非小细胞肺癌患者血清HMGB1和PD-L1检测的临床分析

朱蓓 方亮 王营营

肺癌为近年来临床发病率及死亡率增长最快的恶性肿瘤，其在男性中的发病率及致死率均位居各肿瘤之首，在女性中也位居第2位[1]，对人类的生命健康造成严重威胁。肺癌的发病机制目前尚未完全明确，长期大量吸烟、环境因素、大气污染及肺部慢性疾病等均与之相关[2]。多数肺癌源于支气管粘膜上皮，病理类型以非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）多见，约占83%[3]。随着临床对NSCLC发病机制及治疗方案不断的深入研究，在肿瘤免疫及靶向治疗方面也取得一定进展。在肿瘤的治疗过程中，肿瘤的病理特征及侵袭性对于治疗方案的选择往往起重要作用。本研究旨在探讨NSCLC患者血清HMGB 1及PD-L1水平与肿瘤病理特征及侵袭性的关系，为NSCLC的治疗后预后提供重要参考。

对象与方法

1 资料来源 选择2016年1月～2018年1月本院78例经病理确诊的NSCLC肿瘤科住院患者为观察组，NSCLC诊断及临床分型、分期参考美国国立综合癌症网络NSCLC诊断治疗指南[4]。其中男51例，女27例；年龄41～67岁，平均（53.2±6.3）岁；病理分型：腺癌47例，鳞癌31例；分级：高分化26例、中分化29例、低分化23例；分期：Ⅰ期～Ⅱ期34例，Ⅲ期21例，IV期19例；32例发生淋巴结转移，46例未发生淋巴结转移。另选取同期48例健康自愿者为对照组，其中男31例，女17例；年龄40～63岁，平均（53.5±6.6）岁。两组对象的性别、年龄构成上差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。纳入及排除标准：观察组均为术前未行化疗、放疗、肺部原发性病变，排除炎症、自身免疫性疾病、多器官、多系统衰竭患及合并严重内科疾病患者。本研究经医院伦理会批准通过，并经患者知情同意。

2 研究方法 受试者空腹8 h取静脉血3 mL置于真空促凝管，离心分离血清待检。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测HMGB 1、PD-L1。HMGB 1试剂使用日本SHINO-TEST公司产品，PD-L1试剂使用北京易科拜德科技有限公司产品，严格按试剂说明书操作，设立空白、阴阳性对照及质控，酶标仪型号北京普朗DNM-9602。比较两组研究对象血清中HMGB 1、PD-L1浓度差异，同时分析其与NSCLC病理类型、分级、分期及淋巴结转移的关系。

3 统计学处理 数据处理应用SPSS 24.0软件，两组数据行正态性检验，以 ±s表示组间均值，方差齐性比较采用t检验，方差不齐采用改良t检验（t'检验），多组间均值比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK法，P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

1 两组血清HMGB 1和PD-L1水平比较 与对照组比较，观察组血清HMGB 1、PD-L1水平的差异有统计学意义（P＜0.05），均明显升高，见表1。

2 不同类型NSCLC患者血清HMGB 1、PD-L1变化特点 不同病理类型和不同分化程度NSCLC患者血清HMGB 1、PD-L1比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），但不同分期NSCLC患者血清HMGB 1、PD-L1经比较，差异均存在统计学意义（P＜0.05），且随着分期依次升高。NSCLC淋巴结转移患者血清HMGB 1、PD-L1高于未转移患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表1 NSCLC患者血清HMGB 1、PD-L1与对照组比较情况（ ±s）

表2 不同类型NSCLC患者血清HMGB 1、PD-L1变化特点（ ±s）

讨 论

肺癌为临床最常见的恶性肿瘤，据统计资料显示[5]：在我国，2015年肺癌的新增病例高达73.3万，死亡人数约为61万。在肺癌中83%病例属于非小细胞肺癌，鳞癌、腺癌为其主要病理组织类型。非小细胞肺癌恶性程度高，临床症状多样复杂，易发生漏诊，5年生存率仅为10%～15%[6]。肿瘤恶性程度在于肿瘤细胞的浸润及侵袭性。肺癌尤其NSCLC易发生脑、骨、肝脏、肾上腺等器官转移，大部分肺癌患者诊断时多已发生转移，错过了手术根治时机。HMGB1为真核细胞中非组蛋白染色体结合蛋白，为机体一种重要的炎症介质，与细胞分化、迁徙、增殖及凋亡相关。PD-L1为负性T细胞刺激因子配体，对CD4及CD8T细胞增殖、活化有抑制作用。近年在肿瘤的侵袭性研究中，两指标逐渐引起临床研究人员的关注。多研究显示[7-9]：HMGB1、PD-L1在多种人类肿瘤细胞中均呈现强表达，部分研究人员猜测其与肿瘤介导免疫逃逸及肿瘤细胞增殖、血管新生等生物行为密切相关。

HMGB1以其分子量小在聚丙烯酰胺凝胶高迁徙能力得名，在淋巴组织、肺、脑等组织细胞含量丰富，为细胞内DNA结合蛋白氨基酸序列呈现高度保守。最新研究显示[10]：HMGB1在多系统肿瘤细胞及癌旁组织均有表达，HMGB1通过主动分泌及被动分泌两种方式进入外周血，但目前对于外周血的研究临床仍较为少见。本研究数据显示HMGB1在NSCLC患者血清呈现高表达，腺癌、鳞癌及不同分化程度NSCLC患者血清HMGB1的差异无统计学意义，HMGB1与NSCLC病理类型、分化程度无关。HMGB1在高分期及淋巴结转移NSCLC患者中出现升高。临床分期及淋巴结转移均为影响肿瘤预后的重要因素。研究数据提示：HMGB1与NSCLC的侵袭性有关。Kristin[11]等认为HMGB1与多种肿瘤发病机制关系密切，在肿瘤浸润深度、淋巴结转移预后等方面均有重要的临床价值。肿瘤的侵袭包括粘附、降解及移动，其中细胞外基质的降解最为关键。有研究发现[12]，HMGB1作为糖基化终末产物受体（RAGE）、Toll样受体可激活下游信号转导通路，促进细胞外基质降解酶类的分泌，从而促进肿瘤的浸润、转移。

PD-L1为近年肿瘤免疫治疗的热点[13]，PD-L1表达于抗原提呈细胞、巨噬细胞、单核细胞及活化的T、B细胞，为PD-1配体。在我们的研究中NSCLC患者血清PD-L1出现升高，不同组织类型的NSCLC比较PD-L1与HMGB1表达呈现一致性，而在高分期及淋巴结转移NSCLC患者中PD-L1出现升高。有研究发现[14-16]，PD-1/PD-L1信号通路的激活与机体肿瘤细胞的免疫逃逸密切相关。PD-1/PD-L1信号通路的激活可抑制T细胞转录因子的表达而降低T细胞免疫效应，对机体的抗肿瘤免疫应答有负性作用。另一方面，肿瘤细胞高表达PD-L1可促进抗原特异性T细胞的凋亡，并分泌抑制性细胞因子诸如IL-10、TGF-β抑制机体的抗肿瘤免疫应答。PD-L1可通过多信号通路负性调控细胞周期相关基因转录，阻碍细胞周期进展及T细胞增殖。动物实验显示[17]：特定的病理条件下PD-L1高表达可促进上皮细胞间质化，促进肿瘤细胞的浸润及转移。PD-L1与NSCLC患者免疫抑制性肿瘤微环境的免疫逃避形成及肿瘤的浸润性有关。

对于肿瘤HMGB1、PD-L1的研究，临床多见于肿瘤组织，相对于肿瘤组织，血清HMGB1、PD-L1较易获得，创伤性少，操作简便，方法学也相对更为灵敏。本研究的局限之处在于样本量尚需累积。综上所述，NSCLC患者外周血HMGB 1、PD-L1的检测对于肿瘤侵袭性及预后的预判均有重要的临床应用价值。