民族药九龙盘的化学成分(Ⅱ)

卢汝梅，张 强，陈 娜，李 俊，韦建华，朱小勇

(广西中医药大学 药学院，广西 南宁 530001)

九龙盘为广西壮医、瑶医常用药，其基源为蓼科金线草属植物金线草Antenoronfiliforme(Thunb.) Roberty et Vautier，在广西各地有分布。中医认为九龙盘有凉血止血、散瘀止痛、清热解毒之功效。九龙盘壮名Goseqmanh (棵社慢)，壮医认为其具有清热毒、通龙路、散瘀止痛之功效，用于埃病(咳嗽)、陆裂(咳血)、渗裂(吐血)、兵淋勤(崩漏)、京尹(痛经)、阿意咪(痢疾)、白冻(泄泻)、林得叮相(跌打损伤)、发旺(风湿骨痛)、渗裆相(烧烫伤)、额哈(毒蛇咬伤)等疾病的治疗[1-2]。九龙盘在瑶药中属于风打相兼药，称为慢惊风，瑶医认为具有祛风除湿、理气止痛、止血散淤之功效，临床用于治疗风湿骨痛、肺脓疡、痢疾、腹泻、胃痛、神经性腰痛、外感痧症、子宫出血、骨折、毒蛇咬伤等[3]。

九龙盘具有抗炎、镇痛和抗凝血等药理活性[3]，但化学成分和作用机制等方面研究报道甚少，文献[4-5]报道从金线草中分离得到的化合物主要为黄酮及其苷、酚酸类、萜类等成分，包括3-甲氧基槲皮素、4′-甲基-棉花素、圣草酚、柠檬黄素、鼠李黄素、阿福豆苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷、山奈酚-3，7-二-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、鼠李黄素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷、3,3′-O-二甲基鞣花酸、邻苯二酚、没食子酸、没食子酸甲酯、没食子酸乙酯、对甲氧基肉桂酸、木栓酮、3β-angeloyloxy-7-epifutronolide、5-羟基-2-O-β-D-吡喃葡萄糖基龙脑等30多种化合物，但成分研究还不深入且缺乏系统性，药效物质基础不明，临床应用和产品开发还缺乏科学依据。本课题组在前期研究证明九龙盘具有良好的抗炎和止血活性的基础上，采用硅胶、MCI GEL CHP 20P反相树脂、AB-8大孔吸附树脂、Sephadex LH-20和ODS柱色谱等方法从其乙醇提取物不同极性部位中分离得到17个化合物，分别鉴定为2-甲基蒽醌(1)、表木栓醇(2)、羽扇豆醇乙酸酯(3)、大黄素(4)、大黄素甲醚(5)、熊果酸(6)、鞣花酸(7)、咖啡酸(8)、原儿茶酸(9)、香草酸(10)、槲皮素(11)、表儿茶素(12)、芹菜素(13)、山奈酚(14)、芦丁(15)、鼠李糖(16)和川陈皮素(17)。

1 仪器、试剂与药材

Waters Autospec Premier p776质谱仪(美国Waters公司)；Bruker Drx-500 MHz、Avance III 800 MHz核磁共振仪(瑞士Bruker公司)。

柱色谱硅胶、薄层色谱硅胶(青岛海洋化工厂)；AB-8大孔吸附树脂(南开大学树脂厂)；Sephadex LH-20(pharmacia公司(美国))；MCI GEL CHP 20P 反相树脂(三菱化学公司(日本))；其余溶剂均为分析纯。

九龙盘药材采集于容县黎村镇，经广西中医药大学韦松基教授鉴定为蓼科植物金线草Antenoronfiliforme(Thunb.) Rob. et Vaut.)全草。药材采集后自然晾干，样品保存于广西中医药大学中药化学实验室(编号20160715)。

2 提取分离

九龙盘药材15.0 kg，依次用体积分数95%乙醇与60%乙醇冷浸提取3次(10倍量每次)；提取液减压浓缩至无醇味，加水混悬，用系统溶剂分配法分离，得到石油醚萃取物261 g、乙酸乙酯萃取物251 g和正丁醇萃取物360 g。

取石油醚萃取物80 g，硅胶柱色谱分离，用100∶0→90∶1→70∶1→50∶1→30∶1→15∶1→5∶1→2∶1→1∶1→ 0∶100(均为体积比，下文同)的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，薄层色谱检识，合并相同流分，再经硅胶柱色谱分离及重结晶，得到化合物1(3.6 mg)和2(5.0 mg)。取乙酸乙酯萃取物110 g，硅胶柱色谱分离，用100∶0→80∶1→50∶1→20∶1→10∶1→6∶1→3∶1→1∶1→0∶100的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，薄层色谱检识，合并相同流分，再经硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱分离和重结晶，得到化合物3(3.0 mg)、4(4.0 mg)、5(3.0 mg)、6(3.4 mg)、7(3.0 mg)、8(1.5 mg)、9(2.7 mg)、10(8.0 mg)、11(18.0 mg)、12(1.5 mg)。取正丁醇萃取物160 g，热水溶解，过滤，滤液用AB-8吸附树脂柱色谱分离，用水-乙醇(100∶0→70∶30→50∶50→25∶75→5∶95→0∶100)梯度洗脱，薄层色谱检识，合并相同流分，再经MCI GEL CHP 20P反相树脂柱色谱、ODS柱色谱和Sephadex LH-20柱色谱分离，得到化合物13(3.0 mg)、14(6.0 mg)、15(7.0 mg)、16(22.0 mg)、17(4.0 mg)。

3 结构鉴定

化合物1黄色网状粉末(氯仿)。EI-MS (m/z): 222[M]+, 207, 194。分子式C15H10O2。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 8.10(1H, brs, H-1), 7.61(1H, d,J=7.8 Hz, H-3), 8.20(1H, d,J=7.8 Hz, H-4), 8.29(2H, m, H-5, 8), 7.79(2H, m, H-6, 7), 2.54(3H, s, —CH3)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 127.5(C-1), 145.3(C-2), 135.0(C-3), 127.5(C-4), 127.2(C-5), 134.0(C-6), 134.1(C-7), 127.2(C-8), 183.1(C-9), 183.5(C-10), 131.3(C-4a), 133.6(C-8a), 133.4(C-9a), 133.6(C-10a), 22.0(—CH3)。与文献[6]报道的2-甲基蒽醌数据对比，确定化合物1为2-甲基蒽醌。

化合物2无色片状结晶(二氯甲烷)。EI-MS (m/z): 428[M]+, 413, 275, 248, 205, 165。分子式C30H52O。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): 3.73(1H, m, H-3), 1.24(3H, s, H-28), 1.04(3H, s, H-27), 0.99(6H, s, H-26, 29), 0.96(3H, s, H-30), 0.94(3H, s, H-25), 0.91(3H, d,J=7.3 Hz, H-23), 0.87(3H, s, H-24)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 15.8(C-1), 35.2(C-2), 72.8(C-3), 49.2(C-4), 37.1(C-5), 41.7(C-6), 17.6(C-7), 53.2(C-8), 37.8(C-9), 61.3(C-10), 35.6(C-11), 30.6(C-12), 39.6(C-13), 38.4(C-14), 32.3(C-15), 36.1(C-16), 30.0(C-17), 42.8(C-18), 35.2(C-19), 28.2(C-20), 32.8(C-21), 39.3(C-22), 11.6(C-23), 16.4(C-24), 18.3(C-25), 20.1(C-26), 18.7(C-27), 32.1(C-28), 35.1(C-29), 31.8(C-30)。与文献[7]报道的表木栓醇数据对比，确定化合物2为表木栓醇。

化合物4黄色结晶(甲醇)。EI-MS (m/z): 270[M]+, 242, 213, 139。分子式为C15H10O5。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) : 2.43 (3H, s, —CH3), 7.07 (1H, d,J=1.0 Hz, H-2), 7.50(1H, d,J=1.1 Hz, H-4), 7.13 (1H, d,J=2.4 Hz, H-5), 6.56 (1H, d,J=2.4 Hz, H-7)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 163.4(C-1), 125.3(C-2), 149.8(C-3), 121.9(C-4), 109.2(C-5), 167.2(C-6), 109.2(C-7), 166.4(C-8), 191.8(C-9), 183.0(C-10), 134.6(C-4a), 110.3(C-8a), 114.9(C-9a), 136.9(C-10a), 22.3(—CH3)。与文献[9]报道的大黄素数据对比，确定化合物4为大黄素。

化合物5橙色结晶(氯仿)。EI-MS (m/z): 284[M]+, 255, 241, 128。分子式为C16H12O5。1H-NMR (500 MHz, CDCl3) : 12.31(1H, s, 8-OH), 12.11(1H, s, 1-OH), 6.68(1H, d,J=2.5 Hz, H-2), 7.35(1H, d,J=2.5 Hz, H-4), 7.62(1H, d,J=1.2 Hz, H-5), 7.07(1H, d,J=1.2 Hz, H-7), 3.93(3H, s, —OCH3), 2.45(3H, s, —CH3)。13C-NMR (125 MHz, CDCl3): 166.5(C-1), 108.2(C-2), 162.5(C-3), 106.8(C-4), 121.3(C-5), 148.5(C-6), 124.5(C-7), 165.2(C-8), 190.8(C-9), 182.0(C-10), 133.2(C-4a), 113.7(C-8a), 110.3(C-9a), 135.2(C-10a), 22.2(—CH3), 56.1(—OCH3)。与文献[10]报道的大黄素甲醚数据对比，确定化合物5为大黄素甲醚。

化合物6白色粉末(甲醇)。EI-MS (m/z): 456[M]+, 438, 300, 248, 208, 203, 189, 133。分子式为C30H48O3。1H-NMR (500 MHz, C5D5N): 3.46(1H, t,J=8.0 Hz, H-3), 5.48(1H, brs, H-12), 1.24(3H, s, H-23), 1.02(3H, s, H-24), 0.87(3H, s, H-25), 1.05(3H, s, H-26), 1.22(3H, s, H -27), 0.94(3H, d,J=6.4 Hz, H-29), 1.00(3H, d,J=6.5 Hz, H-30)。13C-NMR (125 MHz, C5D5N): 39.1(C-1), 28.2(C-2), 78.2(C-3), 39.4(C-4), 55.9(C-5), 18.8(C-6), 33.6(C-7), 40.0(C-8), 48.1(C-9), 37.3(C-10), 17.5(C-11), 125.7(C-12), 139.3(C-13), 42.5(C-14), 28.7(C-15), 25.0(C-16), 48.1(C-17), 53.6(C-18), 39.5(C-19), 39.4(C-20), 31.1(C-21), 37.5(C-22), 28.9(C-23), 15.7(C-24), 16.6(C-25), 17.6(C-26),23.7(C-27), 180.0(C-28), 24.0(C-29), 21.5(C-30)。与文献[11-12]报道的熊果酸数据对比，确定化合物6为熊果酸。

化合物7淡黄绿色粉末(二甲基亚砜)。EI-MS (m/z): 302[M]+, 246, 190, 162。分子式为C14H6O8。1H-NMR (500 MHz, C5D5N+DMSO-d6): 7.74(2H, s, H-5, 5′)。13C-NMR (125 MHz, C5D5N+ DMSO-d6)：107.7(C-1, 1′), 140.2(C-2, 2′), 136.6(C-3, 3′), 148.9(C-4, 4′), 110.6(C-5, 5′), 112.5(C-6, 6′), 159.5(C-7, 7′)。与文献[13]报道的鞣花酸数据对比，确定化合物7为鞣花酸。

化合物8黄绿色粉末(甲醇)。EI-MS (m/z): 180[M]+, 163[M-OH]+, 134。分子式为C9H8O4。1H-NMR (800 MHz, CD3OD): 7.03(1H, d,J=2.4 Hz, H-2), 6.76(1H, d,J=8.0 Hz, H-5), 6.93(1H, d,J=8.0 Hz, H-6), 7.52(1H, d,J=15.2 Hz, H-7), 6.21(1H, d,J=15.2 Hz, H-8)。13C-NMR (200 MHz, CD3OD): 127.8(C-1), 115.5(C-2), 147.0(C-3), 149.5(C-4), 116.5(C-5), 122.8(C-6), 146.8(C-7), 115.1(C-8), 171.0(C-9)。与文献[14]报道的咖啡酸数据对比，确定化合物8为咖啡酸。

化合物9白色粉末(甲醇)。溴甲酚绿反应阳性，与原儿茶酸对照品共硅胶薄层色谱检识，分别在二氯甲烷-甲醇-甲酸(20∶1∶0.2，体积比，余同)、正己烷-乙酸乙酯-甲酸(1∶1∶0.2)、二氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶1∶0.2)3种溶剂系统中展开，二者Rf值相同，确定化合物9为原儿茶酸。

化合物10白色粉末(甲醇)。EI-MS (m/z): 168[M]+, 153, 125, 97。分子式为C8H8O4。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 7.54(1H, d,J=2.0 Hz, H-2), 6.82(1H, d,J=8.7 Hz, H-5), 7.55(1H, dd,J=8.7, 2.0 Hz, H-6), 3.88(3H, s, 3-OCH3)。13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 123.0(C-1), 115.8(C-2), 148.6(C-3), 152.7(C-4), 113.7(C-5), 125.3(C-6), 170.0(C-7), 56.4(C-8)。与文献[15]报道的香草酸数据对比，确定化合物10为香草酸。

化合物11黄色粉末(甲醇)。EI-MS (m/z): 302[M]+, 273, 229, 137。分子式为C15H10O7。1H-NMR (500 MHz, CD3OD): 6.18(1H, d,J=2.0 Hz, H-6), 6.38(1H, d,J=2.0 Hz, H-8), 7.73(1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 6.88(1H, d,J=8.5 Hz, H-5′), 7.63(1H, dd,J=8.5, 2.1 Hz, H-6′)。13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 158.2(C-2), 137.3(C-3), 177.4(C-4), 148.8(C-5), 99.2(C-6), 165.6(C-7), 94.4(C-8), 162.5(C-9), 104.5(C-10), 124.1(C-1′), 116.0(C-2′), 146.2(C-3′), 148.0(C-4′), 116.2(C-5′), 121.6(C-6′)。与文献[16-17]报道的槲皮素数据对比，确定化合物11为槲皮素。

化合物12白色粉末(甲醇)。EI-MS (m/z): 290[M]+, 152, 139, 123。 分子式C15H14O6。1H-NMR (800 MHz, CD3OD): 2.73(1H, dd,J=2.4, 16.0 Hz, H-4a), 2.85(1H, dd,J=4.0, 16.0 Hz, H-4b), 4.17(1H, m, H-3), 4.81(1H, brs, H-2), 5.91(1H, d,J=2.4 Hz, H-6), 5.93(1H, d,J=2.4 Hz, H-8), 6.74(1H, d,J=8.0 Hz, H-5′), 6.78 (1H, dd,J=1.6, 8.0 Hz, H-6′), 6.96(1H, d,J=1.6 Hz, H-2′)。13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 80.0(C-2), 67.5(C-3), 29.3(C-4), 158.0(C-5), 96.4(C-6), 157.7(C-7), 95.9(C-8), 157.4(C-9), 100.1(C-10), 132.3(C-1′), 115.9(C-2′), 145.9(C-3′),145.8(C-4′),115.3(C-5′), 119.4(C-6′)。与文献[18]报道的表儿茶素数据对比，确定化合物12为表儿茶素。

化合物13浅黄色粉末(甲醇)。盐酸-镁粉反应阳性。EI-MS (m/z): 271[M+1]+, 270[M]+, 242, 153, 152, 118。分子式C15H10O5。1H-NMR(500 MHz, CD3OD): 7.78(2H, d,J=8.8 Hz, H-2′, 6′), 6.92(2H, d,J=8.8 Hz, H-3′, 5′), 6.51(1H, s, H-3), 6.23(1H, d,J=2.1 Hz, H-6), 6.42(1H, d,J=2.1 Hz, H-8)。13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 165.0(C-2), 103.6(C-3), 183.3(C-4), 162.3(C-5), 99.9(C-6), 165.6(C-7), 94.9(C-8), 158.7(C-9), 105.2(C-10), 122.8(C-1′), 128.9(C-2′,6′), 116.6(C-3′,5′), 161.7(C-4′)。与文献[19]报道的芹菜素数据对比, 确定化合物13为芹菜素。

化合物14黄色针晶(甲醇)。m.p. 273～276 ℃。盐酸-镁粉反应呈紫红色，与山奈酚对照品共硅胶薄层色谱检识，分别在环己烷-乙酸乙酯-甲酸(2∶1∶0.2)、二氯甲烷-甲醇-甲酸(10∶1∶0.2)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(3∶1∶0.2)3种溶剂系统展开，二者Rf值相同；且二者混合熔点不下降。确定化合物14为山奈酚。

化合物15黄色粉末(甲醇)，加热溶于水。m.p. 176～179 ℃。盐酸-镁粉反应呈紫红色，与芦丁对照品硅胶薄层色谱检识，分别在甲醇-水(8∶1)、二氯甲烷-甲醇-甲酸(2∶1∶0.1)、乙酸乙酯-甲醇-甲酸(5∶1∶0.1)3种溶剂系统展开，二者Rf值相同；且二者混合熔点不下降。确定化合物15为芦丁。

化合物16白色结晶(甲醇)。EI-MS (m/z): 165[M+1]+, 147[M-OH]+, 73, 60。分子式为C6H12O5。1H-NMR(500 MHz, CD3OD): 4.99 (1H, d,J=5.5 Hz, H-1), 3.78(2H, m, H-2, 5), 3.71(1H, dd,J=5.4, 5.6 Hz, H-3), 3.35(1H, m, H-4), 1.64(3H, d,J=6.5 Hz, CH3)。13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 95.8(C-1), 74.2(C-2), 73.0(C-3), 72.1(C-4), 69.3(C-5), 18.1(C-6)。与文献[20]报道的鼠李糖数据对比，确定化合物16为鼠李糖。

化合物17白色粉末(吡啶)。EI-MS (m/z): 403[M+1]+, 402[M]+, 387, 344, 197。分子式为 C21H22O8。1H-NMR(500 MHz, C5D5N): 7.77(1H, dd,J=2.0, 8.5 Hz, H-6′), 7.56(1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 7.06(1H, d,J=8.9 Hz, H-5′), 7.02(1H, s, H-3), 4.12(3H, s, 5-OCH3), 4.09(3H, s,6-OCH3), 4.05(3H, s, 7-OCH3), 3.95(3H, s, 8-OCH3), 3.88(3H, s,3′-OCH3), 3.81(3H, s, 4′-OCH3)。13C-NMR (125 MHz, CD3OD): 161.3(C-2), 107.4(C-3), 176.7(C-4), 144.6(C-5), 138.7(C-6), 151.8(C-7), 148.8(C-8), 148.1(C-9), 115.7(C-10), 124.4(C-1′), 109.6(C-2′), 149.5(C-3′), 152.8(C-4′), 112.2(C-5′), 120.1(C-6′), 56.0(3′-OCH3), 56.0(4′-OCH3), 62.5(5-OCH3), 62.0(6-OCH3), 61.9(7-OCH3), 61.7(8-OCH3)。与文献[21]报道的川陈皮素数据对比, 确定化合物17为川陈皮素。