HPLC-MS/MS法检测花生中咯菌腈的残留量

马新刚，张爱娟，梁 林，左伯军

(山东省农药科学研究院 山东省化学农药重点实验室，山东 济南 250033)

花生是我国重要的经济和油料作物。根腐病是影响花生产量和品质的主要病害之一,各生育期均可发病。近年来国内市场花生需求增多,花生种植面积不断增大,花生重茬面积也随之扩大,根腐病的发生有加重趋势,导致花生缺苗断垄、烂根死苗,严重时可导致花生成片死亡，造成重大生产经济损失[1]。目前，对咯菌腈的残留报道较少[2]，涉及的作物主要有棉花、人参、水果和蔬菜等，检测方法主要为液相色谱法和液相色谱串联质谱法[3-8]，但未见咯菌腈在花生中残留分析方法的研究。

本文参考QuEChERS方法结合高效液相色谱串联质谱仪，建立了花生仁和秸秆中咯菌腈残留量的分析检测方法，该方法试验样品前处理简单快速、咯菌腈的定性定量准确、检测结果重现性好。

1 材料与方法

1.1 仪器与药剂

高效液相色谱-质谱联用仪(LCMS-8030)，SHIMADZU公司；多管涡旋混合仪(MTV-100)，杭州奥盛仪器有限公司涡旋仪；精密电子天平(AL204)，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；离心机(TDL-5-A)，上海安亭科学仪器厂。

氯化钠(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)；乙腈(色谱纯，瑞典欧森巴克环境化学公司；分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)；乙酸铵(色谱纯，Fisher Chemical)；十八烷基硅烷(C18)吸附剂(安捷伦科技有限公司)；咯菌腈标准品(纯度为99.0%，购自德国Dr.Ehrenstorfer GmbH公司)。

溶液配制：准确称取0.0270 g咯菌腈标准品，将准确称重的标准品转移至50 mL容量瓶中，用乙腈溶解，待标准品完全溶解，定容得535 mg/L咯菌腈标准溶液，置于4℃冰箱中保存，使用时用乙腈稀释成100mg/L的咯菌腈标准溶液。

1.2 前处理方法

将花生仁(秸秆)用食品调理仪粉碎，准确称取混匀的样品10.0 g(秸秆5.0g)于50 mL具塞式塑料离心管中，加入10 mL乙腈和10 mL超纯水，用涡旋仪高速涡旋4 min，加入5g氯化钠，剧烈振荡30s，5000r/min离心4 min至液面分层，取上清液1 mL至装有50mg C18的2mL离心管中，高速涡旋1min，静置1min，上清液过0.22 μm微孔滤膜，待测。

1.3 色谱及质谱检测条件

色谱条件：Shim-pack XR-ODSⅡ色谱柱(75 mm×2.0 mm，2.2 μm)；柱温为室温；流动相： 5mmol乙酸铵水溶液+乙腈体积比20：80；进样体积：2 μL；流速：0.4 mL/min。

质谱：电喷雾离子源ESI(-)；毛细管电压：3.5 kV；加热块温度：400 ℃；干燥气温度：250 ℃；干燥气流量：15 L/min；雾化气流量：3 L/min；反应气(Ar)压力：230kpa。定量分析结果(见表1)。

表1 咯菌腈的质谱检测条件

2 结果与分析

2.1 仪器条件的确定

选用1 mg/L的咯菌腈标准溶液，在电喷雾离子源正/负方式下进行全扫描(m/z 50～300)，根据扫描结果，选择合适的电离方式和分子离子峰。通过比较仪器响应值，发现在ESI(-)下咯菌腈[M-1]峰(m/z 247)为最强峰。选择[M-1]峰(m/z 247)做母离子，进行子离子扫描，优化碰撞池电压，分别获得定量离子对m/z 247>247和定性离子对m/z 247>126，相应的碰撞能量分别为25V和35V。质谱图(见图1)。

a.全扫描质谱图;b.二级质谱图图1 咯菌腈的全扫描质谱图和二级质谱图

色谱条件的选择，通过试验表明5mmol乙酸铵水溶液+乙腈体积比为20∶80，流速为0.4mL/min时，咯菌腈与其余杂质分离效果好且基线平稳、峰型对称。溶剂标样色谱图(见图2)。

图2 咯菌腈溶剂标样(0.1 mg/L)

2.2 咯菌腈线性关系

将咯菌腈(10mg/L)的标准溶液用乙腈、花生仁空白基质溶液、秸秆空白基质溶液配制成0.01、0.05、0.1、0.5、1mg/L系列标准溶液。按1.3节条件测定，每个质量浓度重复3次，以标准溶液浓度为横坐标，定量离子对峰面积为纵坐标，绘制工作曲线。在 0.01～1 mg/L 范围内，咯菌腈在乙腈、花生仁空白基质溶液、秸秆空白基质溶液中均呈良好的线性关系 (见表2)。目前常用的基质效应的评价方法是采用基质标准曲线拟合的线性方程斜率与溶剂标准曲线线性方程斜率比 ( Slope ratio，SR)，可以采用 SR 比值或其百分数表示。若 SR =100% (或 1)，说明无基质效应; 若SR < 100%，呈基质抑制效应; 若 SR > 100%，呈基质增强效应[9]。本研究中，咯菌腈在两种基质中均呈现基质增强效应。为校正和消除基质效应影响，本研究均采用基质匹配标准溶液。

表2 咯菌腈的线性方程、相关系数、斜率比

2.3 咯菌腈的添加回收率和精密度

在空白花生仁基质中按照0.01～1mg/kg 3个添加水平，在空白秸秆基质中按照0.05～2mg/kg 3个添加水平分别添加咯菌腈标准溶液，结果表明(见表3)：咯菌腈在花生仁中添加回收率为86%～114%，相对标准偏差为7%～8%；咯菌腈在花生秸秆中添加回收率为79%～107%，相对标准偏差为5%～8%，符合农药残留分析要求。目标峰峰型较好且无杂质干扰(图3和图4)。

表3 咯菌腈在花生仁和秸秆中的添加回收率及相对标准偏差

图3 花生仁中添加色谱图(添加0.1 mg/kg)

2.4 方法定量限

以最低添加水平作为方法的定量限(LOQ)，咯菌腈在花生仁的定量限为0.01 mg/kg，秸秆中的定量限为0.05mg/kg。

3 结论

本文参照QuEChERS方法，建立了咯菌腈在花生仁及秸秆中的残留分析方法，样品经乙腈和水提取，C18净化，高效液相色谱串联质谱仪检测。咯菌腈在花生仁中的定量限为0.01mg/kg，在秸秆中的定量限为0.05mg/kg，平均回收率在92%～105%之间。该方法准确可靠、简单快速、重现性良好，满足农药残留分析要求，为咯菌腈及其制剂在其他农产品中残留检测提供了参考依据。

图4 花生秸秆中添加色谱图(添加0.5 mg/kg)