麦洼牦牛细管冻精生产技术要点

杨舒慧，李强，罗志昊，李芬，曹伟，李小伟

（1.四川省畜牧总站，四川 成都 610041；2.四川省龙日种畜场，四川 红原 624400；3.成都汇丰动物育种有限公司，四川 成都 610011）

2015～2018年，四川省畜牧总站和四川省龙日种畜场以麦洼牦牛为试验对象，解决了牦牛集中饲养、调教及采精、原精处理、远距离运输及分装冷冻等方面的技术难点。本文对麦洼牦牛细管冻精生产要点进行了梳理和提炼，以期对牦牛细管冻精规模化生产提供参考。

1 牦牛饲养及训练

牦牛体型大、野性高，发情期的种公牛具有很强的攻击性，因此需要进行采精前训练。训练对象为采精种公牛、台牛，时间约半年，驯化的目的是为增进采精员与牦牛的亲近度，减少牦牛人工采精的应激，同时让采精员熟悉牦牛的生理反应。

1.1 选择种公牛、台牛、采精员

1.1.1 选择种公牛 选择4～5岁健康无病、体质健壮的特级麦洼牦牛种公牛作为采精种公牛，对其编号建档，穿鼻戴环并开始训练。

1.1.2 选择台牛 选用适宜采精种公牛交配体的身体健康、性情温顺、发情旺盛、体形适当的母牛作台牛。

1.1.3 选择采精员 选择胆大心细、灵敏谨慎，有耐心的饲养员作为采精员，两人一组，每组负责6头种公牛的驯化及采精。

1.2 牦牛训练 采精牛训练的主要目的是为避免牦牛发生应激导致无法采精，甚至攻击采精人员造成人员受伤。驯化主要包括两个阶段：消除警惕阶段和建立亲密关系阶段。

1.2.1 消除警惕阶段 采精人员每天早晚定时定点，到牛舍进入采精种公牛视线，前期仅小幅度活动，让牦牛适应采精员的存在。后期逐步增大活动幅度及频率，逐步缩小牦牛与采精员接近的极限距离直至采精员可触摸牦牛为止。期间发现警惕性极高无法接近的牦牛应及时淘汰。

1.2.2 建立亲密关系阶段 采精员手盛食盐诱导公牛舔舐，舔舐中触摸牦牛额头，注意避开眼睛鼻子等敏感部位，每日2～3次。这一步骤的目的是为让牦牛适应采精员进行直接身体接触。待牦牛完全适应触摸后，逐步减少食盐的使用，增加触摸力度与范围，确保实际碰触到牦牛肌肉，使肌肉适度受压。触摸需从低敏感部位向高敏感部位缓慢过渡，顺序应为头、角、耳、颈、背、睾丸、阴茎。淘汰有反抗甚至攻击行为的牦牛淘汰。

1.3 牦牛饲养 牦牛训练通常持续半年左右，且牦牛暖季发情，因此必须在前一年冷季完成选牛工作，所选牛只要经历冷季到暖季的疾病高发期，因此要做好冷季补饲及暖季驱虫、防疫工作。

2 鲜精采集

牦牛以天然草场放牧为主，采精工作通常选择在6～9月开展。

2.1 采精前的准备

2.1.1 环境 选择地面平整、干净无风的草场或圈舍作为采精点。采精前清扫地面，安装保定架、实验台。

2.1.2 人员 每次采精至少需要采精员2 人、记录员1人、助手4～6人。采精员负责轮流采精及鲜精现场保存稀释，记录员负责记录采精牦牛个体信息、精液信息，助手负责驱赶、牵引及保定台牛和采精牛，一旦牦牛出现攻击行为，助手负责引导驱赶牦牛。采精员须双手消毒并戴一次性医用橡胶手套，助手须穿戴工作服及线手套。

2.1.3 台牛 检查台牛发情状况，可提前72 h 注射孕马血清进行发情控制。发情状况良好的台牛通过角桩法保定，清洗并消毒台牛后躯，重点为肛门、会阴、尾根。

2.1.4 采精器械、用具及药品 采精器械及用具主要有：特制牦牛用假阴道、假阴道遮光布套、集精杯、锥形瓶、量筒、水浴锅、温度计、保鲜膜、记号笔、一次性医用橡胶手套等。

药品：75%酒精、凡士林、0.1%高锰酸钾溶液。

集精杯、锥形瓶、量筒使用前高温干燥消毒，温度计要清洗干燥并用紫外线消毒。假阴道内壁温度和压力的掌握也是能否顺利采精的关键，假阴道使用前用75%的酒精做内外消毒，调节内壁压力至与台牛阴道内壁压力接近，预热至42～45 ℃，使用后拆卸清洗并用双蒸水浸泡30 min后晾干。

2.1.5 采精牛 保定采精种公牛，其清洁消毒体表。清洗公牛下腹部，清理包皮腔内积尿和其他残留物，用0.1%高锰酸钾溶液洗净其包皮并擦干。

2.2 鲜精采集 牦牛采精是通过在公牦牛进行爬跨行为时用特制假阴道代替台牛阴道进行精液采集。采精时采精员须在采精种公牛爬跨时，迅速准确温柔地将阴茎导入假阴道内采精，手持假阴道保持适宜位置至采精种公牛射精。uuvb在采集到精液的集精杯上做好牛号标记。

3 原精的稀释及运输

3.1 精液品质的检查 对采集的新鲜精液现场进行精液计量和质量检查。记录牛号、原精量、活力、颜色及性状信息。气味异常、带脓液或血的精液废弃。

3.2 精液稀释 通过目测法判定精液的活力和密度，活力在0.5以上的精液根据密度进行5～10倍稀释。稀释液须现配现用，将法国Optidyl稀释原液用双蒸水以1∶2.5 比例配置成稀释液，配置时须将稀释原液和双蒸水预热至34 ℃，并在34 ℃环境下恒温配置并保存。稀释时使用一次性无菌带盖白色储存容器，标记好牛号，在34 ℃恒温条件下稀释后，放置阴凉避光处自然冷却至室温。

3.3 运输 长时间的运输必须要保证稀释液有足够的营养物质供精子代谢所需，避免精液活力降低。稀释冷却后的精液，立即用棉布包裹避光并放入车载冰箱恒温运输，运输过程不超过10 h。

4 精液二次稀释、分装和冷冻

4.1 二次稀释 运输到实验室的精液经过显微镜检测后，根据活力和密度进行二次稀释，将活力在0.5以上的精液进行分装和冷冻。

4.2 精液分装 使用Is4四头一体精液灌装机进行分装。分装前，提前3 h将细管放入4 ℃平衡柜进行降温。分装时，注意不同牛号的精液避免混装。

4.3 精液的平衡 分装好的精液细管需均匀平铺在特制的冷冻架上，量大时将冷冻架进行叠放，放入4 ℃平衡柜进行缓慢降温，降温过程需要2.5 h。平衡过程中应做好电源供应，切忌断电造成精液温度回升。

4.4 冷冻 平衡结束后迅速将放有精液细管的冷冻架移入法国IMV 冷冻仪进行冷冻。冷冻时间为20 min。冷冻完成后，将精液细管快速装入棉布袋，贴上记录精液牛号及数量的标签，直接放置在-196 ℃液氮中。

4.5 冷冻精液品质检查 冷冻后的精液需在37 ℃水浴锅中解冻后进行活力检查，将活力在0.35以下的冷冻精液废弃。