单倍型供者性别与年龄对外周血造血干细胞采集质量的影响

张月梅，张建平，李学英，陈 娟△，马菲菲，乔佳丽，彭露霞，尹晴雪

河北燕达陆道培医院：1.血细胞分离室；2.移植科；3.护理部，河北廊坊 065200；4.山东德州联合医院神经内科，山东德州 253000

造血干细胞移植(HSCT)是血液系统恶性疾病的有效治疗手段，单倍体相合造血干细胞移植在临床应用已近20年，并且取得了巨大发展。对于恶性血液病患者，无人类白细胞抗原(HLA)全相合供者时，单倍体相合亲缘供者已成为国内最为广泛的供者来源[1]。大部分患者均有至少1位HLA部分相合或单倍型亲属供者。HLA等位基因的遗传规律遵从孟德尔遗传定律，在遗传过程中作为一个完整的遗传单位由亲代传给子代，即是单倍型形式连锁遗传的，子代可随机从亲代双方各遗传一个HLA单倍型，因此，单倍型亲属包括父母、子女、同胞或堂表亲。外周血造血干细胞联合骨髓造血干细胞移植可减少慢性移植物抗宿主病发生，提高患者生存质量[2]。河北燕达陆道培医院在单倍型HSCT中，第1天在适合的麻醉术下采集适量骨髓造血干细胞，第2天行外周血造血干细胞(PBSC)采集术，采集足够的造血干细胞是 HSCT成功的关键[3]。河北燕达陆道培医院采用COBE apectra血细胞分离机应用AutoPBSC程序通过离心作用将血液细胞进行分离，以收集所需的血液成分。本研究对河北燕达陆道培医院311例单倍型移植的健康供者的采集情况及相关指标进行分析比较，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 采用回顾性分析方法，选取2016年2月至2018年2月在河北燕达陆道培医院进行PBSC采集的311例单倍型供者作为研究对象。纳入标准：(1)应用COBE apectra血细胞分离机，循环血量10 000～15 000 mL；(2)供者年龄≥20岁；(3)骨髓造血干细胞采集术后次日行PBSC采集术者。因各种原因需再次采集PBSC者未纳入本研究中。将纳入研究的供者按性别分为男性组和女性组，男性组160例，平均年龄(36.24±0.64)岁，平均体质量指数(BMI)(24.97±3.94)kg/m2；女性组151例，平均年龄(35.85±0.63)岁，平均BMI(22.91±3.29)kg/m2。两组供者年龄、循环血量、采集前WBC、采集时间等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经河北燕达陆道培医院伦理委员会审查批准。

1.2仪器与试剂 供者采集前血常规采用血细胞分析检测仪(美国贝克曼库尔特DXH800)，采集物WBC和采集物单个核细胞(MNC)%采用血细胞分析检测仪(迈瑞BC-2600)，采集物CD34+%采用流式细胞检测仪(BD FACSCalibur)。抗凝剂为山东威高集团生产的血液保存液(Ⅰ)，为复方制剂，其1 000 mL的主要组分为：枸橼酸钠22.0 g、枸橼酸8.0 g、葡萄糖24.5 g。

1.3方法 分析性别与年龄因素对健康供者造血干细胞质量的影响。比较各组供者采集物中的WBC、MNC%、CD34+%、MNC数和CD34+数。(1)供者动员：移植前单倍型亲属供者常规做HLA配型、血常规+血型、生化全项、感染8项、凝血4项、HBV定量、HCV定量、弓形虫免疫球蛋白(Ig)G+IgM、巨细胞病毒(CMV)IgG+IgM、EBV IgG+IgM、胸部X线片、心电图等检查，供者采用集落刺激因子(G-CSF)5～10 μg/(kg·d)分早晚2次皮下注射进行干细胞动员。(2)静脉通路：COBE apectra血细胞分离机应用双针式管路，需建立2条静脉通路，异基因供者采血端一般选择肘部静脉穿刺，使用AutoPBSC管路自带的背孔钢针或18G静脉留置针，回输端一般选择手背或手腕处静脉穿刺，使用18G或20G静脉留置针。因采集时间比较长，回输端选择手背或手腕处静脉，可减少供者采集过程中的制动顾虑，增加舒适性，且回输端选择留置针，方便供者活动。(3)采集方法：动员3 d后行骨髓造血干细胞采集术，次日采集前2 h皮下注射G-CSF 5～10 μg/(kg·d)后行PBSC采集术。采用血细胞分离机安装AutoPBSC管路，机器自检通过后，输入供者性别、身高、体质量、外周血WBC和红细胞比容(HCT)，根据输入资料自动设置相关程序参数，采集过程根据具体情况手动调整。采集前口服葡萄糖酸钙溶液20 mL，采集过程中每一小时口服10～20 mL。女性供者或瘦小男性供者采集全程将10%葡萄糖酸钙注射液加入5%葡萄糖注射液250 mL中，另建静脉通路缓慢输注，严密观察有无枸橼酸盐中毒症状，一旦发生中毒应及时对症处理。循环血量10 000～15 000 mL。全血流速40～60 mL/min。枸橼酸钠抗凝剂/全血比率1∶12～1∶15。将每一位供者的各项指标记录在采集登记本中。

2 结 果

2.1男性组和女性组造血干细胞供者一般情况比较 见表1。男性组和女性组造血干细胞供者年龄、采集前WBC、循环血量及采集时间比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.2男性组和女性组造血干细胞供者采集物情况比较 见表2。男性组采集物的WBC、CD34+%、MNC数、CD34+数与女性组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；男性组采集物的MNC%与女性组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

2.3男性组和女性组不同年龄者采集物情况比较 见表3。男性组≤35岁者采集物的MNC%、CD34+%、CD34+数与>35岁者比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；女性组≤35岁者各项采集物指标与>35岁者比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。男性组≤35岁者采集物的WBC、CD34+%、MNC数、CD34+数与女性组≤35岁者比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；男性组>35岁者采集物的MNC%、CD34+数与女性组>35岁者比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。

表1 男性组和女性组造血干细胞供者一般情况比较

表2 男性组和女性组造血干细胞供者采集物情况比较[M(P25～P75)]

注：与女性组比较,*P<0.05。

表3 男性组和女性组不同年龄者采集物情况比较

注：与本组>35岁者比较,*P<0.05；与女性组≤35岁者比较，#P<0.05；与女性组>35岁者比较，△P<0.05。

3 讨 论

PBSC主要存在于有核细胞群体中[4]。HSCT成功的关键是供者提供的 CD34+细胞是否足量,采集物中CD34+细胞越多，即CD34+细胞>2×106/kg(受者体质量)，对于受者造血及免疫系统的重建有重要作用[5]。替代供者尤其是单倍型移植的发展，使HSCT彻底告别供者来源困难的时代。目前的主要问题已不再为是否有供者，而是如何在多个供者中选择最佳供者。本研究结果显示，相同动员及采集情况下，男性供者年龄≤35岁与年龄>35岁时CD34+细胞数均优于女性，年龄≤35岁的男性供者更优于年龄>35岁的男性供者。年龄>35岁的女性供者MNC%方面优于年龄≤35岁的女性供者，但CD34+细胞数方面无区别。本研究结果可为临床医生在选择供者时提供理论依据。有研究报道，在大量临床病例基础上提出的单倍型移植供者“优化选择法则”，即首选年轻、男性、非遗传母系抗原不和供者，可有效降低移植合并发病率，提高患者生存率[6]，这与本研究结果相符。

有报道发现，性别、年龄对PBSC动员采集并无明显影响，但其报道中为患者，而本研究中全部为健康供者，患者与供者之间干细胞动员及采集的区别有待研究[6-7]。同时，也有研究表明，CD34+细胞数与性别、年龄、外周血WBC无关，而外周血MNC数量是影响采集效率的重要因素[8]，此研究中人群为儿童，其中位年龄为10岁，而本研究中人群为中青年。另外，有研究报道，供受者性别组合对于移植预后的影响主要存在于男性患者中，女供男是预后较差的供受者性别组合，女供男组非复发病死率较高，无病生存率及总生存率较低[2]。本研究结果显示，男性供者在 CD34+细胞方面优于女性，当患者是男性时，优先选择男性供者，可为临床提供理论依据。RINALDI等[9]和白连军等[10]研究显示，男性采集结果优于女性，与本研究相符。张曦等[11]分析结果显示，18～60岁患者采集效果最好，>60～65岁患者最差;男性较女性好，健康供者中性别对采集效果无影响。朱玲等[12]研究显示，BMI仅对每公斤体质量CD34+产率呈弱负相关，提示高BMI会减低供者每公斤体质量细胞产率，但临床PBSC成功的关键在于患者输入CD34+细胞>2×106/kg(受者体质量)。郑龑龙等[13]分析结果显示，BMI对采集PBSC后供者血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)降幅有影响，偏瘦组Hb水平下降程度远远高于超重组及肥胖组，对偏瘦供者，应在参数设置上进行调整，减少供者外周血Hb降幅，提高PBSC采集的安全性。美国骨髓捐赠者登记中心规定，供者在PBSC采集前，若第1天PLT<120×109/L或第2天<80×109/L需考虑供者PBSC采集的安全性，以避免在采集后出现PLT<50×109/L[14]。

相对于非血缘造血干细胞来源与脐带血造血干细胞来源，单倍型移植具有供者来源广泛的特点，几乎所有人均可找到供者。从伦理层面分析，由于亲情关系的存在，供者的意愿会更强，当患者因植入不良或复发等合并症再次需要供者来源的造血干细胞或淋巴细胞时，操作性更强，有利于提高总体生存率。在有选择供者空间时，优先选择年轻男性供者。