癫痫患者血清BAFF表达及与IFN-γ、IL-10水平的相关性

景燕 艾山江·玉苏甫江 陆明佳

癫痫(epilepsy)属于神经系统疾病，是由多种病因引起的慢性脑功能失调综合疾病，表现特征为脑神经元异常放电导致反复、发作性和短暂性的中枢神经系统功能失常，在各年龄段、不同地域及种族人群中均有发病[1]。癫痫发病率与年龄有关，据报道，发病率最高的时期是婴儿时期，随着人口老龄化进程的加快，成人尤其老年人癫痫疾病的发病率开始逐渐增高，严重影响患者的生存质量[2]。研究表明免疫功能紊乱以及炎性反应与癫痫疾病发病、发展有关[3]。B细胞活化因子(B-cell activating factor of TNF family，BAFF)、干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)、白介素-10(interleukin-10，IL-10)都是与免疫功能有关的炎性因子。本研究通过检测癫痫患者血清中BAFF、IFN-γ及IL-10的表达情况，探讨癫痫患者血清中BAFF与IFN-γ、IL-10表达的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年7月至2018年10月在我院就诊的74例癫痫患者为观察组，其中男42例，女32例；年龄18～72岁，平均年龄(41.02±15.30)岁；病程0.5～5年，平均病程(2.20±1.61)年。选取同期在我院体检中心参与体检的健康者45例为对照组，其中男25例，女20例；年龄18～70岁，平均年龄(40.86±15.52)岁。根据癫痫患者发作频率及发作平均持续时间将癫痫患者分为癫痫频发19例，持续状态24例；非癫痫频发或持续状态31例。根据2007年中华医学会制定的《临床诊疗指南·癫痫病分册》[1]对癫痫患者进行分类，全面性癫痫21例，局灶性癫痫28例，症状性癫痫25例。2组患者性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准：①符合国际抗癫痫联盟对于癫痫疾病的诊断标准[4]；②经临床特征、病史、脑电图等检查确诊；③患者家人均知情，并经患者签订知情同意书。

1.2.2 排除标准：①颅脑损伤、脑梗死、脑出血、中枢神经系统异常等引起的继发性癫痫；②感染性疾病患者；③恶性肿瘤患者；④资料不全者。

1.3 主要试剂与仪器 一次性自动采血器购自武汉致远医疗科技公司，BAFF酶联免疫试剂购自上海钰博生物科技公司，IFN-γ酶联免疫试剂盒购自赛默飞世尔科技公司，IL-10酶联免疫试剂购自赛默飞世尔科技公司，多功能酶标仪购自美国Bio-Rad公司。

1.4 方法

1.4.1 样本采集与保存:观察组患者于癫痫发作后12 h内采集空腹时静脉血5 ml于生化管中，对照组于体检当天清晨空腹时采集静脉血5 ml，均静置30 min，在4℃离心机(3 000 r/min)上离心10 min后取上清，置于-20℃冰箱保存待测。

1.4.2 受试者血清BAFF、IFN-γ、IL-10水平测定:采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测血清BAFF、IFN-γ、IL-10表达水平，其中血清BAFF水平测定使用BAFF酶联免疫试剂盒，血清IFN-γ水平检测采用IFN-γ ELISA试剂盒，血清IL-10水平测定采用IL-10 ELISA试剂盒，操作严格按照试剂盒说明书进行。为减小误差，待测样品均重复测定3次。

2 结果

2.1 2组患者一般资料情况 2组患者年龄、性别比、体重指数、糖尿病、高血压、高血脂等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 2组患者一般资料情况

2.2 2组患者血清IFN-γ、IL-10及BAFF水平比较 观察组血清IFN-γ、IL-10及BAFF表达水平显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

组别BAFF(ng/ml)IFN-γ(pg/ml)IL-10(pg/ml)观察组(n=74)9.05±2.2638.45±8.0445.36±11.65对照组(n=45)3.96±0.9815.58±4.3722.74±5.30t值14.29517.55112.261P值<0.001<0.001<0.001

2.3 不同病情癫痫患者血清BAFF、IFN-γ、IL-10表达水平比较 癫痫频发、处于持续状态患者血清BAFF、IFN-γ、IL-10表达水平显著高于非癫痫频发或持续状态患者(P<0.05)；癫痫频发、处于持续状态患者血清BAFF、IFN-γ、IL-10表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

类别BAFF(ng/ml)IFN-γ(pg/ml)IL-10(pg/ml)癫痫频发(n=19)11.24±3.10∗39.75±7.15∗48.34±9.84∗持续状态(n=24)10.36±3.26∗40.28±8.00∗46.85±9.35∗非癫痫频发或持续状态(n=31)7.48±2.0335.42±6.7242.06±7.47 F值13.1683.6803.651 P值<0.0010.0300.031

注：与非癫痫频发或持续状态比较，*P<0.05

2.4 不同类型癫痫患者血清IFN-γ、IL-10及BAFF水平比较 不同类型癫痫患者血清IFN-γ、IL-10及BAFF表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

组别BAFF(ng/ml)IFN-γ(pg/ml)IL-10(pg/ml)全面性癫痫(n=21)8.64±2.7239.88±9.4342.81±9.58局灶性癫痫(n=28)9.35±2.0638.71±6.2844.93±8.76症状性癫痫(n=25)9.06±2.4537.01±7.7147.96±10.63F值0.5280.8041.666P值0.5920.4520.196

2.5 癫痫患者血清BAFF水平与血清IFN-γ、IL-10水平的相关性 癫痫患者血清BAFF水平均与血清IFN-γ、IL-10水平呈正相关(r=0.631，P<0.05；r=0.535，P<0.05)。见图1、2。

2.6 癫痫患者血清IFN-γ与IL-10水平的相关性 癫痫患者血清IFN-γ和IL-10表达水平呈正相关(r=0.529，P<0.05)。见图3。

图1 癫痫患者血清BAFF与IFN-γ的相关性分析图2 癫痫患者血清BAFF与IL-10的相关性分析图3 癫痫患者血清IFN-γ和IL-10的相关性分析

3 讨论

癫痫是一种常见的脑部疾患，属于神经系统疾病，患者主要临床表现为意识丧失，肌张力强直，强直阵挛发作，复杂视幻觉及不同程度的运动、感觉、神经、精神等方面障碍，具有突发性、一时性和反复性[5]。资料显示，全球癫痫患者约有5 000万，我国癫痫患者约占有600万，发病率约为4.6%。癫痫病因复杂多样，一般认为遗传代谢性疾病、脑部结构性病变、颅脑外伤、脑肿瘤、中枢神经系统感染等因素是癫痫发病的主要原因，但具体机制不明确[6]，因此寻找新的生物标志物来反映癫痫的疾病进程，对治疗癫痫患者具有重要意义。癫痫发作对脑功能的伤害严重影响患者的身体健康。研究表明免疫功能紊乱是癫痫发病的病因，且其发病过程与炎性反应有关，BAFF、IFN-γ、IL-10是与免疫功能有关的炎性因子，其代谢异常能够使神经系统发生紊乱，可能参与癫痫的疾病进程[7]。

BAFF是肿瘤坏死因子超家族(TNF家族)成员之一，可由T细胞、树突状细胞及单核细胞产生，是对B细胞成熟、分化至关重要的关键细胞因子，与自身免疫系统功能密切相关。BAFF可参与调节T细胞的多种免疫反应，在小鼠在自身免疫疾病模型中BAFF可通过诱导B细胞分泌OPN调节T细胞存活[8]。张亚敏等[9]研究表明BAFF是自身免疫疾病—系统性红斑狼疮的致病因素，能够通过促进抑制性细胞因子IL-35表达，发挥负向免疫调节效应。本研究显示癫痫患者血清中BAFF表达水平显著高于对照组，提示BAFF水平上调可能参与癫痫发生。

IFN-γ由活化T细胞和自然杀伤细胞产生，具有免疫调节、抗肿瘤、及促进I型辅助T细胞分化作用。Gao等[10]研究表明癫痫患者血浆中IFN-γ的水平在癫痫发作后和发作间期显著高于正常人，且血浆中IFN-γ水平与国家医院癫痫发作严重程度评分(NHS3)评分和癫痫发作频率呈正相关，说明IFN-γ可预测癫痫发作的严重程度。Mazdeh等[11]研究表明癫痫患者IFN-γmRNA表达水平比正常人IFN-γ表达水平高，且与IL-2，IL-4等其他促炎细胞因子和抗炎细胞因子水平有关，说明IFN-γ的异常表达可能与癫痫的发病机制有关。本研究结果显示癫痫患者血清中IFN-γ表达水平高于对照组，表明癫痫患者体内存在较强的炎性反应，提示炎性反应可能与癫痫发病有关。

IL-10由活化B细胞和巨噬细胞等产生，是一种抗炎性因子，参与免疫细胞、炎症细胞、肿瘤细胞的生物调节，在自身免疫性疾病、感染性疾病及肿瘤等多种疾病中有重要作用。何小群等[12]研究表明PTZ模型癫痫大鼠海马组织中IL-10mRNA的表达水平高于对照组，用铁皮石斛多糖处理癫痫大鼠后可通过下调IL-10表达，降低大鼠海马组织炎性反应，减轻癫痫发作。本研究结果显示癫痫患者血清中IL-10表达水平显著高于对照组，提示IL-10水平上调可能与癫痫免疫机制相关的炎性反应有关，参与癫痫疾病的发生。

杨洁等[13]研究表明儿童癫痫患者IL-10高表达的T淋巴细胞数目高于健康对照儿童，且T淋巴细胞中IFN-γ表达水平上调，说明癫痫患者T淋巴细胞活化能够产生IFN-γ等炎细胞因子。Gui等[14]研究表明IFN-γ等炎性因子能够增强BAFF刺激的细胞存活。调节IFN-γ等炎性因子水平，可能是预防BAFF诱导的恶性肿瘤的新方法。den Hartog等[15]研究表明外周和粘膜组织中BAFF能够增强TLR7/8和TLR9B刺激成熟B细胞产生IL-10的能力。研究表示，癫痫发作频率及发作持续时间对病情的评估有重要意义，癫痫发作越频繁、发作平均持续时间越久，说明患者病情越严重[16]。本研究结果显示癫痫频发、癫痫处于持续状态患者血清BAFF、IFN-γ、IL-10表达水平均显著高于非癫痫频发或持续状态患者，提示癫痫患者血清中BAFF、IFN-γ、IL-10表达水平可能与癫痫疾病病情严重程度有关，患者血清中BAFF、IFN-γ、IL-10表达水平越高，癫痫病情越严重。进一步分析显示癫痫患者血清BAFF表达水平与IFN-γ、IL-10水平呈正相关，提示BAFF可能通过调节IFN-γ、IL-10等炎性相关因子表达，影响机体炎性反应，参与癫痫的发病过程。

综上所述，BAFF、IFN-γ、IL-10在癫痫患者血清中明显上调，BAFF水平与IFN-γ、IL-10水平正相关，提示BAFF可能通过调节IFN-γ、IL-10等炎性反应因子表达，参与癫痫疾病发生发展。然而，本研究仅初步探究癫痫患者血清中BAFF表达与IFN-γ、IL-10水平的相关性，具体生物学调节机制仍未明确，需进一步深入研究。另外，本研究样本数量较少，下一步准备扩大样本容量继续进行深入研究，以期为癫痫患者的临床治疗提供一定参考依据。