500例地中海贫血基因检测分析

罗桂香，李恋湘，周颖娟，李磊

（珠海市妇幼保健院，广东 珠海 519001）

地中海贫血属于一种常见的单基因疾病，而引发这一疾病的主要原因是珠蛋白基因突变，或者各种合成α、β珠蛋白生成障碍所引发的遗传性溶血性疾病，我院孕妇的地中海贫血发生率较高，被认为是造成胎儿早产、宫内死亡等不良妊娠结局的重要危险因素，并且可能引发内分泌失调、血栓栓塞等严重并发症。所以在当前临床工作中，需要重视对孕妇的地中海贫血基因检测。在本次研究中，本文将选择500例孕妇为研究对象，对其地中海贫血基因检测的相关内容进行分析，相关内容如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以我院孕检的500例孕妇为研究对象，本组孕妇的入选时间为2019年1月-2019年6月，平均年龄（28.6±3.9）岁。

1.2 研究方法 采用GAP-PCR多聚酶链扩增技术进行检测，根据亚能生物技术（深圳）有限公司的说明书完成DNA采集、数据提取、电泳等实验操作。之后将所获取的样本采用NGS测序法做进一步分析，主要路径包括：（1）通过MAGEN试剂盒（上海伯易生物科技有限公司），采用磁珠法提取孕妇的DNA，并做常规核酸纯化之后，对孕妇的DNA做定量检测。（2）PCR扩增，加入引物之后实施PCR扩增，将扩增后的产物放置在琼脂糖凝胶上进行电泳检测，根据检测结果判断PCR扩增效果是否满意。（3）构建文库，将相关扩增物（已鉴定）混合之后，建立地中海贫血文库，并在其中选择理想的Illumina测序分型方法完成文库构建。（4）DNA末端修饰。通过加“A”对本组孕妇DNA资料进行处理，并通过Covaris打断法随机打断之后完成柱式离心纯化，并将片段化的DNA末端修复，修复后添加A反应，连接文库。（5）文库定量检测与测序。在本次工作中，为确保文库定量检测与测序的质量，采用Agilent 2100对文库质量进行测量，并结合Q-PCR方法定量检验文库产量，根据最终数据判断文库制备结果是否满足本次研究预期，对于检测结果显示合格者则可以形成DNA簇群，用于产生原始数据。（6）数据分析。在获得原始数据之后可以直接将数据上传，在数据下机后即可进行信息分析流程，先对下机的原始数据进行质量评估测量之后，除去其中低质量以及被污染的数据，之后按照primer与index分类情况做后续数据处理。最后，通过BWA软件将reads数据对比到标准的基因序列中，通过基因序列对比方法，获得碱基多态性分布结果。

1.3 统计学处理 采用SPSS 22.0软件对本次研究的数据进行分析处理，计数资料以例和百分率表示，行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

在本文所选择的500例样本中，共筛查出49例地中海贫血孕妇，其中包括α地中海贫血基因突变28例，β地中海贫血基因突变19例，α合并β地中海基因突变2例，相关资料如表1、表2所示。

表1 500例孕妇地中海贫血的基因突变检出结果（n=49）

表2 地中海贫血基因突变分布情况（n=49）

3 讨论

地中海贫血是编码珠蛋白基因变化而引发的一种或者多种珠蛋白肽链合成障碍，发病后会造成人体血红蛋白成分的异常变化，最终造成溶血性贫血，在临床上可以根据其不同类型划分为α地中海贫血、β地中海贫血和异常血红蛋白病等。其中α地中海贫血基因突变主要是因为α珠蛋白基因的缺失或突变而造成了α蛋白肽链合成受抑制，其中编码α-珠蛋白基因主要存在于16号染色体短臂。而β地中海贫血基因突变主要是因为β-珠蛋白肽链合成受限制有被完全显示而引发的贫血。从本次研究结果来看，在本文所选的500例孕妇中，共发现地中海贫血孕妇49例，其中α地中海贫血基因突变发病率最高、β地中海贫血基因突变次之，α合并β地中海基因突变最低，未发现γ地中海贫血基因突变等少见地中海贫血病例。

现代研究认为，我国地中海贫血具有显著的地区差异性，其中两广及海南等地区的地中海贫血的发病率高于全国，在我国南方地区的自然人群中，地中海贫血的基因携带率较高，其中孕育中间型或重型地中海贫血的发生率较高[1]。所以在临床上，为了能够降低地中海贫血新生儿的出生率，在婚前、孕前以及产前进行筛查。在本文所选的500例孕妇中，地中海贫血的发生率为9.8%，略高于文献[2]，考虑其原因可能为两者之间的研究方法不同，其中文献所采用的研究方法是对患者的平均红细胞体积进行初筛，根据初筛结果对本组孕妇的地中海贫血情况进行判断，因此只能发现集中相对常见的地中海贫血类型；同时在诊断期间，通过MCV方法对轻型地中海贫血的基因类型进行分析，敏感度较低，在临床上容易出现误诊漏振等问题，这是目前临床上在筛查地中海贫血时难以避免的问题。而在本研究中，本文所采用的方法不经过平均红细胞体积初筛，而是直接进行301型地中海贫血基因检测，与传统方法相比，这种方法对地中海贫血具有更高的检出率，不仅能够对常见的地中海贫血情况进行筛查，也能发现部分罕见的地中海贫血基因突变情况[3]。

而在确诊孕妇存在地中海贫血症状之后，需要第一时间对孕妇进行治疗，常见的治疗方法包括规范化输血、移植造血干细胞等，而该病症最核心的方法就是预防，其中输血治疗的关键就是要将红血蛋白维持在100 g/L以上，这样才能为孕妇提供正常的红细胞，进入改善发病后所造成的髓外造血以及低氧血症等，最终避免盖面心脏以及骨骼畸形等情况的发生，最终达到延长患儿寿命的目的。相比之下，轻型地中海贫血对胎儿的生长发育的影响很小，普遍不需要采取输血等治疗干预；而中间型或者重型孕妇应该及时输血治疗[4]。移植造血干细胞是目前临床上治疗重型地中海贫血唯一的有效方法，该方法有助于延长寿命，并提高生活质量，所以对于有条件的患者应该实施造血干细胞移植治疗，目前多数研究也证明，将移植造血干细胞应用在重型地中海贫血患儿临床治疗中，发现该治疗方法可以延长患儿的生存时间，存活率满意[5]。

综上所述，我院孕妇的地中海贫血发病率较高，通过301型地中海贫血基因检测保证了检出率，在临床上在积极预防的同时，对于确诊地中海贫血的孕妇应该及时通过规范化输血或者移植造血干细胞的方法来改善预后。