加味玉屏风浓煎剂的工艺优化研究*

钱海燕，曹 杨

南京中医药大学第二附属医院，江苏省第二中医院 药学部，南京210017

玉屏风散是由黄芪、白术、防风3 味中药组成的经典方剂，具有益气、固表、止汗的功效[1，2]。我院结合多年临床经验，在玉屏风散的基础上添加了党参、桂枝、干姜、吴茱萸、紫苏叶等5 味中药，形成加味玉屏风散，作为医院协定处方，工艺上亦改良为浓煎剂。该剂增加了补脾益肺、温肺化饮的功效，尤对患儿呼吸道感染疗效显著。

浓煎剂是由我国传统汤剂改良而来，本研究围绕加味玉屏风浓煎剂的工艺进行优化研究，以期保证生产工艺的科学性，提高制剂的稳定性，确保临床的疗效。

1 仪器与药品、试剂

1.1 仪器

SHIMADZU LC-20AD 高效液相色谱仪系统（日本岛津公司）；BP121S 型电子分析天平（德国赛多利斯公司）；BSM220.4 分析天平（上海卓精公司）；YJX40-g 微压循环中药煎药机（北京东华原公司）。

1.2 药品与试剂

毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品（纯度97.6%，批号111920-201102），5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品（纯度95.8%，批号111523-201509）均购自中国食品药品检定院；升麻素苷对照品（纯度96.2%，批号161226），肉桂酸对照品（纯度98.8%，批号117/100127）均购自南京森贝伽生物科技有限公司。

黄芪、炒白术、党参、干姜、吴茱萸、紫苏叶（亳州市中药饮片厂）；桂枝（南京正草堂药业有限公司）；防风（南京海源中药饮片有限公司）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 浓煎剂样品的制备

称取黄芪150 g、炒白术90 g、党参60 g、桂枝30 g、干姜20 g、吴茱萸20 g、紫苏叶50 g、防风60 g，清洗干净，倒入中药煎药机中浸泡、煎煮，保持微沸1 h，过滤，得第一次煎煮液；滤渣再次煎煮，合并2次煎煮液。药液置容器中沉淀，经200 目筛过滤，把药液置于蒸汽夹层锅中加热至沸，改用文火，不断搅拌，浓缩至体积560 mL，于4 ℃存放备用。

2.2 HPLC 法测定4 种活性成分

2.2.1 色谱条件 色谱柱：YMC-PACK ODS-A 柱（4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇（B）-0.1%甲酸水溶液（A）（梯度洗脱，程序为：0～70 min，5%～38% B；70～95 min，38%～42% B；95～100 min，42%～5%B）；流速：1 mL·min-1；检测波长：284 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

2.2.2 溶液的制备 对照品溶液：分别精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、肉桂酸对照品适量，分别置于5 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，即得浓度分别为2.102、1.982、2.254、2.056 mg·mL-1对照品储备液。分别吸取上述4种对照品储备液1 mL、1 mL、1 mL、0.5 mL，置于5 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，即得每毫升含毛蕊异黄酮葡萄糖苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、肉桂酸分别为420.4、396.4、450.8、205.6 μg 的混合对照品溶液，于4 ℃存放备用。

供试品溶液：精密吸取加味玉屏风浓煎剂10mL，水浴蒸干，用甲醇溶解，定容于2 mL 量瓶中，3000 r·min-1离心10 min，取上清液，经0.45 μm 微孔滤膜，得供试品溶液，于4 ℃存放备用。

2.2.3 系统适应性试验 取“2.2.2”项下混合对照品溶液及供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件检测，色谱图见图1。

2.2.4 线性关系考察 精密吸取“2.2.2”项下混合对照品溶液50、100、200、400、600、1000 μL 置1 mL量瓶中，用甲醇定容，配制成不同浓度的混合对照品溶液，按照“2.2.1”项条件检测，以进样量（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，回归方程见表1。

表1 4 种指标性成分线性关系考察

2.2.5 精密度试验 精密取“2.2.2”项下混合对照品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件重复进样6 次，记录峰面积值，计算得4 种成分的RSD 值（分别为0.23%、0.39%、0.21%、0.39%）均小于1%，说明仪器的精密度良好。

2.2.6 重复性试验 取同批加味玉屏风浓煎剂6份，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”色谱条件检测，记录各个色谱峰面积，计算得4 种成分峰面积的RSD 值（分别为0.65%、1.64%、1.69%、0.76%）小于2%，说明本法重复性良好。

2.2.7 稳定性试验 取同批加味玉屏风浓煎剂适量，分别于0、2、4、6、8、12、24 h 进样，按“2.2.1”项条件检测，记录各个色谱峰面积，计算得4 种成分峰面积的RSD 值（分别为0.76%、1.10%、0.78%、1.12%）均小于2%，表明供试品溶液在24 h 内稳定性较好。

2.2.8 加样回收率试验 分别精密称取已知含量的同一批加味玉屏风浓煎液5 mL 各6 份，每份精密加入毛蕊异黄酮葡萄糖苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、肉桂酸的量约为加味玉屏风浓煎剂所含各对照品相当的量，用纯水定容至10 mL，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”色谱条件检测，计算得4 种成分的回收率分别为99.82%、97.64%、98.37%、97.25%，RSD 分别为1.58%、2.53%、2.45%、1.98%，加样回收率符合要求。

2.3 浸出物含量测定

精密量取混合均匀的加味玉屏风浓煎液25 mL，水浴蒸干后于105 ℃恒温干燥3 h，冷却30 min 迅速精密称定质量[3]。以干燥品来计算加味玉屏风浓煎剂的浸出物含量。

2.4 浓煎剂正交试验

根据前期预实验的单因素考察结果，确定4 种成分权重系数，计算综合评分值。

综合评分=浸出物含量/Max（浸出物含量）×40+毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量/Max（毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量）×15+升麻素苷含量/Max（升麻素苷含量）×15+5-O-甲基维斯阿米醇苷/Max（5-O-甲基维斯阿米醇苷）×15+肉桂酸含量/Max（肉桂酸含量）×15

通过L9（34）安排正交试验对加味玉屏风浓煎剂提取工艺进行优选。因素和水平见表2；正交试验结果见表3。

表2 加味玉屏风浓煎剂提取工艺因素水平

由表3、表4 结果可知，影响加味玉屏风浓煎剂提取工艺的因素依次为B＞A＞C,即煎煮时间＞浸泡时间＞加水量，最终选择A2B3C2 为最佳工艺条件，即浸泡60 min，煎煮210 min，加入10 倍量水提取。

3 讨论

加味玉屏风浓煎剂的8 味中药中，君药黄芪的指标性成分为毛蕊异黄酮葡萄糖苷；臣药桂枝的指标性成分为肉桂酸；佐药防风的指标性成分为升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷。浸出物含量和4个活性成分作为加味玉屏风浓煎剂煎煮工艺的质控指标，可以全面地反映提取物有效成分的信息，符合中医用药的整体观。优化后的浓煎剂在保证临床疗效的前提下，与水煎剂相比具有服用剂量小、封包质量稳定、携带方便等优点，具有良好的社会效益和经济效益。

表3 加味玉屏风浓煎剂提取工艺正交试验及结果

表4 方差分析结果