ARID1a和错配修复蛋白HMLH1在子宫内膜样腺癌中的表达及意义

肖红燕，虎明明，樊学敏

子宫内膜癌是发生在子宫内膜的一组上皮恶性肿瘤，好发于绝经期、绝经后女性中[1]。随着生活水平的提高及外用保健品的服用，使得子宫内膜癌的发生率逐渐升高，已成为仅次于宫颈癌的第二类女性生殖道肿瘤[2]。目前，临床上对于子宫内膜癌病因及发生机制尚未明确。ARID1a又被称为BRG1相关因子250a(BAF250a)，是近年来发现的一种抑癌基因，可以调节染色体的重塑功能[3]。约6%肿瘤中存在ARID1a突变，能直接参与肿瘤的发生、发展[4]。研究表明[5]：人类错配修复基因1(HMLH1)及其编码蛋白质是DNA错配修复(MMR)系统的重要成员之一，常协同在碱基错配修复过程中发挥解旋及切开错配碱基作用，可诱发肿瘤的发生。本研究以子宫内膜癌作为研究对象，探讨ARID1a和HMLH1蛋白在子宫内膜癌中的表达及意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2017年6月-2019年7月子宫内膜癌患者94例，所有患者均行手术治疗，取病灶组织与癌旁组织(≥3 cm，包括正常子宫内膜及子宫内膜非典型增生)。患者年龄19～63岁，平均(46.89±5.71)岁；病程1～6个月，平均病程(3.29±0.64)个月；肿瘤直径1～6 cm，平均(3.49±0.61)cm；分化类型：低分化21例，中分化50例，高分化23例；肿瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期63例，Ⅲ-Ⅳ期31例；肌层浸润深度：仅侵及黏膜层39例，侵犯子宫肌层<1/2 28例，侵犯子宫肌层>1/2 27 例；肿瘤部位：宫角32例，宫底29例，宫腔21例，宫颈12例；淋巴结转移：有转移30例，无转移64例。

1.2 检测方法：采用免疫组织化学法测定不同病灶组织中ARID1a与HMLH1蛋白阳性率。一抗ARID1a兔抗人多克隆抗体购自ABCAM公司，HMLH1兔抗人多克隆抗体购自福州迈新生物技术有限公司。二抗为 Envision法免疫组化检测试剂盒，购自DAKO公司。实验分别设置阴性与阳性对照，检测组织中ARID1a和HMLH1表达情况。判断标准：ARID1a与HMLH1均核着色。免疫组化完毕后，在制备的切片中找出阳性细胞，显微镜下观察结构完整、清晰且定位较为明确的细胞；细胞核内呈棕黄色，且颜色明显高于背景[6]，判读为阳性。

2 结果

2.1 不同组织中ARID1a与HMLH1蛋白阳性率比较：ARID1a在正常子宫内膜、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌中表达率分别为80.85%、78.72%、40.34%表达率逐渐降低，缺失率逐渐升高，子宫内膜癌灶组织与癌旁组织(正常子宫内膜、子宫内膜非典型增生)表达差异有统计学意义(P<0.05)；正常子宫内膜与非典型增生子宫内膜差异无统计学意义(P>0.05)。HMLH1在正常子宫内膜、子宫内膜非典型增生、子宫内膜癌中表达率分别为94.68%、89.36%、68.09%，表达率逐渐降低，缺失率逐渐升高，癌灶与癌旁差异具有统计学意义(P<0.05)；正常子宫内膜组织与子宫内膜非典型增生HMLH1阳性率无统计学意义(P>0.05)，见表1与图1-图4(目录后)。

表1 不同组织中ARID1a与HMLH1蛋白阳性率[n(%)]

2.2 ARID1a、HMLH1蛋白与临床病理特征的关系:子宫内膜癌组织中ARID1a蛋白与分化类型相关，分化越低，ARID1a蛋白表达越低，差异具有统计学意义(P<0.05)；发生淋巴结转移ARID1a蛋白表达降低，差异具有统计学意义(P<0.05)；肿瘤分期越高，ARID1a蛋白表达越低，差异有统计学意义(P<0.05)；年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、肌层浸润深度差异均无统计学意义(P>0.05)。子宫内膜癌中HMLH1表达与分化类型相关，分化越低，HMLH1蛋白表达越低，差异具有统计学意义(P<0.05)；肿瘤分期越高，HMLH1蛋白表达越低，差异具有统计学意义(P<0.05)；年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、肌层浸润深度差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 ARID1a、HMLH1蛋白与子宫内膜癌临床病理特征的关系

3 讨论

子宫内膜癌是女性三大恶性生殖肿瘤之一，其组织学类型可分为Ⅰ型与Ⅱ型两种，而后者又包括：浆液性乳头状腺癌、透明细胞癌等[7]。本研究主要研究的是Ⅰ型散发性子宫内膜腺癌。子宫内膜癌的发生、发展是一个多因素过程，多与雌激素水平、年龄、遗传因素有关[8]。ARID1a基因在人体中分布较广，多位于1号染色体1p36.11区，编码酵母菌SWII的人类同源体，属于染色质重塑(SWI/SNF)复合物的整合成员[9]。而SWI/SNF复合体能发挥抑制或提高转录的作用，在基因的调节中具有重要作用。SWI/SNF复合体存在于诸多细胞中，能直接参与细胞的发生、分化、增殖[10]。ARID1a基因编码的蛋白BAF250是SWI/SNF复合体附属亚基，能保证基因的专属性。既往研究表明[11]ARID1a基因活性与组织特异性的基因表达、生长发育及性激素反应有关，该基因缺失则能引起生殖细胞停止发育，影响胚胎干细胞的潜能，抑制其更新。同时，ARID1a基因在部分肿瘤表达中缺失，且在子宫内膜癌中发生频率较高[12]。本研究中，正常组织与子宫内膜非典型增生ARID1a蛋白阳性率无统计学意义(P>0.05)，子宫内膜癌病灶组织中ARID1a蛋白阳性率明显低于非典型增生组织(P<0.05)；与子宫内膜样腺癌分化类型相关，分化越低，ARID1a表达越低，缺失率越高，差异有统计学意义(P<0.05)。说明ARID1a表达缺失在早期子宫内膜样腺癌就发生了，而且随着恶性程度的增加，缺失率越高。此外，本研究还显示淋巴结发生转移及肿瘤分期越高，ARID1a表达率越低，缺失越高，由此推测ARID1a表达的子宫内膜样腺癌预后可能要好于缺失的子宫内膜样腺癌，但这只是一个推测，还需要后续大样本的病例预后研究证实。

MMR系统最早于大肠杆菌中发现，主要依靠MutH、MutL等基因编码酶分子、矫正碱基发生的错配，能修复DNA复制期间发生的碱基错配，维持基因组的稳定[13]。研究表明，HMLH1蛋白在特异性识别、修复DNA复制过程中，能引起碱基错配，清除错误的不配对碱基，降低自身碱基。同时，HMLH1蛋白亦可防止基因突变，维持基因功能的稳定性[14]。本研究中，子宫内膜癌病灶组织中HMLH1蛋白阳性率低于癌旁组织(P<0.05)；癌旁组织中正常组织与子宫内膜非典型增生HMLH1蛋白阳性率无统计学意义(P>0.05)，与子宫内膜样腺癌分化类型相关，分化越低，HMLH1表达越低，缺失率越高，差异有统计学意义(P<0.05)。这与大多数文献研究结果一致。本研究结果还显示HMLH1表达与肿瘤分期成负相关，肿瘤分期越高，表达越低。这与Pasanen[15]研究结果不一致，可能是病例数量及选取的病例类型存在差异而导致的，这还需要后续扩大样本数量进行证实。

综上所述，ARID1a及HMLH1蛋白均可以在子宫内膜癌中缺失表达，且随着分化程度降低，表达率逐渐下降，同时检测两个蛋白表达对诊断子宫内膜样腺癌有一定的诊断意义。推测两者在子宫内膜样腺癌发生发展中可能存在相关性，但具体关系还不能明确，还需要大量的病例及分子机制的研究证实。