自然流产患者巨细胞病毒感染与血清TNF-α IL-1 IL-6的关系

郑春娇， 吴智明， 黄素静， 贾利平

(海南医学院第二附属医院, 海南 海口 570100)

自然流产指非人为目的造成的流产，发生与妊娠28周以前[1]。据估计，人类全部妊娠中，自然流产的发生率在75%以上，而临床确认的妊娠中，自然流产的发生率约为15%，这是因为大部分胚胎在着床后不久便停止发育，只是表现为月经量过多或月经延期，从而未被察觉。目前，造成自然流产的原因尚存许多疑惑。据文献报道，病原体感染是导致自然流产的重要因素，其中病原体人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)感染与流产密切相关[2]；并且HCMV感染在人群中非常普遍，可高达90%以上，且一旦感染，基本终身携带，而母体产生的抗体无法完全保护胎儿，妊娠期间，母体免疫处于抑制状态，而HCMV感染的发生与自身免疫应答功能强弱，因此妊娠可导致母体携带的HCMV被激活成为活动性感染者，并经由胎盘造成胎儿感染，影响妊娠解决；此外，研究显示，HCMV感染与多种炎性细胞因子的水平有关[3]。基于此，笔者对110例自然流产的临床资料进行分析，旨在探讨TNF-α、IL-1、IL-6在自然流产患者HCMV感染中发生的作用，为临床预防HCMV感染患者流产提供参考，现将研究结果报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料:回顾性分析2017年1月至2019年1月在我院就诊的110例自然流产孕妇的临床资料(观察组)，年龄22～34岁，平均(27.04±3.68)岁，孕周7～14周，平均孕周(10.71±2.31)周。纳入标准:①符合《妇产科学(第9版)》中自然流产的相关诊断，并妊娠试验和超声检查确诊；②孕妇生殖器官结构正常；③均进行了HCMV-IgM、HCMV-DNA、HCMV-mRNA的检测者。排除标准:①遗传因素、内分泌因素等导致的自然流产者；②合并恶性肿瘤者；③临床资料不全者；④孕期服用过可导致胎儿发育异常的药物。并根据外周血HCMV-IgM、HCMV-DNA、HCMV-mRNA的检测结果将观察组分为两个亚组，任意两项阳性则为HCMV 活动性感染组，否则为HCMV非活动性感染组，活动性感染患者26例，年龄22～34岁，平均(27.42±3.02)岁，孕周7～14周，平均孕周(10.83±2.02)周；非活动性感染患者84例，年龄22～35岁，平均(26.93±3.53)岁，孕周7～14周，平均孕周(10.65±2.15)周。另选取同期在我院体检的70例正常孕妇临床资料(对照组)，年龄22～35岁，平均(26.93±3.72)岁，孕周7～14周，平均孕周(10.82±2.41)周。观察组和对照组以及活动性感染组与非活动性感染组一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法:①标本采集:抽取所有孕妇清晨空腹静脉血8mL，分为两管，每管4mL，其中一管静置5min后，4℃、2000r/min离心15min，留取上清液置于-80℃冷冻保存；另一管加入溶血试剂，待提取DNA和RNA。②HCMV-IgM检测:采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测血清中HCMV IgM 抗体(HCMV-IgM)，试剂盒均购美国Hope公司，并严格按照试剂盒的说明书进行操作，并采用美国Hyperion 有限公司4025-056型酶标仪判断CMV-IgM定性结果。③HCMV-DNA检测:取2mL血液标本，采用酚氯仿抽提法提取全血DNA，DNA抽提步骤见参考文献[4]；然后行试剂盒进行PCR体外扩增，反应采用Tap DNA聚合酶，扩增片段为430bp，操作完全按照实际说明书进行。④HCMV-mRNA检测:采用RT-PCR法，进行检测，HCMV mRNA扩增片段为260bp，检测方法及引物序列见参照参考文献[5]。⑤炎性细胞因子检测:取2mL血清标本，采用ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-1(interleukin-1，IL-1)、白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)的水平。以上试剂盒均购自生工生物工程(上海)股份有限公司，并严格按照说明书操作。

2 结 果

2.1观察组与对照组HCMV-IgM、HCMV-DNA、HCMV-mRNA检测结果比较:观察组HCMV-IgM、HCMV-DNA、HCMV-mRNA的阳性率明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 观察组与对照组HCMV-IgM HCMV-DNA HCMV-mRNA检测结果比较n(%)

表2 观察组和对照组血清TNF-α IL-1 IL-6水平比较

2.2观察组和对照组血清TNF-α、IL-1、IL-6水平比较:观察组血清TNF-α、IL-1、IL-6水平均明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

2.3活动性感染组和非活动性感染组TNF-α、IL-1、IL-6水平比较:活动性感染组血清TNF-α、IL-1、IL-6水平均明显高于非活动性感染组，差异有统计学意义(P<0.05):提示血清TNF-α、IL-1、IL-6水平与活动性感染有关，且水平越高，活动性感染的风险越高,见表3。

表3 活动性感染组和非活动性感染组TNF-α IL-1 IL-6水平比较

3 讨 论

HCMV属于疱疹病毒科，是人群普遍感染的一种病原菌，一旦侵入人体可终身或长期存在，呈潜伏状态[6]。当宿主出现怀孕或免疫力低下等情况时，HCMV可被激活，在宿主体内激活感染。研究显示，未激活的HCMV一般不会对胎儿造成影响，而HCMV活动性感染会提升孕妇出现流产、早产、畸形等不良妊娠结局的发生风险[7]。目前，Elisa检测HCMV-IgM阳性是活动性感染的标志，表示病毒新感染，但该检测结果易受机体免疫功能的影响，出现假阳性的几率较高。Simonazzi G等[8]研究中提示，潜伏感染时HCMV-DNA阳性，而HCMV-mRNA阴性，活动性感染时 HCMV-mRNA阳性。因此，为保证检测准确性，本研究联合HCMV-IgM、HCMV-DNA、HCMV-mRNA进行检测。结果显示，观察组HCMV-IgM阳性41(37.27%)例，阴性69(62.73%)例，HCMV-DNA阳性18(16.36%)例，阴性92(83.64%)例，HCMV-mRNA阳性26(23.64%)例，阴性84(76.36%)例，对照组HCMV-IgM阳性5(7.14%)例，阴性65(92.86%)例，HCMV-DNA阳性3(4.29%)例，阴性67(95.71%)例，HCMV-mRNA阳性4(5.71%)例，阴性66(94.29%)例；观察组HCMV-IgM、HCMV-DNA、HCMV-mRNA的阳性率明显高于对照组，差异均有统计学意义；观察组血清TNF-α、IL-1、IL-6水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义。与国内外研究结果一致[9,10]。说明HCMV感染、TNF-α、IL-1、IL-6均是导致自然流产的重要因素。

孕妇发生HCMV感染后，机体会立即会产生细胞免疫应答，一方面受到HCMV感染的免疫细胞会诱导细胞因子产生，作为宿主介导，控制病毒基因复制；另一方面，细胞因子大量分泌，可参与病毒破坏宿主免疫系统的过程，造成宿主免疫损伤。IL-1、IL-6、TNF-α为常见的炎性细胞因子，与感染性疾病相关，过量的分泌将导致机体的免疫损伤，造成机体免疫抑制。研究[11]显示，妊娠期母体处于免疫抑制状态，主要靠Th2细胞进行免疫应答，而当HCMV感染母体时，可使GA-TA 结合蛋白3上调，T-box基因家族转录因子下调，从而促进Th2细胞分化，进一步削弱母体免疫功能。TNF-α主要由活化的单核/巨噬细胞产生，具有一定的抗感染的作用，分泌过量可活化HCMV增强子，上调HCMV基因表达，促进HCMV病毒基因转录，加重感染。IL-1、IL-6均为白细胞介素家族因子[12]，初期可促进免疫细胞增殖分化，提高免疫反应，但当IL-1、IL-6水平上升到一定程度，不仅会促进HCMV激活，而且还会引起免疫损伤，从而诱发自身免疫性疾病，引起流产。本研究中活动性感染组血清TNF-α、IL-1、IL-6水平均明显高于非活动性感染组，差异有统计学意义。说明HCMV活动性感染与TNF-α、IL-1、IL-6水平关系密切，在HCMV活动性感染中扮演重要角色，可能为引起HCMV活动性感染的危险因素。Forte E等[13]研究显示，当宿主免疫力低下时，免疫应答反应可激活HCMV。HCMV活化可导致TNF-α、IL-1、IL-6等炎症细胞因子分泌异常，而在妊娠过程中，细胞因子出现异常则表明为病理妊娠，因此造成孕妇自然流产。

综上所述，HCMV感染引起是导致自然流产的重要原因之一，并且HCMV感染与TNF-α、IL-1、IL-6水平呈正相关，可能均在流产的发生中发挥重要作用。