中晚期非小细胞肺癌患者化疗前后T 淋巴细胞亚群表达差异分析及临床意义

陈艳丽 王媛媛 张 勇 李文洁

肺癌是一种发病率、病死率较高的恶性肿瘤，分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌两种类型。其中非小细胞肺癌占肺癌患者的80%以上［1-5］。2015 年统计数据显示，我国每年约有61 万人死于肺癌［6］。据WHO 预测，中国在2025 年后年肺癌新增病例将大于100 万，届时中国将成为肺癌人数最多的国家［7］。大部分肺癌患者被确诊时，已经是中晚期，丧失了根治性手术切除治疗机会，目前针对于中晚期非小细胞肺癌治疗更多是选择化疗。研究证实肺癌的发生发展过程与机体的免疫状态具有密切关系［8-12］。T淋巴细胞亚群的表达状态可以较好的反映机体的免疫状态，在化疗前后，机体的T 淋巴细胞亚群的表达状态与化疗疗效的相关性，对于预测化疗疗效具有重要临床价值［13］。本文通过探讨中晚期非小细胞肺癌患者化疗前后T 淋巴细胞亚群的表达水平差异，为肺癌的诊疗提供理论基础。

资料与方法

一、临床资料

选择2014 年1 月至2018 年6 月在我院进行化疗治疗的中晚期非小细胞肺癌患者作为研究对象。纳入标准：①患者年龄＜80 岁；②体力状况ECOG 评分［14］在≤7 分；③病理诊断符合中晚期非小细胞肺癌诊断标准［15］；④患者肝肾功能够耐受化疗；⑤至少存在一个可测量评估的肺内病灶，评估标准为recist1.1 标准［10］。排除标准：①妊娠期或哺乳期；②患者有3 级高血压；③严重肺内感染或者全身感染；④有血液系统疾病者；⑤对化疗药物过敏者；⑥中途退出治疗者。符合纳入标准和排除标准的患者122 例，其中男88 例，女34 例，年龄35～77 岁，平均年龄51.24 岁。同时选择同期在我院进行健康体检64 例作为对照，其中男48 例，女16 例，年龄42 ～65 岁，平均年龄49.57 岁。病例组和对照组基线资料，对比无差异（P＞0.05）。

二、研究方法

分别于化疗治疗前2 d 对病例组所有患者抽取外周血5 ml，及化疗结束后抽出外周血5 ml，对照组也抽取外周血5 ml，所有样本均在当日完成相关检测，检测采用流式细胞技术检测CD3＋（%）、CD8＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋细胞比值，检测采用流式细胞检测仪器（生产厂家：美国Becton Dickinson公司生产，型号：BD FACSCalibur），严格按照仪器相关说明书进行操作。

详细记录所有入组对象T 淋巴细胞亚群检测结果CD3＋（%）、CD8＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋细胞比值。及采用RECIST 标准评估病例组化疗后患者的疗效，评估时间为化疗完成后3 个月，其中完全缓解（complete remission，CR），部分缓解（partial remission，PR），疾病稳定（stable disease，SD），疾病进展（progressive disease，PD）。疾病控制（CR＋PR＋SD，DCR）。

三、统计学方法

采用SPSS 20.0 软件进行数据分析。其中计数资料采用率（%）表示，采用χ2检验分析。计量资料以（）表示，采用t 检验分析，P＜0.05 表示差异具有统计学意义。采用ROC 曲线分析T 淋巴细胞亚群预测非小细胞肺癌患者化疗效果。其中P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

一、病例组与对照组T 淋巴细胞亚群比较

病例组化疗前及后的CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋细胞比值均显著低于对照组（P＜0.05）；化疗后CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋细胞比值均较同步化疗前有显著升高（P＜0.05）；化疗前后病例组患者CD8＋（%）略高于对照组，但差异未发现统计学意义（P＞0.05），且化疗前后CD8＋（%）对比，差异未发现统计学意义（P＞0.05），见表1。

二、DCR 及PD 期患者一般情况及T 淋巴细胞亚群表达

化疗治疗后，DCR 共90 例（73.77%），其中CR 0 例，PR 25 例（20.49%），SD 65 例（53.28%）。PD 32 例（26.23%）。DCR 期的年龄、性别与PD 期对比，差异无统计学意义（P＞0.05）。

DCR 期与PD 期患者对比治疗前CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD8＋（%）、CD4＋／CD8＋，差异均无统计学差异（P＞0.05），DCR 期患者治疗后CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋显著高于PD 期患者，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。DCR 与PD 期患者治疗后CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋细胞比值均显著高于治疗前。两期患者治疗后CD8＋（%）对比，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

三、非小细胞肺癌患者化疗效果预测

治疗后CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋水平在预测非小细胞肺癌患者化疗效果的AUC 面积分别为：0.789、0.823、0.758，见图1。通过最大约登指数计算得出CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋指标的最大AUC 面积相应参数截止值，其中CD3＋（%）截止值为65.95（%）（敏感度＝83.30%，特异性＝78.60%），CD4＋（%）截止值为39.81（%）（敏感度＝87.30%，特异性＝85.20%），CD4＋／CD8＋截止值为1.250（敏感度＝81.20%，特异性＝76.70%）。

图1 ROC 曲线图

表1 肺癌组与对照组T 淋巴细胞亚群比较

表1 肺癌组与对照组T 淋巴细胞亚群比较

组 别 例数 CD3＋（%） CD4＋（%） CD8＋（%） CD4＋／CD8＋对照组 64 69.12±5.92 37.98±6.11 24.22±4.84 1.69±0.42病例组 化疗前 122 57.37±5.16 27.48±6.12 25.01±5.26 1.23±0.52化疗后 122 61.28±6.14 36.18±6.13 25.82±5.19 1.51±0.48

表2 疾病控制组及疾病进展组治疗前及治疗后的T 淋巴细胞亚群表达情况对比

讨 论

近年来，我国肺癌发病率及病死率都呈明显上升趋势。研究证实肺癌的发生发展呈现受多因素影响，且其发展具有呈阶段性［16-19］。随着肿瘤免疫学方面的研究逐渐深入，越来越多的研究证实机体的免疫系统及免疫功能在非小细胞肺癌的发生发展过程扮演着重要作用，尤其是T 淋巴细胞亚群的表达状态，当机体的T 淋巴细胞亚群的表达水平失衡时往往会预示着机体免疫功能处于紊乱状态［20-22］。

T 淋巴细胞包含杀伤性T 细胞、抑制性T 细胞、诱导辅助性T 细胞、迟发性超敏反应性T 细胞4 种类型［23］，成熟的T 淋巴细胞表面均可表达CD3 分子，CD3＋的T 淋巴细胞正常情况下是代表着机体总T 淋巴细胞的水平，若CD3＋（%）降低则可能提示机体免疫功能下降，数值越低，表示免疫功能越低下。成熟的T 淋巴细胞是不能同时表达CD4 分子、CD8分子，因此CD3＋细胞接近于CD4＋细胞与CD8＋细胞两者之和［24］，其中CD4＋更多是通过分泌细胞因子、激活趋化因子、募集靶细胞等方式来调控细胞内免疫反应［25］，从而发挥免疫作用。生理状态下CD4＋／CD8＋细胞比值是呈动态平衡状态，这对稳定维持机体细胞免疫功能有着十分重要的意义，当CD4＋／CD8＋细胞比值下降可能预示着机体T 淋巴细胞亚群处于失衡状态，这对疾病诊断与治疗，预后均有着十分重要参考价［26］。目前化疗是治疗中晚期非小细胞肺癌的主要手段，在杀伤肿瘤细胞的同时也会损害正常组织细胞，当然也包括机体T 淋巴细胞［27-31］。本文分析化疗前后患者外周血T 淋巴细胞亚群表达水平，旨在探讨胞中晚期非小细胞肺癌患者的细胞免疫功能状况及其对预后的预测价值，从而为肺癌的治疗提供一定的参考依据。

本文发现病例组化疗前后患者的CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋细胞比值均显著低于对照组（P＜0.05），提示病例组患者的免疫功能较健康人群是有所下降，这与胡静等［26］研究报道结果具有一致性。化疗后CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋细胞比值均较化疗前有显著升高（P＜0.05），提示当肿瘤得到较好控制时，机体免疫功能也处于相对正常的状态；化疗前后病例组患者CD8＋（%）略高于对照组，但差异未发现统计学意义（P＞0.05），且化疗前后CD8＋（%）对比，差异未发现统计学意义（P ＞0.05）。化疗治疗后，DCR 患者共90 例（73.77%），其中CR 0 例，PR 25 例（20.49%），SD 65 例（53.28%）。PD 患者32 例（26.23%）。DCR 患者治疗后的CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋细胞比值均显著高于PD 患者（P＜0.05），且与对照组对比，差异无统计学意义（P ＞0.05）。治疗后CD3＋（%）、CD4＋（%）、CD4＋／CD8＋水平在预测非小细胞肺癌患者化疗效果的AUC 面积分别为：0.789、0.823、0.758，且具有较好的特异度和灵敏度。说明了化疗后患者的外周血T 淋巴细胞亚群表达状态有可能成为预测化疗临床效果的一种标记物。

综上所述，中晚期非小细胞肺癌患者的T 淋巴细胞呈现低表达状态，细胞免疫功能呈现一种紊乱状态。化疗治疗的效果可能与机体外周血T 淋巴细胞表达状态有关，提示肺癌患者的外周血T 淋巴细胞亚群表达状态有可能成为预测化疗临床效果的一种标记物。