艾纳香油中有效成分的定性检测及含量测定

2020-05-08陈前袆曹春月陈伟王鲁何珺

应用化工 2020年3期

陈前袆，曹春月，陈伟，王鲁，何珺

(1.贵州大学药学院，贵州贵阳 550025；2.贵州省生化工程中心，贵州贵阳 550025)

艾纳香(Blumeabalsamifera(L.) DC)为菊科艾纳香属多年生木质草本植物，在广西多个少数民族地区有着十分悠久的用药历史[1]。艾纳香油是通过对艾纳香叶的粗升华物进行压榨分离得到，是我国贵州少数民族用药[2]，具有扩张血管、降低血压[3]、杀菌消炎、镇咳祛痰、强心等作用[4]。艾纳香油有独特的芳香气味，被广泛应用于香料和化妆品行业。Saewan等[5]通过硅胶分离艾纳香得到5个黄酮类化合物；Fazilatun等[6]从艾纳香中提取出11个黄酮类成分。雷婷等[7]对艾纳香进行绿原酸的提取；王治平等[8]建立HPLC测定艾纳香中原儿茶酸含量。姜建平等[9]考察艾纳香水提液中有机酸、乙醇提取液中多糖、黄酮类、恩醌类、皂苷、生物碱类等成分。黄酮类化合物除了有抑制心血管疾病作用[10]还有美白、抗氧化以及延缓衰老的作用[11]；中药中的有机酸类成分具有抑制血小板作用，且某些有机酸如水杨酸等具有可改善肤质、抗皱美白等作用[12]；蒽醌类化合物具有抗肿瘤、脑损伤保护作用[13]，在化妆品行业中具有保湿抑菌的作用。

为探讨艾纳香油中含有哪些种类的有效成分，本实验采用化学方法初步定性检测艾纳香油中的有效成分，采用UV比色法测定艾纳香油中有效成分的含量，为艾纳香油的质量综合控制与评价提供参考依据。

1 实验部分

1.1 试剂与仪器

艾纳香油，2017年11月3日分别购自贵州省罗甸县红水河镇平亭村(S1)、贵州省罗甸艾利康药业(S2)、贵州省罗甸全兴药业(S3)、贵州省罗甸艾原生态药业(S4)；大黄素(批号090102)对照品，购自上海融禾医药科技有限公司；绿原酸(批号09081633)对照品，购自上海同田生物技术股份有限公司；芦丁(批号100080-200306)，购自中国食品药品检定研究院，均供UV含量测定用；碘化铋钾、氢氧化钾、香草醛、蒽酮、甲醇、无水三氯化铝、醋酸镁、浓硫酸等均为分析纯。

UV757CRT紫外可见分光光度计；KQ3200DE超声波清洗器；BT25S电子分析天平。

1.2 实验方法

1.2.1 艾纳香油的定性实验利用pH试纸、KOH溶液、AlCl3溶液、蒽酮-浓硫酸溶液、碘化铋钾溶液对4批艾纳香油进行显色实验，定性检测出4批艾纳香油中是否含有总有机酸、总蒽醌、总黄酮、总多糖、总生物碱成分。

1.2.2 艾纳香油的泡沫实验取5 mL艾纳香油于150 mL锥形瓶中，加入50 mL蒸馏水，充分振荡。以蒸馏水为空白对照。定性检测4批艾纳香油中是否含有总皂苷成分。

1.3 标准曲线的建立

1.3.1 对照品溶液的制备分别精密称取芦丁对照品0.35 mg、绿原酸对照品3.92 mg、大黄素对照品0.74 mg，均加甲醇溶解，定容至10 mL。芦丁、绿原酸和大黄素对照品溶液浓度分别为0.035，0.392，0.074 mg/mL。

1.3.2 芦丁标准曲线精密吸取芦丁对照品溶液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mL于10 mL试管中，以1%氯化铝-甲醇溶液定容至10 mL，摇匀。静置10 min 后，于420 nm[14]处测定其吸光度A。

1.3.3 绿原酸标准曲线精密吸取绿原酸对照品溶液0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mL于10 mL试管中，以甲醇溶液定容至10 mL，摇匀。静置10 min后，于327 nm[15]处测定其吸光度A。

1.3.4 大黄素标准曲线精密吸取大黄素对照品溶液0，0.05，0.1，0.15，0.2，0.25 mL于10 mL试管中，以5%醋酸镁-甲醇溶液定容至10 mL，摇匀。静置10 min后，于222 nm[16]处测定其吸光度A。

1.4 有效成分的含量测定

取S1～S4艾纳香油适量，加入甲醇，溶解，定容即得供试品。分别吸取供试品溶液各3份，分别按1.3节操作显色。摇匀，静置后，分别在420，222，327 nm处测定其吸光度值。并根据标准曲线方程计算出4批艾纳香油中的总黄酮、总蒽醌、总有机酸成分的含量。计算公式如下：

2 结果与讨论

2.1 定性与泡沫实验

由表1可知，S1～S4艾纳香油中均含有总蒽醌、总黄酮、总有机酸成分，无总皂苷、总多糖、生物碱类成分，结果见表1。

表1 艾纳香油成分定性检测结果

2.2 线性关系考察

以标品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表2和图1～图3。R2>0.99，有良好的线性相关性。

表2 对照品的线性关系

图1 芦丁标准曲线

图2 绿原酸标准曲线

图3 大黄素标准曲线

2.3 精密度

精密吸取同一供试品溶液3份，测定6次，记录其吸光度值并计算RSD值。结果芦丁、大黄素及绿原酸的RSD值分别为0.31%，0.84%，0.70%，表明各测定方法精密度良好。

2.4 重复性

精密吸取同一艾纳香油3份，测定6次，记录其吸光度值并计算RSD值。结果芦丁、绿原酸及大黄素的RSD值分别为1.17%，0.75%，0.79%，表明各测定方法重复性良好。

2.5 稳定性

精密吸取同一艾纳香油供试品溶液3份，分别于5，10，15，20，25，30，35，40，45，50，55，60 min下测定吸光度值，并计算RSD值。结果芦丁、绿原酸及大黄素的RSD值分别为1.46%，0.79%，0.95%，各样品溶液和对照品溶液检测吸光度值在 1 h内均表现为基本稳定，表明在1 h内样品稳定性良好。