黏膜修复，提高机体免疫功能；诸药联合升发阳气，健脾祛湿，可通过抑制HGF、c-Met异常表达，促使HGF与其受体c-Met异常结合受阻，减少因二者结合所致一系列信号传导的异常酶促反应，进而改善炎症，使其调控细胞周期、干预基因表达的正常作用得到恢复。