圈养林麝产麝香中麝香酮含量测定分析△

郑程莉，蒋桂梅，吴杰，王建明，陈凤，冯达勇，竭航，赵贵军，周磊，王欢*

1.四川养麝研究所，四川 成都 611845；2.重庆市药物种植研究所，重庆 408435

麝香Moschus是麝科动物林麝MoschusberezovskiiFlerov、马麝M.sifanicusPrzewalski和原麝M.moschiferusLinnaeu等雄性个体香囊的干燥分泌物，香气芳烈，是我国传统中药。我国应用麝香防治疾病已有2000多年历史。汉代的《神农本草经》对其就有详细记述，并列为“上品”。《中华人民共和国药典》(以下简称《中国药典》)2020年版中记载，麝香具有开窍醒神、活血通经、消肿止痛的功效[1]。研究表明，麝香有抗炎[2-3]、抗肿瘤[4-5]的作用，并对中枢神经系统[6]、心脑血管系统[7]等均有显著的影响。

麝香酮是天然麝香重要的活性成分[8]，《中国药典》2020年版已明确规定将麝香酮作为麝香质量控制指标。天然麝香中麝香酮含量的研究较多集中在测定方法上[9-11]，对于麝香产量与麝香酮含量的分析尚未见相关文献报道。随着人工养殖林麝规模的不断扩大，天然麝香的产量逐年提高，为珍贵动物药麝香提供了重要的来源。同时，人们对林麝的产香规律有了初步的认识[12]，发现林麝的年麝香产量差异较大，但未有相关文献对麝香的形态及色泽进行研究，无法直接判定哪种麝香属于优质麝香。本研究采用气相色谱法(GC)对不同年龄阶段林麝所产麝香中的麝香酮含量进行测定，分析林麝年龄、麝香色泽与麝香酮含量的相关性，为天然麝香质量快速评价体系的建立及林麝的高产品系选育提供参考。

1 材料

1.1 试药

选取四川养麝研究所马尔康养獐场同一个饲养员人工饲喂的公麝麝香样品72个，具体信息见表1，于2018年9月统一取香。为避免取香遗漏造成的差异，均由同一个取香人员取香。二氯甲烷、乙醚、甲醇、乙醇、正己烷、苯均为分析纯(成都市科隆化学品有限公司)；对照品麝香酮(批号：110719-201716，纯度：99.9%，中国食品药品检定研究院)。

表1 麝香样品分类表

1.2 仪器

7890A型气相色谱仪(上海安捷伦科技有限公司)；BSA224S-CW型万分之一计量电子分析天平、0.01 mg计量电子分析天平(北京赛多利斯科学仪器公司)；80-2型电动离心机(金坛市华特实验仪器有限公司)。

2 方法

2.1 GC-MS条件与系统适用性试验

色谱柱型号为DB-17毛细管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)，以苯基(50%)甲基硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为2%；进样量1.0 μL，程序升温，起始温度为80 ℃，保持1 min，25 ℃·min-1升温至200 ℃，保持8 min；进样口温度为230 ℃，检测器温度为260 ℃，进样口总流速为34.5 mL·min-1，色谱柱流速为1.5 mL·min-1，分流比为20∶1，理论板数按麝香酮峰计算应不低于1500。

2.2 对照品溶液制备

取麝香酮对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成1.5 mg·mL-1溶液，即得。

2.3 供试品溶液制备

取麝香样品约1 g，精密称定，置五氧化二磷干燥器中，减压干燥至恒定质量，计算麝香样品水分含量。取干燥品约0.2 g，精密称定，精密加入无水乙醇2 mL，密塞，振摇，放置1 h，滤过，取续滤液，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1系统适用性 参考文献方法[13]，测得的麝香酮气相色谱图见图1。样品图谱中麝香酮保留时间为10 min，色谱峰对称性较好，有效分离，理论峰面积达1500以上，表明方法可行。

注：A.对照品；B.麝香样品(22)。图1 麝香酮GC图谱

2.4.2线性关系 按照2.1项下色谱条件测定，以麝香酮进样量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，其线性方程为Y=982.2X+8.410(r=0.997)，结果表明，麝香酮进样量在0.107 9～13.816 5 μg与峰面积线性关系良好。

2.4.3精密度试验 取对照品溶液1 μL，按2.1项下色谱条件测定，连续进样6次，结果峰面积RSD为0.57%，表明仪器精密度良好。

2.4.4重复性试验 对同一个林麝的麝香样品(22)进行5次独立测定，麝香酮的平均质量分数为2.11%，RSD为1.55%，表明方法重复性良好。

2.4.5稳定性试验 取同一个林麝的麝香样品(22)，依法分别于0、4、8、12 h测定，RSD为1.93%，表明样品在12 h内稳定性良好。

2.5 样品测定

分别精密吸取对照品溶液与供试品各2 μL，注入气相色谱仪，测定，即得。

2.6 数据分析

3 结果

3.1 不同年龄阶段林麝产麝香中麝香酮含量

在人工养殖条件下，雄麝于1岁龄便发生初次泌香反应，且1～7岁龄为泌香高峰期。72头存栏林麝按照年龄分组，每个林麝个体的麝香产量见表1，麝香酮分析结果见表2。

表2 不同年龄阶段林麝的麝香产量、麝香酮及水分含量

通过分析不同年龄林麝的产香量，发现差异无统计学意义。对其含水量进行测定，发现1岁龄林麝所产麝香的含水量最低，8岁及以上林麝所产麝香含水量最高，与1岁龄林麝所产麝香含水量比较差异有统计学意义(P<0.05)。通过扣除新鲜麝香样品中的水分，得到绝干麝香物质，即麝香净质量。对比分析发现，2岁龄林麝的麝香净质量最高，并且显著高于8岁及以上林麝(P<0.01)。对麝香酮含量进行对比分析发现，1岁龄林麝产麝香中麝香酮含量高于2岁及以上年龄林麝(P<0.01)，2岁龄林麝产麝香中麝香酮含量显著高于8岁及以上林麝(P<0.05)。

3.2 同一年龄阶段林麝不同麝香产量与麝香酮含量

根据现场取香称取结果，发现第2年泌香的林麝麝香产量差异较大，其中，最高产量可达20.75 g，最低产量为4.56 g，差值可达16.19 g。根据取香样本记录，将第2年泌香的林麝的麝香产量分为3组，10 g以下为第1组，10～15 g为第2组，15 g以上为第3组，分析其麝香酮含量，统计结果见表3。

从表3可以看出，同一年龄阶段林麝根据麝香产量分组，各组之间的麝香产量差异有统计学意义，但麝香净质量却未表现出相应的规律，产量在10 g以下的麝香净质量显著低于10 g以上的麝香，但是产量在10～15 g的麝香净质量与产量高于15 g的麝香净质量差异无统计学意义。产量在10 g以下的麝香中麝香酮质量分数显著低于10 g以上个体(P<0.05)，表明产量>10 g的麝香品质较高。

表3 不同产量麝香中麝香酮及水分含量

3.3 不同色泽麝香中麝香酮含量

通过比色卡比对，对现场采集的新鲜麝香进行了颜色区分，新鲜麝香颜色主要分为黑色、棕褐色、深棕色、红棕色和白色(见图2)。由于新产出的麝香形态色泽各异，为了探究新鲜麝香颜色与其麝香酮含量之间的相关性，选取每种颜色中具有明显区别的麝香样品，分析其麝香酮及水分含量与麝香色泽的关系，结果见表4。

表4 不同色泽麝香中麝香酮及水分含量 %

图2 圈养林麝所产麝香色泽

结果表明，红棕色麝香中麝香酮含量最高。白色麝香中麝香酮含量最低，与其他颜色麝香差异有统计学意义(P<0.01)。麝香水分含量测定结果显示，棕褐色麝香水分含量最高，白色的麝香水分含量最低，并且黑色和棕褐色麝香的含水量与白色麝香比较，差异有统计学意义(P<0.01)。黑色麝香的含水量显著高于红棕色麝香(P<0.05)，同时，棕褐色麝香的含水量显著高于深棕色和红棕色的麝香(P<0.05)。

4 讨论

4.1 不同年龄林麝产麝香中麝香酮含量分析

生产中，每头林麝的麝香产量具有随机性。在本研究中，分别对不同年龄段林麝的麝香产量以及所产麝香的含水量和麝香酮含量进行了比较分析。结果显示，在麝香净产量上，2岁龄的林麝麝香净产量最高，随年龄增长，麝香净产量逐渐减低，8岁及以上年龄段的林麝麝香净产量最低，1～6岁的林麝所产麝香的平均净产量差异不大，与程建国等[14]研究4.5岁龄达到产香最高峰值的结果存在一定的差异。对麝香中含水量的测定结果显示，1岁龄林麝产的麝香与2岁龄林麝产麝香的含水量之间差异无统计学意义，但是皆显著低于8岁及以上的老年麝所产的麝香水分含量，除此之外不同年龄段林麝所产麝香水分含量之间差异无统计学意义。对测定的麝香酮含量进行分析，结果显示，1岁龄林麝产的麝香中麝香酮含量最高，显著高于2岁及以上林麝所产麝香，2～7岁林麝所产麝香的平均麝香酮含量差异不大，8岁及以上的老年麝所产的麝香的麝香酮含量最低。表明初产林麝麝香质量最优，其后2～7岁林麝产香状况平稳，及至8岁龄，林麝产香质量明显变差。

麝香为雄性林麝分泌物，泌香机制极为复杂，研究不同年龄段林麝对其麝香产量与质量影响，对指导林麝养殖、提高麝香质量具有重要的意义。

4.2 同年龄不同产麝香量的林麝产麝香中麝香酮含量分析

对同一年龄阶段的鲜麝香进行分析，发现鲜麝香产量越高，其麝香净质量也越高，但麝香中的水分含量与鲜麝香的质量没有相关性，鲜麝香产量大于10 g的个体，麝香酮质量分数>2.0%，麝香品质较高。根据现有结论，麝香高产量与高品质是否具有遗传性，还有待在生产中进行选育实践。

4.3 麝香色泽与麝香酮含量的相关性分析

麝香是雄麝特有的麝香腺囊的分泌物，不同个体，甚至同一个体雄麝麝香腺囊所分泌形成的麝香形态不一。《中国药典》2020年版把麝香的性状分为毛壳麝香和麝香仁。麝香仁质软，在人工饲养条件下呈颗粒状、短条形或不规则的团块；表面不平，紫黑色或深棕色，显油性，微有光泽，并有少量毛和脱落的内层皮膜[1]。根据多年现场取香经验，麝香形态色泽各异，由深到浅主要分为黑色、棕褐色、深棕色、红棕色和白色，对造成麝香不同颜色的原因，还有待进一步分析。

目前，麝香酮含量是检验麝香质量合格与否的标准，为此，本实验测定了不同色泽新鲜麝香的麝香酮含量，并进行比较分析，以期找到麝香色泽与麝香酮含量之间的联系。分析结果显示，林麝所产白色的麝香中麝香酮含量最低，且麝香酮含量显著低于其他4种颜色的麝香。在其他4种颜色的麝香中，红棕色的麝香麝香酮含量最高，其次为深棕色、黑色和棕褐色。

同时，对不同颜色新鲜麝香的含水量进行测定分析，发现白色麝香的水分含量最低，棕褐色麝香水分含量最高。红棕色麝香的麝香酮含量最高，水分含量也较低，可认为红棕色的麝香是品质最高的麝香。

根据以上结果可以判定，初产麝香的质量和产量高于10 g的麝香品质较高，并且红棕色的麝香为优质麝香。