肝细胞癌患者TACE治疗前后血清miR-145水平变化及其临床意义

李天纵，周 松，周 石

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一种具有高发病率和高死亡率的恶性肿瘤，约占原发性肝癌的90 %[1]。经导管动脉化疗栓塞术(transcatheter arterial chemoembolization，TACE)是目前治疗中晚期HCC患者首选非手术治疗方法[2,3]。甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)是评估TACE术后疗效的常用标志物[4]，但以往研究表明，AFP存在部分假阴性现象[5,6]。研究表明，miR-145在HCC组织中水平下调，其能够抑制肝癌细胞的增殖，可能作为诊断和评估疗效的潜在生物标志物[7]。本研究检测了HCC患者TACE治疗前后血清microRNA-145(miR-145)的变化，以探讨其对预后的预测价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2013年1月～2015年12月我院收治的HCC患者72例，男45例，女27例；年龄35～70岁，平均年龄为(51.45±10.20)岁。符合2011年我国发布的原发性肝癌临床诊断标准[8]，即具有病毒感染或肝硬化基础，肝脏占位直径≥2 cm，CT或MRI检查提示占位部位呈“快进快出”表现。纳入患者病灶数≤3个，肿瘤直径≤10 cm，均为初诊患者，入院前未接受任何化疗、放疗或分子靶向治疗，肝功能Child-Pugh分级为A级或B级。排除标准：①存在行TACE禁忌证；②肝内外转移；③肿瘤体积>全肝的70%；④有严重的肾脏功能障碍性疾病。另选取同期在本院体检的60例正常人作为对照组，男36例，女24例；年龄35～70岁，平均年龄为(52.04±9.75)岁。两组受试者性别和年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。患者已签署知情同意书，本研究经医院医学伦理委员会批准进行。

1.2 TACE治疗方法 采用Seldinger技术，经皮穿刺股动脉，将导管插至腹动脉或肝动脉后，造影确定肿瘤位置、大小、数目和供血动脉等，再用微导管选择性插入肿瘤供血动脉，注入适量和适当的栓塞剂【碘油化疗乳剂：表阿霉素(上海一基实业有限公司)60 mg，奥沙利铂(上海恒斐生物科技有限公司)50 mg，与其他表柔比星类、丝裂霉素类等联合治疗，用量不超过30 mL】。手术结束前再次造影观察血管栓塞情况，手术结束后给予止呕、护肝、护胃等针对性治疗。

1.3 血清AFP检测 采用ELISA法检测(上海基免实业有限公司)。

1.4 血清miR-145水平检测 采用RNA提取试剂盒提取血清总RNA，采用反转录试剂盒反转录成cDNA，采用miScript SYBR Green PCR Kit检测血清miR-145水平，反应体系为20 μL，qRT-PCR反应条件：95℃：60 s；60℃：30 s，70℃：30 s，共40个循环。miR-145及内参U6的引物序列见表1。采用2-ΔΔCT法对miR-145水平进行定量分析。

表1 qRT-PCR引物序列

1.5 疗效评价方法 于治疗前1 d和治疗后1个月行CT(上海寰熙医疗器械有限公司)或MRI(上海寰熙医疗器械有限公司)扫描检查，采用根据李虎子等[9]改良的Recist标准评估TACE治疗效果，包括完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、疾病进展(PD)和疾病稳定(SD)。

1.6 随访 随访自出院之日起至2018年12月30日，对所有患者进行门诊复查或者电话随访，随访时间为3年，调查并记录患者的生存情况，3年内发生死亡即为不良预后。

2 结果

2.1 疗效情况 在治疗1个月末，16例(22.2 %)为PR，13例(18.1%)为SD，43例(59.7 %)为PD。

2.2 HCC患者与正常人血清miR-145水平比较 治疗前，HCC患者血清miR-145水平显著低于对照组(P<0.05)；术后1个月，HCC患者血清miR-145水平较治疗前显著升高(P<0.05，表2)。

表2 两组受试者血清miR-145水平比较

与对照组比，①P<0.05；与术前比，②P<0.05

2.3 不同临床和病理学特征HCC患者血清miR-145水平比较 以HCC患者术前血清miR-145水平的平均值为界限，将其分为高水平组和低水平组，发现不同性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤分化、癌栓和Child-Pugh分级患者血清miR-145水平无显著性差异(P>0.05)，而不同TNM分级和术前AFP水平患者之间差异显著(P<0.05，表3)。

2.4 不同近期疗效HCC患者血清miR-145水平比较 PD组血清miR-145水平为(0.86±0.21)，显著高于PR或SD组【(0.62±0.19)或(0.75±0.19)，P<0.05】，后两组血清miR-145水平也相差显著(P<0.05)。

2.5 血清miR-145水平与HCC患者预后的关系 随访3年，共有28例患者死亡，其中高miR-14水平患者3 a生存率为75.6 %，显著高于低水平患者的41.94%(x2=8.765，P<0.05)。

2.6 血清miR-145和AFP预测HCC患者不良预后的ROC曲线分析 血清miR-145水平预测HCC患者不良预后的曲线下面积为0.871，诊断截断点为0.87；血清AFP水平预测HCC患者不良预后的曲线下面积为0.851，诊断截断点为404.64 ng/mL，而miR-145联合AFP预测HCC患者不良预后的曲线下面积为0.942，联合预测的敏感度为91.7%，准确度为90.2%(图1)。

图1 血清miR-145和AFP预测HCC不良预后的ROC曲线

3 讨论

据中国癌症统计数据结果显示，2015年我国肝癌的总发病人数为46.61万人，死亡人数约为42.21万人[10,11]。目前，HCC已成为全球第五大恶性肿瘤，居全球癌症死因的第三位[12]。由于HCC具有早期无特异表现、易复发、预后较差等特点，因此HCC至今仍然是威胁人类健康的重大医疗问题[13]。临床显示，提高HCC患者的早期诊断，对改善HCC患者预后，提高生存率具有十分重要的意义[14]。

miRNA是一类内源性、非编码单链小RNA，在肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡中具有重要的作用，与恶性肿瘤的发生、发展及转移过程密切相关[15]。miR-145是miRNA中的一种。研究表明，miR-145通常起抑癌基因的作用，通过抑制原癌基因或调控肿瘤细胞的增殖和凋亡过程，抑制肿瘤的发生发展[16]。研究表明，miR-145在HCC细胞水平下调[17]。本研究结果显示HCC患者血清miR-145水平显著低于对照组，提示miR-145在HCC中水平下调，可能充当肿瘤抑制因子的作用。miR-145在HCC组织细胞水平下调，其水平与淋巴结转移阶段、血管侵犯和肝内转移有关[18]。本研究结果显示HCC患者血清miR-145水平与性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤分化、癌栓、Child-Pugh分级无关，而与TNM分级和术前AFP水平有关，提示血清miR-145可能与HCC疾病进展有关。

TACE主要通过栓塞肿瘤的供血动脉，使肿瘤缺血、缺氧，最终达到促进肿瘤坏死的目的，是目前用于治疗HCC患者的重要方法[19]。本研究结果显示，术后1个月HCC患者血清miR-145水平显著高于术前，PD组血清miR-145水平显著高于PR或SD组，显示miR-145水平随治疗效果的改善而升高。本研究结果显示，随访3年，共有28例患者死亡，其中miR-14高水平患者3 a生存率为75.6 %，显著高于低水平患者的41.94%，提示miR-145水平可能与TACE术后患者的不良预后有关。AFP是目前对于HCC诊断、治疗和复发检测时常用的一种血清学标志物，对HCC具有重要的诊断价值。肝癌患者血清AFP水平升高，且血清AFP水平与肝癌患者术后复发率有关，血清AFP异常升高可增加肝癌患者术后1年复发风险[20]。本研究进一步采用ROC曲线分析miR-145和AFP在HCC不良预后预测方面的价值，结果显示，血清miR-145、AFP水平和miR-145联合AFP预测HCC患者不良预后的曲线下面积分别为0.871、0.851和0.942，两者联合预测HCC不良预后的敏感度为91.7 %，准确度为90.2 %，提示miR-145联合AFP检测可提高HCC患者不良预后的预测价值，可能具有一定的参考意义。