基于靶向代谢组学的腹膜透析脾肾气虚证和气阴两虚证患者血清氨基酸水平探究*

夏 丽 黄益麒 沈伟钢

绍兴第二医院 浙江 绍兴 312000

终末期肾病（ESRD）是由于原发或继发性病因引起的终末性肾脏疾病。腹膜透析（PD）能较好地保护ESRD患者残余肾功能，已经成为我国治疗ESRD首选方式。本研究选择PD脾肾气虚证及气阴两虚证患者，通过比较两者之间氨基酸代谢物表达的差异性，以期为中医临床辨证提供依据。

1 资料和方法

1.1 一般资料：收集2018年1～12月在绍兴第二医院肾病中心治疗的PD患者84例，将其分为脾肾气虚组51例和气阴两虚组33例。脾肾气虚组中男29例，女22例；平均年龄59.37±8.29岁；平均病程4.38±1.81年。气阴两虚组中男13例，女20例；平均年龄61.22±11.28岁；平均病程3.92±1.52年。两组性别、年龄、病程比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究通过绍兴第二医院伦理委员会批准，所有入选研究对象均签署知情同意书。

1.2 诊断标准：①脾肾气虚证：主症：腰膝酸软，倦怠乏力，浮肿难消，纳呆腹胀。次症：畏寒喜暖，夜尿清长，大便稀溏。舌：淡紫。脉：细涩，沉迟。②气阴两虚证：主症：畏寒肢冷，冷喜热饮或泛吐清水，腰膝冷痛，大便溏泄或五更泄。次症：面色㿠白或黧黑，发脱齿摇，性功能减退明显，夜尿频多或小便清长。舌：胖嫩有齿印。脉：沉细或沉弱。以上证型诊断需具备主症二项，或主症一项、次症二项即可[1]。

1.3 纳入和排除标准：纳入标准：①年龄≥18岁；②无血液透析或移植史；③腹膜透析时间≥3个月；④自愿参加试验并签署知情同意书。排除标准：①视力及听力障碍或无法正常交流的患者；②有严重的心脑血管事件发生，如急性心肌梗死、脑出血等；③急性腹膜炎患者；④拒绝中药治疗的患者。

1.4 方法：分述如下。

1.4.1 一般资料收集：包括性别、年龄、病程、体质量指数（BMI）。血液生化指标：血红蛋白（Hb）、红细胞分布宽度（RDW）、血白蛋白（Alb）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、血钙、血磷、肌酐（SCr）、尿酸（UA）、全段甲状旁腺素（iPTH）等。

1.4.2 氨基酸检测：取空腹静脉血5ml，3000r/min离心10min。吸取上清液置入EP管，放入－20℃冰箱储存待测。参考2013版美国FDA《生物样品定量分析方法验证指导原则》利用超高效液相色谱－串联质谱（UHPLCMS/MS）平台测定血清氨基酸。

1.5 统计学处理：采用SPSS 22.0统计软件。正态分布的计量资料采用±s表示，非正态分布的计量资料用M（1/4，3/4）表示。正态分布且方差齐的计量资料用t检验，正态分布而方差不齐的计量资料用校正的t检验，非正态分布的计量资料用Mann-Whitney U检验。

2 结果

2.1 两组腹膜透析患者临床参数比较：具体见表1～2。

表1 两组腹膜透析患者临床参数比较（±s）

表1 两组腹膜透析患者临床参数比较（±s）

注：与气阴两虚组比较，*P＜0.05。

组别脾肾气虚组气阴两虚组病程（年）4.38±1.81 3.92±1.52 Alb（g/L）32.7±1.1*26.3±1.4例数51 33年龄（岁）59.37±8.29 61.22±11.28性别（男/女）29/22 13/20 BMI（kg/m2）24.27±3.44 22.33±3.62 Hb（g/L）88.3±8.9*72.1±12.1 RDW（%）12.9±2.1*14.3±1.2

表2 两组腹膜透析患者临床参数比较（±s）

表2 两组腹膜透析患者临床参数比较（±s）

注：与气阴两虚组比较，*P＜0.05。

组别脾肾气虚组气阴两虚组UA（mmol/L）388.92±47.32 362.78±50.92例数51 33 TG（mmol/L）1.29±0.26 1.31±0.32 TC（mmol/L）5.64±1.32 6.17±1.21钙（mmol/L）2.35±0.22*1.87±0.31磷（mmol/L）1.68±0.42 1.82±0.36 iPTH（ng/L）345.8±117.4 297.6±93.5 SCr（μmol/L）689.54±97.68 811.65±132.85

2.2 两组腹膜透析患者血清氨基酸谱差异比较：具体见表3。

表3 两组腹膜透析患者血清氨基酸谱差异比较（±s）

表3 两组腹膜透析患者血清氨基酸谱差异比较（±s）

注：与气阴两虚组比较，*P＜0.05。

氨基酸丙氨酸甘氨酸谷氨酸谷氨酰胺精氨酸赖氨酸丝氨酸苏氨酸天冬氨酸缬氨酸异亮氨酸组氨酸脾肾气虚组343.20±104.34*263.07±67.96*302.75±81.15*526.47±114.28 116.54±17.46 261.09±67.23*138.22±22.17 114.37±19.98 58.70± 8.94 225.00±62.27 63.86± 4.25 76.82± 4.97气阴两虚组443.43±97.36 152.12±46.05 219.20±76.63 492.19±134.29 131.04±11.89 140.94±45.07 166.59±29.32 158.19±25.33 73.58± 9.11 258.14±69.90 91.12±10.11 123.44± 8.15

3 讨论

中医方证代谢组学研究技术通常先进行疾病的中医辨证，采集证候样本进行代谢产物谱分析，筛选差异标记物，建立中医证型与生物标记物群的相关模型[2]。

本研究结果显示，与脾肾气虚组比较，气阴两虚组血红蛋白、白蛋白、血钙水平较低。根据中医学证型演变规律，脾肾气虚证可发展为气阴两虚证，故脾肾气虚组患者的病情往往较气阴两虚组稍轻。血红蛋白及白蛋白、血钙水平在临床上常常用来评判营养状态。与脾肾气虚组比较，气阴两虚组的红细胞分布宽度数值较高。我们推测红细胞分布宽度增大可能与腹膜透析气阴两虚组患者病情较重、体内尿毒症毒素未及时清除导致红细胞生成障碍有关[3]。

本研究借鉴中医方证代谢组学研究技术，发掘了甘氨酸、谷氨酸、赖氨酸、丙氨酸等4种差异氨基酸。其中赖氨酸是机体蛋白质合成的重要原料，本研究中气阴两虚组的赖氨酸水平低于脾肾气虚组，其白蛋白水平亦低于脾肾气虚组。我们推测可能是体内较低的赖氨酸水平会限制血清白蛋白生成[4]。丙氨酸是主要的能量来源。葡萄糖经糖酵解转化为丙酮酸，后通过转氨基反应生成丙氨酸。本研究中，气阴两虚组患者血浆中丙氨酸含量增多，提示机体微炎症状态下需要更多能量代谢维持生命活动[5]，导致气阴两虚组存在蛋白质氨基酸的吸收紊乱。谷氨酸和甘氨酸均在氧化-抗氧化过程中起着重要作用，可通过多种途径降低氧化应激反应[6]。气阴两虚组患者血浆中谷氨酸、甘氨酸水平低于脾肾气虚组，提示可能存在氨基酸代谢、氧化应激反应增强，炎症反应剧烈等，提示病情较重。体内氨基酸异常升高的状态属于中医学“痰浊”“血瘀”范畴。腹膜透析轻者脾肾亏虚，气化失司，津液输布无力，痰浊阻滞血气运行，从而引起血瘀；重者气阴两虚，阴虚则内盛，虚火灼津为痰，血瘀阻滞，痰瘀互结，导致体内氨基酸异常升高。