EGFR、VEGF 和Ki67在食管癌中的表达及其临床意义

刘 昊，黄 莹，江海峰，苗 雨，阮继刚

食管癌是最常见的恶性肿瘤之一。据世界卫生组织国际癌症研究署发布的最新癌症统计报告数据显示，食管癌的发病率和死亡率逐年增加，居发病率的第8位、死亡率的第6位，而我国的食管癌约占全世界的50%，其发病率居第3位，死亡率居第4位，且存在地域差异性[1-3]。表皮生长因子受体(EGFR)通过膜表面传感器调控细胞的增殖、侵袭以及血管生成，过度激活可致细胞异常增长，发生癌变[4- 5]。血管内皮生长因子(VEGF)对肿瘤细胞的生长、转移起着重要作用[6]。Ki67 即细胞核相关抗原，与多种肿瘤的发生、发展、分期、浸润和转移、复发及预后等多方面均存在性相关[7-9]。本研究采用免疫组化方法检测食管癌及癌旁正常组织中EGFR、VEGF 和Ki67的表达情况，分析其与食管癌病理类型、浸润深度之间的关系，并探讨三者联合检验的临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料：收集宁夏医科大学总医院2015年1月-2018年12月经病理诊断确诊的食管癌手术病理标本104例，病理类型为鳞状细胞癌。分化程度:高分化33例，中分化31例，低分化40例;浸润深度：侵及达固有肌层者(T1-T2)54例，侵及外膜层至邻近结构者(T3-T4)50例;淋巴结转移:发生淋巴结转移者39例，未发生淋巴结转移者65例；远处转移：发生远处转移者15例，未发生远处转移者89例。所有患者均为首次就诊，未进行过放疗、化疗及其他特殊治疗。收集资料均含有完整的临床资料，包括病人的分化程度、浸润深度、淋巴结转及远处转移情况。排除心、肝、脑、肾等其他疾病。

1.2 实验方法:免疫组织化学取术后食管癌组织及癌旁正常食管组织石蜡切片。采用Dako Link Omnis 染色系统，以常规SP免疫组化染色法完成其免疫组化检测。

1.3 结果判读:染色结果按照双盲法阅片判断。在不了解患者的临床资料的情况下，由两位病理医师对免疫组化染色结果进行评估，根据肿瘤细胞染色程度以及阳性细胞所占百分比进行综合评分。

1.3.1 阳性判读方法：EGFR染色表达主要定位于细胞膜和细胞质内，棕黄色颗粒为阳性细胞；VEGF染色表达主要定位细胞膜及细胞浆，以胞质呈棕黄色为阳性细胞；Ki67染色表达定位于细胞核，呈棕黄色颗粒为阳性细胞。

1.3.2 镜下病理评分：颜色深浅0～3分，淡蓝色为0分，浅黄色为1 分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞数量< 25%为1分，25%～50%为2分，>50%为3分。两者乘积≤2分为阴性，2～4分(+)，5～8分为(++)，>9分为(+++)。阳性细胞百分比分为4级：强阳性(+++，>50%)，阳性(++，25%～50%)，弱阳性(+，10%～25%)，阴性(-，<10%)。

2 结果

2.1 EGFR、VEGF、Ki67在食管癌组织及癌旁组织中的表达:食管癌患者癌组织标本中EGFR、VEGF、Ki67表达阳性率均高于癌旁正常食管黏膜组织标本，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 EGFR、VEGF、Ki67在食管癌患者中表达水平

2.2 食管癌患者EGFR、VEGF、Ki67表达水平与病理参数的关系:食管癌患者EGFR表达水平与淋巴结转移、远处转移无关(P>0.05)，而与分化程度、浸润深度有关(P<0.05) ；VEGF 表达水平与远处转移无关(P>0.05)，而与分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05) ；Ki67表达水平与远处转移、分化程度、浸润深度、淋巴结转移无关(P>0.05)，见表2-表4。

表2 食管癌患者EGFR表达水平与病理参数的关系[n(%)]

表3 食管癌患者VEGF表达水平与病理参数的关系[n(%)]

表4 食管癌患者Ki67表达水平与病理参数的关系[n(%)]

2.3 食管癌组织中EGFR、VEGF、Ki67蛋白表达之间的关系:食管癌患者癌组织EGFR表达阳性率与VEGF表达阳性率呈正相关(P<0.05)，EGFR表达阳性率与Ki67表达阳性率呈正相关(P<0.05)，VEGF表达阳性率与Ki67表达阳性率无相关性(P>0.05)，见表5。

表5 食管癌组织中EGFR、VEGF、Ki67蛋白表达之间的关系

3 讨论

EGFR作为原癌基因Cerb-1的表达产物之一而普遍存在于人体内，在多种内外致癌因子共同作用下，EGFR与相应配体结合，激活下游信号传导通路，使得细胞异常增生，从而导致肿瘤的发生。Jiang D等[10]研究发现EGFR在食管癌患者中普遍高表达，阳性率为40%～80%，与肿瘤的增殖、浸润、转移均密切相关，提示 EGFR 可能参与食管癌的发生发展过程。本研究中，104例患者的食管癌组织中EGFR的阳性表达率为86.54%，高于癌旁组织的62.50%，两者有显著差异，与有关[11]研究结果相似。本研究发现食管癌组织中EGFR的表达与分化程度及浸润深度有关，随食管癌恶性程度增加，T分期越高，EGFR蛋白表达的阳性率也随之增加，提示EGFR有促进食管癌的生长作用。但本研究中EGFR与淋巴结转移无明确统计学意义，考虑所选择样本中食管癌合并淋巴结转移的患者与无淋巴转移的患者病例数相当，因此所获取结果可能与样本的选择偏倚有关，具体原因需进一步研究。

VEGF作为血小板源性生长因子家族成员，可调节内皮细胞的分裂和增殖，并作为重要的血管内皮生长刺激因子参与肿瘤血管的形成过程。在恶性肿瘤细胞中VEGF呈高度表达，并且其与肿瘤的侵袭性转移和预后密切相关[12-13]。本研究结果显示，VEGF在104例患者的食管癌组织中的阳性表达率为88.46%，显著高于癌旁组织，与孙文泽等[14]报道的研究结果一致。此外，研究还发现VEGF的高表达与肿瘤的分化程度、浸润深度及淋巴结转移关系密切，考虑一方面VEGF可以促进血管内皮细胞的迁移与增殖，并诱导肿瘤血管的新生，为肿瘤细胞的增殖提供所需的营养物质；另一方面肿瘤细胞为了进一步增殖，需分泌更高水平的VEGF，因此，在低分化、有淋巴结转移等恶性程度较高的食管癌患者中VEGF的表达水平均较高[15]。

Ki67是反映细胞增殖活性的指标，其表达高低提示细胞增殖状态，指标越高，肿瘤细胞生长活跃[16]。本研究结果显示，104例患者的食管癌组织中Ki67的表达率为86.54%，癌旁组织中的表达率为75%，两者有统计学差异，表明Ki67的高表达与食管癌相关。但本研究中Ki67表达水平与远处转移、分化程度、浸润深度、淋巴结转移无关，与国内外研究有一定差异，一方面考虑其特异性不高，另一方面与样本量及地域性差异有关，后续还需扩大样本量进一步研究。

本组结果显示，食管癌组织中EGFR的表达阳性率与VEGF的表达阳性率呈正相关，EGFR表达阳性率与Ki67表达阳性率呈正相关，考虑三种蛋白在食管癌的发生发展过程中具有协同促进作用，联合检测EGFR、VEGF、Ki67蛋白的表达，可以作为筛选食管癌高危个体的生物学指标。考虑到EGEF与VEGF二者的过表达均与食管癌的浸润深度和分化程度呈正相关，这可能与食管癌的发展与演变密切相关，因此二者的联合检测对进展期食管癌的预后判断有重要意义。其中EGFR与Ki67均与肿瘤细胞增殖有关，且多项研究发现EGFR为细胞信号传导的上游因子，由此推测的EGFR过表达可能先于Ki67，并对Ki67的表达有正向调节作用。