饲料中维生素B1、B2、B6 的同时测定

胡旭倩，姚菲菲，易会建，蒋清芳

1.浙江赞宇科技股份有限公司，浙江杭州 310009；2.浙江金正检测有限公司，浙江义乌 322000

维生素是维持动物正常生理机能和保持动物正常生长发育必需的一类微量营养物质。目前，维生素是饲料添加剂中最常使用的物质，分为脂溶性维生素和水溶性维生素，每一种维生素都起着其他物质不可代替的特殊作用。

1 材料和方法

1.1 仪器与试剂

Agilent 1260 超高效液相色谱仪（配紫外检测器）（美国Agilent 公司）；高速离心机（德国Sartorius 公司）；纯水净化仪（杭州永洁达净化科技有限公司）；pH 计（Delta320）。

甲醇为色谱纯（美国大地公司）；EDTA，庚烷磺酸钠，冰乙酸，三乙胺，磷酸二氢钠，盐酸（均出自上海安谱实验科技股份有限公司）[1]。

1.2 方法

1.2.1 磷酸二氢钠溶液的配制

3.9 g 磷酸二氢钠溶于1 000 mL 超纯水中，过0.45 μm 水系滤膜。

1.2.2 提取剂的配制

称取50 mg EDTA，加入适量超纯水，超声使之完全溶解，加入25 mL 冰乙酸，5 mL 三乙胺，用超纯水定容至1 000 mL，摇匀，取该溶液750 mL 与250 mL 甲醇混合，超声脱气待用。

1.2.3 流动相的配制

称取1.01 g 庚烷磺酸钠，加入适量超纯水，超声使之完全溶解，加入5 mL冰乙酸，0.5 mL三乙胺，用超纯水定容至1 000 mL，摇匀，取该溶液750 mL与250 mL 甲醇混合，超声脱气备用。

1.2.4 提取方法

称取混合均匀的复合饲料3 g 于100 mL 棕色容量瓶中，加入适量酸性提取剂（见本文1.2.2），于100 ℃水浴中提取30 ～40 min，期间震荡数次，防止结块并提高提取效率。待提取完成并冷却后，用提取剂定容至刻度线，过滤，滤液过0.45 μm滤膜，待进样分析[2]。

2 结果与分析

2.1 色谱条件优化

选取安捷伦C18 色谱柱（4.6 μm×250 mm），同一浓度进样，对庚烷磺酸钠离子对溶液和甲醇的配比进行研究，考察其保留时间、灵敏度及峰形，选取最优的流动相配比。本方法采用庚烷磺酸钠离子对溶液:甲醇=75:25（V:V）的配比，可以有效缩短检验时长并能同时改良峰形，可有效提高分离效率。

2.2 检测波长的选择

单独对维生素B1、B2、B6标准溶液进行进样，用UV 对200 ～350 nm 的波长范围进行扫描，可发现维生素B1、B2、B6在分别在247 nm、267 nm、290 nm 的波长处有最大的吸收，综合考虑3 种维生素的紫外线吸收情况，本方法选择280 nm 为检测波长。

2.3 提取条件选择

本试验对同一个饲料样品采用了超声提取，振荡提取以及水浴提取三种提取方式，并进行了相应的研究。通过比较，水浴提取较前两种方法有更高的提取效率。

3 讨论

本文建立了高效液相色谱同时测定饲料中维生素B1、B2、B6含量的方法。试样中的维生素B1、B2、B6用酸性提取液水浴提取，定容和过滤后经液相色谱分离检测。本方法在保证准确性好的同时,尽可能提高了时效性和灵敏度，为同时测定饲料中维生素B1、B2、B6含量的研究提供了数据和基础。