CBX7和TAZ在喉鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理特征的相关性

杜洪岩

（辽宁省人民医院病理科，沈阳 110016）

喉癌是最常见的上呼吸道恶性肿瘤，流行病学调查显示65%～70%的上呼吸恶性肿瘤患者患有喉癌，其中喉鳞状细胞癌患者占96%［1］。目前对于喉鳞状细胞癌患者大多采用手术切除、放疗和化疗等治疗方式，虽然取得较好的治疗效果，但患者面临较大风险，因此从分子水平对喉鳞状细胞癌的发展过程进行研究对寻找新的治疗方法至关重要。色素框同源蛋白7（Chromobox Protein Homolog 7，CBX7）具有调节肿瘤干细胞自我增殖和分化的能力，在肿瘤发生发展过程中发挥重要作用［2］。具有 PDZ 结合域的转录共激活因子（Transcriptional coactivator with PDZ- binding motif，TAZ）作为Hippo 信号通路关键分子，其在调节基因表达及肿瘤生长方面具有重要意义［3］。多项研究表明，胃癌［4］、胶质母细胞瘤［5］及胰腺癌［6］组织中CBX7和TAZ均呈异常表达，但关于喉鳞状细胞癌中CBX7和TAZ的表达研究较少。本研究通过对67例喉鳞状细胞癌患者癌组织和癌旁正常组织中CBX7和TAZ蛋白的表达水平进行回顾性分析，并探究两者与患者各临床特征间的关系。

1 资料与方法

1.1 病理资料本研究选择2009年3月～2018年2月期间我院收治的67例喉鳞状细胞癌患者的蜡块标本资料进行回顾性分析，蜡块标本包括癌组织及经病理检验未被浸润的癌旁正常组织，其中男性58例，女性9例；年龄41～77岁，中位年龄58岁；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期35例，Ⅲ～Ⅳ期32例。纳入标准：①经病理学检查确诊为喉鳞状细胞癌；②病例资料完整。排除标准：①不能耐受手术；②手术前接受放疗、化疗、靶向治疗及其他抗肿瘤治疗；③合并严重神经及精神系统疾病。

1.2 方法所有患者均行喉癌切除术+术后放疗。将术中收集的癌组织及癌旁正常组织于离体60min内用中性甲醛（上海钰博生物科技有限公司）固定，经梯度浓度酒精脱水，二甲苯（临沂艾泽拉斯生物科技有限公司）透明，采用组织包埋机（德国Leica）将组织用石蜡包埋成块，再用组织切片机（德国Leica）对其进行连续切片，厚度约4μm，依次采用二甲苯、沸腾的柠檬酸钠缓冲液（长沙达尔锋生物科技有限公司）及3%过氧化氢（常州贝源鑫生物科技有限公司）进行脱蜡、抗原修复及过氧化氢酶阻断，经PBS缓冲液（上海雅吉生物科技有限公司）漂洗3次后加山羊血清（北京博胜经纬科技有限公司）进行封闭。分别滴加经稀释的鼠抗人CBX7多克隆抗体（武汉博欧特生物科技有限公司）和鼠抗人TAZ单克隆抗体（武汉博欧特生物科技有限公司），置于4℃冰箱中孵育过夜，经PBS漂洗3次后加入羊抗鼠IgG（北京博尔西科技有限公司）37℃孵育0.5h，再次漂洗，使用DAB显色试剂盒（上海康朗生物科技有限公司）进行显色，再用苏木精（上海研谨生物科技有限公司）复染、梯度酒精脱水及中性树脂封片。由两位经验丰富的病理科医生在双盲情况下使用生物显微镜（日本OLYMPUS）对染色结果进行观察，避开出血、坏死及刀口区，随机选取10个包含100个细胞的视野，观察其中阳性细胞率和着色程度。采用陈萍等人［7］在其研究中采用的免疫组化评分标准进行评分。

1.3 观察指标喉鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织中CBX7和TAZ蛋白的表达水平；CBX7和TAZ的表达水平与患者年龄、性别、肿瘤发生部位、TNM分期、组织分化程度及淋巴结转移情况等各病理临床特征的关系。

1.4 统计学处理本研究所有数据经双人双机输入以保证准确性，采用SPSS 20.0软件进行数据分析，计数资料采用χ2检验，采用线性相关法分析CBX7和TAZ在喉鳞状细胞癌组织中表达水平的关系。当P＜0.05时，统计学上认为差异具有显著性。

2 结果

2.1 CBX7和TAZ蛋白在癌组织及癌旁正常组织中的表达CBX7蛋白主要表达于细胞质，TAZ蛋白主要表达于细胞核。CBX7蛋白在喉鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织中的高表达率分别为85.07%（57/67）和65.67%（44/67），差异具有统计学意义（P＜0.05）；TAZ蛋白在喉鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织中的高表达率分别为76.12%（51/67）和13.43%（9/67），差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1、图1及图2。

表1 CBX7和TAZ蛋白在癌组织及癌旁正常组织中的表达比较（例）

图1 CBX7蛋白在癌组织及癌旁正常组织中的表达（×200）

图2 TAZ蛋白在癌组织及癌旁正常组织中的表达（×200）

2.2 CBX7蛋白的表达水平与各临床病理特征间的关系年龄、性别及肿瘤发生部位不同的患者癌组织中CBX7蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）；TNM分期、组织分化程度及淋巴结转移情况不同的患者癌组织中CBX7蛋白表达水平差异具有统计学意义（P＜0.05），见表2。

2.3 TAZ蛋白的表达水平与各临床病理特征间的关系年龄和性别不同的患者癌组织中TAZ蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）；发生部位、TNM分期、组织分化程度及淋巴结转移情况不同的患者癌组织中TAZ蛋白表达水平差异具有统计学意义（P＜0.05），见表3。

2.4 喉鳞状细胞癌组织中CBX7和TAZ蛋白表达水平的相关性在CBX7高表达的57例喉癌组织中，有47例TAZ呈高表达，10例呈低表达；在CBX7低表达的10例喉癌组织中，有4例TAZ呈高表达，6例呈低表达。两者在喉鳞状细胞癌组织中的表达水平呈正相关（P＜0.05），见表4。

表2 CBX7蛋白的表达水平与各临床病理特征间的关系比较（例）

表3 TAZ蛋白的表达水平与各临床病理特征间的关系比较（例）

3 讨论

喉鳞状细胞癌是一种常见的头颈部肿瘤，发病初期患者常无自觉症状或仅出现声音改变，随着疾病进展，患者常出现疼痛、呼吸困难、失声以及其他远处转移症状［8］。多项研究表明，CBX7和TAZ在多种恶性肿瘤中呈现出异常表达，在其发生发展过程中发挥重要作用，提示CBX7和TAZ为肿瘤因子［4，5，6］。

表4 喉鳞状细胞癌组织中CBX7和TAZ蛋白表达相关性

CBX7是多梳蛋白家族中多梳基因抑制复合物-1的成员之一，广泛存在于大脑、心脏、肾脏及骨骼肌，具有维持干细胞分化特性，调控细胞增殖衰亡的作用［9］。多项研究结果显示，CBX7在不同肿瘤的发生发展中发挥不同作用［10，11，12］。HY Kim等人［10］指出，乳腺癌组织中CBX7表达水平显著低于正常组织，CBX7能下调Wnt/β-catenin途径信号，抑制乳腺癌发生。S Ni等人［11］也在其研究报告中说明CBX7在胰腺癌的发生发展过程中发挥抑癌基因作用，CBX7的缺失会导致PTEN/Akt通路信号增强，进而上调胰腺癌细胞的增殖、转移及侵袭能力。与前者结论不同，NA Cacciola等人［12］发现，肺癌组织中CBX7表达水平呈上升趋势，CBX7表达的恢复可减弱肺癌细胞对药物的敏感性。本研究发现，喉鳞状细胞癌中CBX7表达水平显著高于正常组织，这与NA Cacciola等人的研究结果一致。且CBX7的高表达与TNM分期、组织分化程度、淋巴结转移情况密切相关，提示CBX7在喉鳞状细胞癌发展过程中发挥促进作用。其原因可能为CBX7通过调节细胞周期蛋白依赖激酶16和肿瘤抑制因子的表达，抑制细胞衰老凋亡，导致细胞异常增殖，进而发生癌变［13］。

TAZ是一种14-3-3结合蛋白，其主要生理作用为与目的基因结合，通过调节Yes相关蛋白的磷酸化，调控细胞增殖、分化和衰亡，维持各组织、器官的正常体积和功能［14］。此外，TAZ还是Hippo信号通路重要下游分子，Hippo信号通路具有限制细胞过度增殖、促进细胞正常凋亡、抑制肿瘤发生的作用。生理情况下，TAZ受Hippo信号通路负调控，发生磷酸化而失活，并通过泛素化降解途径被清除［15］。M Bartucci等人［16］研究得出，乳腺癌组织中过表达的TAZ能提高乳腺癌细胞的增殖活性及侵袭力。刘争杨等人［17］也指出TAZ表达水平在胃癌组织中明显高于正常组织。本研究发现，喉鳞状细胞癌中TAZ表达水平显著高于正常组织，这与之前研究结果一致［16，17］。且TAZ的高表达与发生部位、TNM分期、组织分化程度、淋巴结转移情况密切相关，提示CBX7在喉鳞状细胞癌发展过程中发挥促进作用。此外，本研究还发现，CBX7和TAZ在喉鳞状细胞癌组织中的表达水平呈正相关。

综上，CBX7和TAZ在喉鳞状细胞癌中呈高表达趋势；且CBX7的表达水平与TNM分期、组织分化程度、淋巴结转移情况有关；TAZ的表达水平与发生部位、TNM分期、组织分化程度、淋巴结转移情况有关；CBX7和TAZ在喉鳞状细胞癌组织中的表达水平呈正相关，但其具体机制需进一步研究后阐明。