MAP2K4、SUMO-1、BRCA1 在年轻子宫内膜癌患者中的表达分析

万 丽，李 可，康 玉，陈 行

(1.江西省乐平市妇幼保健院产科，江西 乐平 333300；2.上海市复旦大学附属妇产科医院妇科，上海 200011)

子宫内膜癌(endometrial cancer, EC)属于妇科常见三大恶性肿瘤之一，发病率约占妇科恶性肿瘤的7%，占女性生殖道恶性肿瘤的20%～30%，同时呈现发病率逐年增高与发病人群年轻化的趋势[1-3]。因该病早期一般无明显临床症状或症状无特异性，易被临床医生及患者忽视，疾病确诊时多进展到中晚期，治疗难度增加，预后差。寻找一种灵敏的早期筛查与病情、预后评价方法对指导临床及时合理治疗、改善患者预后具有重要意义。丝裂原活化蛋白激酶4(mitogen activated protein kinase 4, MAP2K4)能编码MAP激酶信号家族基因，在激活情况下可促使p38或c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinas, JNK)产生磷酸化，并通过促进应激活化蛋白激酶途径激活，参与细胞恶性转化、凋亡等过程[4]。小类泛素化修饰蛋白(small ubiquitination modifying proteins, SUMO)为一类结构与生成、降解循环通路和泛素化蛋白类似，但功能不同的蛋白质翻译后修饰蛋白，其经异肽键和靶蛋白结合后，可调控靶蛋白各种生物学功能，参与恶性肿瘤发生进展[5]。乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1, BRCA1)结构、功能异常与性激素有关的卵巢癌、乳腺癌发病密切相关，因为子宫内膜也属于性激素作用器官，因此BRCA1可能在EC发病中也具有一定作用[6]。本研究选取年轻EC患者、子宫内膜非典型增生患者、子宫内膜正常患者各80例，旨在分析MAP2K4、SUMO-1、BRCA1在年轻EC患者中的表达及临床意义，现报告如下。

1 研究对象与方法

1.1 研究对象

选取2005年11月至2014年3月复旦大学附属妇产科医院收治的80例年轻EC患者设为EC组，同期80例子宫内膜非典型增生患者设为非典型增生组、80例行子宫脱垂手术治疗的子宫内膜正常患者设为正常组。其中EC组年龄在26～45岁，平均(38.95±4.92)岁；病理类型：浆液性癌3 例，透明细胞癌6 例，鳞腺癌10 例，子宫内膜腺癌61 例；国际妇产科联盟(Intemational Federation of Gynecology and Obstetrics, FIGO)分期：Ⅲ～Ⅳ期19例，Ⅰ～Ⅱ期61例；组织分化程度：中低分化(G2～G3)41例，高分化(G1)39例；肌层浸润深度：≥1/2者46例，＜1/2者34例；淋巴结转移：有21例，无59例。非典型增生组年龄24～44岁，平均(38.16±4.05)岁。正常组年龄在24～45岁，平均(37.89±4.37)岁；子宫内膜类型：萎缩型内膜13例，分泌期内膜29例，增殖期内膜38例。3组年龄对比，无显著差异(P＞0.05)，本研究经医院伦理委员会同意。

1.2 病例纳入标准

EC组经术后病理检查证实为EC，术前未采取放化疗；非典型增生组、正常组经手术病理检查证实为子宫内膜非典型增生患者、子宫内膜正常患者；3组临床资料完整，年龄均≤45岁，知晓本研究方案，自愿签订知情同意书。

1.3 病例排除标准

合并血液系统、免疫系统、神经系统疾病者；合并其他恶性肿瘤者；合并肾、肝、心等脏器功能严重障碍者；合并全身感染、脑血管疾病者。

1.4 检测方法

①MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表达检测：所有组织标本均以甲醛(4%)固定，并制作厚4μm的石蜡切片，以免疫组织化学SP法检测组织中MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表达，试剂盒均购自北京中山金桥生物有限公司，有关操作由医院专业检测人员严格按照试剂盒说明书执行，一抗均依据1:100比例进行稀释，将已知阳性片设为阳性对照，磷酸盐缓冲液(PBS)替代一抗设为阴性对照。②结果判定：MAP2K4、SUMO-1蛋白主要是于细胞质内表达，有时在细胞核内表达，BRCA1蛋白在细胞质、细胞核内均有表达，阳性表现为细胞质与(或)细胞核内出现棕褐色、棕黄色或黄色颗粒，于400倍显微镜下对每张切片随机选取10个高倍镜视野，按照阳性染色细胞占比与染色强度实施评分，阳性染色细胞占比：＞50%计3分，26%～50%计2分，10%～25%计1分，＜10%计0分；染色强度：棕褐色计3分，棕黄色计2分，淡黄色计1分，不着色计0分，将阳性染色细胞占比与染色强度两项评分相加，得分为0～1分为阴性，≥2分为阳性[7]。

1.5 观察指标

①对比3 组子宫内膜组织MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表达情况；②分析MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表达与EC组患者临床病理参数(病理类型、临床分期、组织分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移)的关系； ③观察MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表达与EC组患者5年生存率的关系。

1.6 统计学方法

所得研究数据纳入SPSS 23.0软件中处理，计数资料以[n(%)]表示，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3 组子宫内膜组织MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表达比较

EC组子宫内膜组织MAP2K4、BRCA1表达低于非典型增生组、正常组(MAP2K4：χ2值分别32.89、50.26；BRCA1：χ2值分别14.48、60.67，均P ＜0.05)，SUMO-1表达高于非典型增生组、正常组(χ2值分别21.19、61.20，均P＜0.05)，见表1。

2.2 MAP2K4 表达与EC 组患者临床病理参数的关系

MAP2K4表达与EC组患者病理类型之间无显著相关性(P ＞0.05)；临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、组织分化程度为中低分化、肌层浸润深度≥1/2、有淋巴结转移EC组的患者MAP2K4表达均低于临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、组织分化程度为高分化、肌层浸润深度＜1/2、无淋巴结转移的患者(均P＜0.05)，见表2。

2.3 SUMO-1 表达与EC 组患者临床病理参数的关系

SUMO-1表达与EC组患者病理类型之间无显著相关性(P ＞0.05)；临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、组织分化程度为中低分化、肌层浸润深度≥1/2、有淋巴结转移EC组的患者SUMO-1表达均高于临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、组织分化程度为高分化、肌层浸润深度＜1/2、无淋巴结转移的患者(均P＜0.05)，见表3。

表1 3组患者子宫内膜组织MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表达比较[n(%)]Table 1 Comparison of the expression of MAP2K4, SUMO-1 and BRCA1 in endometrial tissues among the three groups[n(%)]

表2 MAP2K4表达与EC组患者临床病理参数的关系[n(%)]Table 2 The relationship between MAP2K4 expression and pathological parameters in EC group [n(%)]

表3 SUMO-1表达与EC组患者临床病理参数的关系[n(%)]Table 3 The relationship between SUMO-1 expression and pathological parameters in EC group [n(%)]

2.4 BRCA1 表达与EC 组患者临床病理参数的关系

BRCA1表达与EC组患者病理类型之间无显著相关性(P ＞0.05)；临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、组织分化程度为中低分化、肌层浸润深度≥1/2、有淋巴结转移的EC组患者BRCA1表达均低于临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、组织分化程度为高分化、肌层浸润深度＜1/2、无淋巴结转移的患者(均P＜0.05)，见表4。

表4 BRCA1表达与EC组患者临床病理参数的关系[n(%)]Table 4 The relationship between BRCA1 expression and pathological parameters in EC group [n(%)]

2.5 MAP2K4、SUMO-1、BRCA1 表 达 与EC 组 患者5 年生存率的关系

MAP2K4、BRCA1在EC组织中呈阳性表达者5年生存率高于阴性表达者，SUMO-1在EC组织中呈阳性表达者5年生存率低于阴性表达者(均P＜0.05)，见表5。

表5 MAP2K4、SUMO-1、BRCA1表达与EC组患者5年生存率的关系[%(n/N)]Table 5 The relationship between MAP2K4, SUMO-1 and BRCA1 expression and 5-year survival rate in EC group[%(n/N)]

3 讨论

EC 属于妇科常见恶性肿瘤，发病率及病死率较高，实现疾病早期防治对改善患者预后尤为重要[8-9]。临床研究指出，EC发病是涉及多因素的生物学过程，体内存在多种肿瘤有关基因可参与调控，由于抑癌基因或癌基因调节细胞周期失常致使细胞出现癌变是EC发病重要机制[10-11]。

3.1 MAP2K4 与EC 的关系

MAP2K4为MAPK家族中一员，属于一种抑癌基因，本研究显示，EC 组子宫内膜组织MAP2K4 表达低于非典型增生组、正常组，且临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、组织分化程度为中低分化、肌层浸润深度≥1/2、有淋巴结转移的EC 患者MAP2K4 表达低于临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、组织分化程度为高分化、肌层浸润 深度＜1/2、无淋巴结转移的患者。表明EC患者子宫内膜组织中MAP2K4呈低表达，且表达同患者临床分期、组织分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移等病理参数密切相关。MAP2K4基因位置处于第17号染色体，在MAPK的信号传导途径中起着重要作用，可激活p38 MAPK及JNK两个下游目标，影响细胞病变及衰亡[12]。有研究发现，在人上皮性肿瘤尤其是乳腺癌与卵巢癌患者体内，MAP2K4可以7%～10%速率丢失，作为一种抑癌基因，可对乳腺癌、卵巢癌等肿瘤起到抑制作用[13]。张競[14]研究指出，EC组织内MAP2K4表达低于子宫内膜增生及子宫内膜正常患者，且表达与肿瘤临床分期、分化程度等密切相关。亦提示可将MAP2K4作为EC早期筛查、恶性程度判断的重要依据。

3.2 SUMO 与EC 的关系

SUMO分子在进化中有高度保守性，广泛存在于真菌、植物、动物中，SUMO化修饰过程包括分离、连结、缀合、激活、成熟等步骤[15]。本研究结果中，EC组子宫内膜组织SUMO-1表达高于非典型增生组、正常组，且临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、组织分化程度为中低分化、肌层浸润深度≥1/2、有淋巴结转移的EC患者SUMO-1表达高于临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、组织分化程度为高分化、肌层浸润深度＜1/2、无淋巴结转移的患者。表明EC患者子宫内膜组织中SUMO呈高表达，且表达与患者临床分期、组织分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移等病理参数密切相关。韩志坚等[16]研究指出，p53、鼠双微体2(mouse bimicrosome 2, MDM2)、早幼粒细胞性白血病基因(promyelocytic leukemia gene, PML)等癌基因及抑癌基因的功能均可受到SUMO化修饰调节，SUMO化修饰在癌症发生、进展、转移中均扮演着重要角色。同时，相关研究报道，SUMO-1可调控雌激素受体α(estrogen receptor alpha, ERα)蛋白及其他多组蛋白质表达及功能，以此促进EC发生、进展[17]。亦说明SUMO-1在EC发生、进展中起着重要作用。

3.3 BRCA1 与EC 的关系

BRCA1 为遗传性卵巢癌、乳腺癌易感基因，且属于抑癌基因之一，本研究中，EC 组子宫内膜组织BRCA1 表达低于非典型增生组、正常组，临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、组织分化程度为中低分化、肌层浸润 深度≥1/2、有淋巴结转移的EC患者BRCA1表达低于临床分期为Ⅰ～Ⅱ期、组织分化程度为高分化、肌层浸润深度＜1/2、无淋巴结转移的患者。说明EC患者子宫内膜组织中BRCA1呈低表达，且表达与患者临床分期、组织分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移等病理参数具有密切关系。有研究指出，BRCA1在DNA双链断裂修复过程中发挥着重要作用，可参与DNA形成与蛋白表达、保持基因组的稳定性、细胞程序性衰亡、细胞增殖等过程[18]。若BRCA1产生基因突变可致使细胞基因稳定性受到破坏，对外界环境变化的敏感性增高，且可干扰机体内DNA损伤监测，影响细胞中DNA损伤修复，从而造成基因表达产物发生改变，例如，无法产生蛋白产物或蛋白缺陷，会使抑制肿瘤作用减弱，进而造成肿瘤发生、进展。赵宁等[19]研究亦表明，BRCA1基因突变与其蛋白表达降低具有显著相关性，且其蛋白表达下降与EC发生、进展具有密切关系。

本研究还观察了MAP2K4、SUMO-1、BRCA1与EC患者预后的关系，发现MAP2K4、BRCA1在EC组织中呈阳性表达者5年生存率高于阴性表达者，SUMO-1在EC组织中呈阳性表达者5年生存率低于阴性表达者。提示三者与患者生存率也有密切关系，其具体原因仍有待将来进一步探讨。

综上，MAP2K4、BRCA1在年轻EC患者中呈低表达，SUMO-1呈高表达，且三者表达与患者临床分期、组织分化程度、肌层浸润深度、淋巴结转移等病理参数及生存率密切相关，可将其作为疾病恶性程度、预后评定的重要依据。