“神宁藏香”对失眠大鼠的行为学及GABA能系统通路的影响＊

谭丽博，于佳慧，郑骁洋，刘 燕，于 雪，戴 宁，张 蔚，仁青加，李 峰＊＊

（1. 北京中医药大学中医学院 北京 100029；2. 西藏藏医学院藏医药研究所 拉萨 850000）

失眠是临床常见病、多发病，主要表现为经常不能获得正常睡眠，或入睡困难，或睡眠时间不足，或睡眠不深，或睡后易醒，多梦，醒后疲乏，严重者彻夜不眠，影响工作效率或社会功能为特征的病症。失眠主要由药物、躯体疾病、心理因素以及环境改变等引起，长期睡眠障碍会导致精神思维异常，诱发多种身心疾病[1]。有研究发现，失眠患者时常表现出一定的情绪障碍，特别是抑郁、焦虑、紧张和躁动不安等负性情绪[2]。据调查，我国人群中有45.5%存在不同程度的睡眠质量问题[3]，失眠的患病率高达10%-48%[4]。长期失眠所带来的负面影响遍及人们的工作和生活，严重者甚至会引起恶性意外事故[5]。因此，失眠作为一种发病率逐年上升的身心疾病，随着现代人生活节奏的加快和工作压力的加大，越来越严重的影响着患者的工作和生活质量，它不仅仅是医学问题，更是亟待解决的社会问题[6]。

目前临床对于睡眠障碍的治法以重塑睡眠—觉醒节律为主[7]，治疗药物主要包括苯二氮卓类、非苯二氮卓类、三环类抗抑郁药、褪黑素等[8]，但因部分药物有成瘾性、依赖性、宿醉感等不良反应[9]，导致临床应用受到限制，甚至停用。心理疗法和行为认知疗法（CBT-i）是国际上认可度较高的失眠疗法[10]，它以心理治疗为核心，需要专业人士的指导，虽为世界上公认的非药物治疗的最佳方案，但因目前尚缺乏训练有素的从业人员且诊疗费用较高，难以在国内普及。

在失眠的治疗方面，传统藏医积累了丰富的经验，形成了独具特色的医学理论和药物疗法[11]。值得一提的是藏香疗法，除了具有防疫、避秽、预防流感等功效，在治疗失眠方面也具有悠久的发展历史，在西藏地区应用广泛。藏香疗法使用独特的鼻吸给药途径，使药物成分直达中枢神经系统，临床应用方便、药效发挥快捷，可有效改善睡眠质量，缓解疲劳，使人心旷神怡、神清气爽[12]。由于藏香疗法对于失眠的显著疗效、加之其价格低廉、携带方便等优势，现已成为深受西藏人民青睐和喜爱的一种生活必需品，其显著的应用价值值得在全国推广使用[11]。

因此，本研究基于藏香在失眠治疗中的应用，从行为学实验角度探讨“神宁藏香”对失眠大鼠不良情绪的干预作用，运用Western Blot技术从GABA 的合成代谢-传导-转运系统探讨其对失眠大鼠下丘脑干预作用的神经生物学机制，为临床中使用“神宁藏香”治疗失眠提供实验依据和理论参考。

1 实验材料

1.1 实验动物

健康雄性SD 大鼠50 只，体质量190±10 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，许可证编号为SCXK（京）2016-0006。严格按照实验动物要求的饲养原则饲养于清洁级动物房，普通饲料喂养，自由饮水。

1.2 药物

Ⅰ阳性药组（以下简称西药组）：艾司唑仑片。

Ⅱ“神宁藏香”组（以下简称藏香组）：以松香、沉香、琥珀、藏红花、藏寇、丁香、檀香、阿魏等药制成藏香。

Ⅲ安神组（以下简称中药组）：酸枣仁20 g，川芎9 g，知母15 g，茯苓18 g，生甘草9 g，清半夏10 g，栀子10 g，合欢皮15 g，夜交藤15 g。

艾司唑仑1 盒，购自中日友好医院，常温保存备用；藏香由西藏藏医学院及西藏自治区康松商贸有限公司制备，4℃保存；中药安神方生药购于北京同仁堂，并委托北京创立有限责任公司制备成浸膏，4℃保存备用。

1.3 主要试剂和仪器

DL-4-氯苯丙氨酸（PCPA）（aladdin，上海）；戊巴比妥钠（Sigma，美国）；BCA 蛋白含量检测试剂盒（凯基生物，江苏）；一抗GAPDH（Proteintech，美国），一抗GAD65（Proteintech，美国），一抗GABA-T（Proteintech，美 国），NKCCl（Proteintech，美 国），一 抗GAT-1（Proteintech，美国），兔二抗（Proteintech，美国），鼠二抗（Proteintech，美国）；全波长酶标仪CPOCH（Bio-tek，美国）；蛋白电泳电转系统（电源、电泳槽、电转槽）（Bio-RAD，美国）；超灵敏多功能成像C600（Azure，美国）。旷场箱（众实迪创科技发展有限公司，北京）悬尾实验装置（众实迪创科技发展有限公司，北京），强迫游泳设备（众实迪创科技发展有限公司，北京）。

2 实验方法

2.1 复制失眠模型

SD 大鼠适应性饲养7 天后，随机分为空白对照组（以下简称正常组）（10 只）和失眠模型组（40 只）。模型组采用国际通用化学因素所致失眠模型制作方法，即“氯苯丙氨酸（PCPA）腹腔注射法”复制失眠模型[13]，将PCPA 按400 mg/10 mL·kg-1用量，用弱碱性生理盐水配置成混悬液，于每日8:00-8:30对模型组大鼠进行腹腔注射，连续注射2 天。用戊巴比妥钠翻正实验评价模型成功与否，造模后大鼠随机分为模型组、西药组、藏香组、中药组。

2.2 实验动物分组和给药

使用SPSS 软件生成随机数字，将造模后的40 只大鼠，随机分为以下4 组，每组10 只。模型组：连续7天生理盐水灌胃；西药组：连续7 天艾司唑仑灌胃；藏香组：放入10 m2独立动物房饲养（遮光密闭），在上午8时、9时分别点燃1根半藏香，在11时点燃3根，燃香的空间距离大鼠≤5 m，熏燃时间为第1次和第2次30 min，第3 次60 min，连续给药7 天；中药组：连续7 天安神中药浸膏灌胃。各组大鼠给药量依据浸膏出膏率和大鼠给药体表面积公式计算得出。正常组：连续7 天生理盐水灌胃。

2.3 实验及观察指标

2.3.1 一般状态

观察各组大鼠的精神状态、毛发光泽变化、进食饮水量、体质量变化及活动情况等。

2.3.2 戊巴比妥钠翻正实验

分别于第1 次腹腔注射和末次给药36 h 后，依据药量40 mg/Kg，对各组大鼠进行腹腔注射戊巴比妥钠，分别记录各组大鼠腹腔注射时间、入睡时间和苏醒时间，计算其睡眠潜伏期和睡眠持续时间。

2.3.3 旷场实验

于第6天给药30 min后，大鼠在木箱中适应1 min，用录像设备进行实验过程录制，记录各组大鼠5 min内中央格停留时间、中央格穿格次数、中心穿格数百分比、站立次数、修饰次数。两次实验之间，用低浓度乙醇溶液喷洒、清洁场箱内壁及底面。

2.3.4 强迫游泳实验

将大鼠依次放置在一个单独的强迫游泳设备（高40 cm，直径18 cm），其中水的高度30 cm（水温25℃）。两次游泳间期需要引导15 min预测试，24 h后进行6 min的游泳测试。用录像设备进行实验过程录制，记录各组大鼠6 min 测试内大鼠游泳时间（s）、大鼠挣扎时间（s）、飘浮行为（不动）的持续时间。不动定义为顺从的在水中漂浮于垂直位置，只需要小的运动以保持头部在水面之上。

2.3.5 悬尾实验

实验在暗光，白噪声条件下进行，操作者将大鼠尾根部1/3用胶带固定在悬尾仪器挂钩上，使大鼠头部朝下，用录像设备进行实验过程录制，观察并记录6 min内各组大鼠的不动的时间（s）、挣扎次数（次）。

2.4 检测指标

2.4.1 取材

给药结束后第2 天，各组大鼠进行麻醉取材。腹主动脉取血、断头后，迅速剥离大鼠下丘脑，保存于-80℃冰箱冷冻待测，每组随机选取6 只下丘脑进行Western Blot检测。

2.4.2 Western Blot

从-80℃冰箱取出待测大鼠下丘脑组织，加入ripa裂解液超声匀浆，离心后提取上清，采用BCA 试剂盒、酶标仪测定并计算各组组织总蛋白浓度，配平，使各样本蛋白等量，蛋白样品定量为50 μg。根据待测目的蛋白的分子量，选择适宜分离胶浓度配胶，上样并电泳，再电转到PVDF 膜上，脱脂奶粉封闭1.5 h 后，加入一抗GAD65（1:1000）、GABA-T（1:1000）、NKCC1（1:2000），GAT-1（1:1000）、GAPDH（1:50000），4℃孵育过夜，二抗温孵育1.5 h，ECL 化学发光、曝光显影，用凝胶图像处理系统分析目标条带的光密度值。

2.5 统计学处理

使用SPSS 20.0软件处理实验数据，统计描述使用以均值±标准差（xˉ±s）表示；统计分析先对各组数值进行正态性检验和方差齐性检验，若两项都符合，则进行单因素方差分析（ANOVA）；不符合则使用非参数检验，P＜0.05 表明组间差异具有统计学意义。组间比较的结果柱形图使用GraphPad Prism 软件进行绘制。

3 实验结果

3.1 一般状态

与正常组相比，模型组大鼠毛发枯槁失去光泽，对外界刺激敏感、易激惹，进食、饮水量明显增加，但体质量减轻。

3.2 戊巴比妥钠翻正实验

造模后，和正常组相比，模型组大鼠的睡眠潜伏期延长（P＜0.05），而模型组的睡眠持续时间明显缩短（P＜0.01），在一定程度上表明成功复制失眠模型（图1）。

给药后，与正常组相比，模型组大鼠睡眠潜伏期显著延长（P＜0.01）；各给药组和模型组相比睡眠潜伏期有显著性差异（P＜0.01）；并且，模型组高于西药组和中药组（P＜0.05，P＜0.05）；模型组虽与藏香组相比无差异，但是藏香组睡眠潜伏期有降低趋势；西药组高于中药组，西药组低于藏香组；中药组低于藏香组。

给药后，和正常组相比，模型组大鼠睡眠持续时间明显缩短（P＜0.01）；和模型组相比，各给药组睡眠持续时间有显著性差异（P＜0.01），模型组低于西药组、中药组和藏香组（P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01）；藏香组大鼠睡眠持续时间均高于中药组和西药组（图2）。

3.3 旷场实验

与模型组大鼠相比，正常组和各给药组在旷场实验的水平运动（中央格停留时间、中央格穿格次数、中心穿格数百分比）及垂直运动（站立次数、修饰次数）指标上正常组均高于模型组（P＜0.05）（表1）。

图1 戊巴比妥钠翻正实验结果图

图2 给药后戊巴比妥钠翻正实验结果（±s，n=10）

表1 给药后大鼠旷场实验结果（±s，n=10）

表1 给药后大鼠旷场实验结果（±s，n=10）

注：与正常组比较，*表示P ＜0.05，**表示P ＜0.01；与模型对照组比较，△表示P ＜0.05，△△表示P ＜0.01。

组别正常组模型组西药组中药组藏香组中央格停留时间（s）38.36±18.941.77±1.46**9.74±1.46△△17.22±3.73△△5.43±0.75△△中央格穿格次数（次）3.43±2.371.57±0.78*3.29±1.25△1.86±1.062.71±1.38中心穿格数百分比（%）15.71±13.222.86±1.21*4.43±4.198.43±5.56△△6.71±6.87站立次数（次）18.71±13.996.57±4.35*16.29±5.64△△12.00±7.1115.57±5.68△△修饰次数（次）8.71±4.533.14±2.03*6.43±1.90△4.86±2.475.29±4.75

3.3.1 中央格停留时间

与正常组相比，模型组大鼠中央格停留时间有显著降低（P＜0.05）；与模型组相比，西药组、中药组和藏香组均能显著提高大鼠的中央格停留时间（P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01）；中药组大鼠在旷场中央格停留时间上高于西药组和藏香组。

3.3.2 中央格穿格次数

与正常组相比，模型组大鼠中央格穿格次数明显减少（P＜0.05）；并且，与模型组相比，西药组中央格穿格次数明显增多（P＜0.05），中药组和藏香组与模型组相比虽无差异（P＞0.05），但可看出有增高模型大鼠中央格穿格次数的趋势；且西药组高于中药组和藏香组。

3.3.3 中心穿格数百分比

与正常组相比，模型组大鼠中心穿格数百分比显著降低（P＜0.05），各给药组与模型组两两比较后发现：中药能显著增加模型大鼠中心穿格数百分比（P＜0.01），西药组、藏香组与模型组相比虽无差异（P＞0.05），但均有增高模型大鼠中心穿格数百分比的趋势，且藏香组趋势优于西药组。

图3 悬尾实验结果图

图4 大鼠强迫游泳实验结果

3.3.4 站立次数

与正常组相比，模型组站立次数显著降低（P＜0.05），各给药组和模型组两两比较后发现：西药组和藏香组均能显著增加模型大鼠站立次数（P＜0.01，P＜0.01），且西药组优于藏香组；中药组与模型组相比虽无差异（P＞0.05），但有明显增加模型大鼠站立次数的趋势。

3.3.5 修饰次数

与正常组相比，模型组修饰次数有显著降低（P＜0.05），各给药组和模型组两两比较后发现：西药组能显著增加模型大鼠修饰次数（P＜0.05）；中药组、藏香组与模型组相比虽无差异（P＞0.05），但有明显增加模型大鼠修饰次数的趋势，且藏香组趋势优于中药组。

3.4 悬尾实验

与正常组大鼠相比，模型组大鼠不动时间显著延长（P＜0.01），挣扎次数显著降低（P＜0.05）。说明大鼠造模后出现明显的负面情绪，表现为喜静少动的绝望感。

与模型组相比，西药组、中药组、藏香组大鼠不动时间明显缩短（P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01），且藏香组低于西药组和中药组，中药组低于西药组。

与模型组大鼠相比，各给药组大鼠挣扎次数虽无差异（P＞0.05），但各给药组有明显增高模型大鼠挣扎次数的趋势，且中药组趋势高于藏香组和西药组，藏香组趋势高于西药组（图3）。

3.5 强迫游泳实验

3.5.1 漂浮时间

与正常组相比，模型组大鼠的漂浮时间显著增加（P＜0.05）。给药干预后，与模型组相比，中药组、西药组及藏香组大鼠的漂浮时间均非常显著性减少（P＜0.01，P＜0.01，P＜0.01），其中藏香组大鼠漂浮时间低于中药组和西药组（图4）。

3.5.2 挣扎时间

与正常组相比，模型组大鼠的挣扎时间非常显著降低（P＜0.01）。给药干预后，与模型组相比，西药组和中药组大鼠的挣扎时间显著增加（P＜0.05，P＜0.05），藏香组与模型组相比虽无明显改变（P＞0.05），但有明显增加模型大鼠挣扎时间的趋势。

3.5.3 游泳时间

与正常组相比，模型组大鼠游泳时间明显缩短（P＜0.01）。给药干预后，西药组、中药组大鼠游泳时间比模型组显著延长（P＜0.05，P＜0.01），藏香组与模型组相比虽无差异（P＞0.05），但有明显增加模型大鼠游泳时间的趋势。

3.6 失眠大鼠下丘脑中GABA-T、GAD65、NKCCl、GAT-1的蛋白表达

Western Blot结果显示（表2、图5）：

图5 各组大鼠下丘脑GABA-T、GAD65、GAT-1、NKCCl的蛋白的表达

表2 各组大鼠下丘脑GABA-T、GAD-65、GAT-1、NKCCl结果（±s，n=6）

表2 各组大鼠下丘脑GABA-T、GAD-65、GAT-1、NKCCl结果（±s，n=6）

注：与正常组比较，*表示P ＜0.05，**表示P ＜0.01；与模型对照组比较，△表示P ＜0.05，△△表示P ＜0.01。

组别正常组模型组西药组中药组藏香组GABA-T 0.92±0.303.00±2.38**0.86±0.36△△1.08±0.47△1.43±0.90 GAD-651.69±0.970.76±0.24*1.75±0.93△1.32±0.41△1.13±0.43△GAT-12.30±1.360.74±0.27*2.42±2.40△△1.82±1.12△△1.65±1.37 NKCC10.93±0.071.40±0.53**1.13±0.42△1.12±0.43△1.15±0.52△

和正常组相比，模型组大鼠下丘脑GABA-T 蛋白表达量明显增加（P＜0.01）；西药组和中药组表达比模型组显著下降（P＜0.01，P＜0.05），藏香组与模型组相比无差异（P＞0.05），但是有明显下降趋势。

和正常组相比，模型组大鼠下丘脑GAD-65 蛋白表达显著性降低（P＜0.05）；与模型组相比，西药组、中药组、藏香组大鼠下丘脑GAD-65 蛋白表达量均显著性增高（P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05）。

和正常组相比，模型组大鼠下丘脑GAT-1蛋白表达量显著性降低（P＜0.05）。与模型组相比，西药组和中药组表达非常显著上升（P＜0.01，P＜0.01），藏香组与模型组相比无差异（P＞0.05），但是有明显上升趋势。

和正常组相比，模型组大鼠下丘脑NKCC-1 蛋白表达量显著升高（P＜0.01）；与模型组相比，西药组、中药组和藏香组大鼠下丘脑NKCC-1蛋白表达均显著性降低（P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05）。并且，藏香组NKCC-1蛋白表达高于西药组，高于中药组。

4 讨论

随着现代人生活节奏的加快和工作压力的增大，失眠的发病率日益增高，研发疗效显著、安全无副作用的抗失眠制剂势在必行。藏香疗法以其独特的黏膜吸收途径，直达中枢神经系统具有起效迅速，应用方便等诸多优势，值得临床上的进一步研究和应用。

目前，对于失眠的机制研究结果显示：失眠可能与GABA/GLU 系统有关[14]，而γ-氨基丁酸（gammaaminobutyric acid，GABA）是中枢系统中与失眠密切相关的神经元[15，16]。因此本研究提出了GABA 系统功能失调是失眠维持性因素的假说，应用行为学实验从宏观角度研究“神宁藏香”对失眠模型大鼠睡眠时长及失眠所导致的负性情绪的调控作用；应用Western Blot分子生物学技术，探究失眠模型大鼠GABA 能系统通路中GABA 的合成代谢、传导和转运三个方面的神经生物学疗效机制。通过对“神宁藏香”进行深入的研究，从而为开发和推广治疗失眠的新制剂提供依据。

4.1 研究对睡眠及情绪的影响

实验结果表明，“神宁藏香”、中药安神方及艾司唑仑均能通过缩短睡眠潜伏期，延长睡眠持续时间有效改善睡眠，且“神宁藏香”在缩短入睡时间、延长睡眠时间方面上有更显著的优势。

有研究报道，普通人群中20%的失眠症者伴有抑郁症状[17]，在对60 例原发性失眠症的焦虑抑郁状态调查分析的结果也同样显示[18]：原发性失眠症患者与正常人相比存在不同程度的焦虑抑郁症状。强迫游泳实验和悬尾实验均能反映处于抑郁状态的动物的抑郁程度[19-21]。实验结果显示，失眠模型大鼠强迫游泳和悬尾实验的不动时间均增加，提示其较快放弃逃脱希望，更多时间处于绝望状态，反映出抑郁情绪。给药干预后，“神宁藏香”、安神中药方、西药艾司唑仑均能缩短模型大鼠的漂浮时间和不动时间，缓解失眠造成的抑郁情绪，这与文献中报道的抗抑郁药动物实验中的结果一致[22]，且“神宁藏香”对于改善失眠大鼠的抑郁状态效果显著。

旷场实验是检测动物情绪行为和在新异环境中的焦虑、紧张情绪，认知、自发活动情况的经典实验。其中大鼠的焦虑状态和认知能力主要通过中央格停留时间表现[23]，大鼠的自发活动情况则通过中央格穿格次数、中心穿格数百分比和站立次数反映[24]。本次实验中，失眠模型大鼠的旷场水平运动和垂直运动水平均显著降低，提示由于失眠的影响，大鼠可能出现焦虑抑郁等负面情绪和认知能力下降的情况，且自发活动明显减少，出现了郁郁寡欢、喜静少动等负性情绪。给药干预后结果显示，“神宁藏香”能有效延长模型大鼠中央格停留时间，增加站立次数，表明“神宁藏香”可有效缓解失眠大鼠的负面情绪的，同时在模型大鼠自发活动和空间探索能力方面有促进作用，增强其对空间探索兴趣。

4.2 研究对相关作用靶点的影响

由于中枢神经系统中的大量GABA能神经元与睡眠密切相关，而GABA 能系统通路中GABA 的合成代谢、传导和转运环节发生变化都会间接地影响GABA的含量以及生物功能，进而影响睡眠[25]。Western Blot结果表明，失眠大鼠下丘脑中的GABA 能传导功能出现异常，可能和GABA 的代谢、重摄取、受体亚基结合及其转运蛋白相关：主要用于合成GABA 的GAD-65蛋白表达明显增加，用于传导的NKCC1蛋白表达明显降低；与GABA 降解相关的GABA-T 降低，而GAT-1作为GABA 重摄取的主要转运体，随GABA 含量减少而降低蛋白表达。安神中药、艾司唑仑等传统失眠药物的治疗作用可能与该通路多靶点有关，通过促进合成受体表达、减少GABA 的降解，降低转运蛋白表达，增加GABA 的重摄取，提高GABA 与受体的结合率，发挥GABA的神经抑制作用，从而改善失眠。

另外，本实验选取苯二氮䓬类药物艾司唑仑作为阳性对照药，作为传统治疗失眠的药物，苯二氮卓类其作用靶点在抑制性神经递质GABA，即它与GABA相关受体结合而增多GABA 的释放，从而抑制5-HT的产生和释放[26]通过非选择性拮抗γ-氨基丁酸苯二氮䓬（GABA-BZOA）复合体，起到了神经的抑制性保护作用。“神宁藏香”药效基本等同于阳性对照药，这一结果进一步证实“神宁藏香”和阳性对照药对于模型大鼠失眠的改善作用机制基本一致，其作用靶点主要是促进GABA 合成蛋白GAD-65 的表达和降低转运蛋白NKCC1 的表达，并有减少GABA 的降解蛋白GABA-T，增加其的重摄取蛋白GAT-1表达的趋势。

4.3 优势与不足

香熏疗法在唐宋时期发展到鼎盛阶段，近代逐渐失传。但在西藏地区，因其独特的黏膜吸收途径，直达中枢神经系统而起效迅速，应用、携带方便等诸多优势一直沿用至今。藏医理论认为[27]，失眠因“隆”（相当于气或元气）元紊乱、不足或邪气阻滞所致。而藏香中常用药物：松香、沉香、琥珀、藏寇、阿魏等数十种[28]，多为辛味药物，辛“能行能散”，具有芳香解郁、行气行血等作用；松香、沉香、丁香、琥珀均有降逆下行之效，有助于引阳入于阴[12]；藏红花、藏寇、阿魏有有行气活血，散郁开结的功效，有助于解心忧郁积，醒神益智；“神宁藏香”诸药合用，一方面调节人体气血津液的正常升降出入，气血和而五脏安；另一方面气血循常道而无邪气阻滞，阳入于阴而寤寐如常。“神宁藏香”还可以明显缓解各种原因引起的忧愁抑郁、思虑过度、精神紊乱等症，实为快乐愉悦之香[11]。

本实验是首次使用藏香治疗失眠的动物实验研究，主要研究藏香疗法对于失眠大鼠的治疗效果和神经生物学机制，以期进一步拓宽藏药的应用和推广。但本次研究也存在不足之处，实验中主要采用在规定时间内，整组大鼠在固定规格的房间内集体闻嗅的方法进行，可能不能很好地控制每只大鼠的具体给药量，提示今后可对藏香的剂型进行进一步的改良，如研制藏香熏香剂挥发油制剂，并应用单独雾化吸入的方法，增加藏香有效成分的释放，合理规划鼻腔粘膜给药方式的给药量等，更好地控制和规范实验操作方法，从而增加研究的规范性和可重复性。

5 结论

“神宁藏香”能够有效地延长失眠大鼠的睡眠持续时间，改善失眠所产生的抑郁、紧张等负性情绪，增加其空间探索的兴趣；并且其作用靶点主要是通过促进失眠大鼠下丘脑中GABA 合成蛋白GAD-65 的表达和降低转运蛋白NKCC1的表达而发挥治疗作用，这也为临床中推广使用“神宁藏香”治疗失眠提供了实验依据和理论基础。