重组干扰素联合抗生素对宫颈上皮内瘤变LEEP术后HPV-DNA负荷量及Caspase-3、survivin表达的影响

崔开颖，朱根海，杨舒盈，陈春英，洪澜，吴梦琼

宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)是宫颈癌的癌前病变，可反映宫颈癌发生、发展的连续过程。CIN发生与人乳头状瘤病毒(human papilloma virus，HPV)感染密切相关，研究发现HPV高负荷可作为CIN进展的短期指标[1]。目前，宫颈电环切除术(loop electrosurgical excision procedure，LEEP)已成为治疗CIN的重要手段，虽能有效清除HPV病毒感染，但仍有部分患者存在病灶残留问题，严重影响远期疗效[2]。因此，CIN患者LEEP术后应联合使用其他药物治疗，以提高临床疗效。LEEP术后及时口服抗生素头孢拉定胶囊，可有效维持阴道微生态平衡，发挥抗感染作用[3]；而术后重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊阴道给药，可使病变部位组织、细胞产生抗病毒蛋白，发挥抗病毒、免疫调节等作用[4]。此外，天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cysteine-containing aspartate-specific proteases 3，Caspase-3)、生存素(survivin)与宫颈病变发生、发展密切相关。鉴于此，现观察CIN患者LEEP术后联合使用重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊和头孢拉定胶囊对HPV-DNA负荷量及Caspase-3、survivin表达的影响，并与LEEP术后单独使用头孢拉定胶囊及单独应用重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊的效果进行对比分析，结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2016年10月—2018年10月海南省人民医院妇科收治的CIN患者180例作为研究对象，CIN Ⅰ、CIN Ⅱ级患者各90例。按照随机数字表法将CIN Ⅰ级患者分为CIN ⅠA组、CIN ⅠB组、CIN ⅠC组，CIN Ⅱ级患者分为CIN ⅡA组、CIN Ⅱ B组、CIN Ⅱ C组，各30例。各组间临床资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，见表1。本研究经医院伦理委员会批准，患者及家属知情同意并签署知情同意书。

1.2 选择标准 (1)纳入标准：①经宫颈活检确诊为CIN，且符合CIN Ⅰ和CIN Ⅱ相关诊断标准[5]的患者；②高危型HPV-DNA检测显示阳性者；③临床资料齐全者；④自愿接受LEEP手术治疗，且入院前未接受其他相关治疗。(2)排除标准：①近期月经失调者；②妊娠期或哺乳期女性；③合并滴虫、支原体等其他生殖系统感染者；④对头孢拉定胶囊或重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊过敏者；⑤存在凝血障碍者。

1.3 治疗方法 CIN患者于月经干净后3～7 d接受LEEP治疗，均由同一组医师使用韩国UM-150A高频电刀进行操作。患者取膀胱截石位，常规消毒、麻醉，以碘试验确定切除范围，切除深度为1.5～2.5 cm，电凝止血，并使用明胶海绵填塞宫颈创面，术后24 h取出。CIN ⅠA组及CIN ⅡA组术后均口服头孢拉定胶囊(山东鲁抗医药股份有限公司生产)0.5 g/次，3次/d，连续治疗7 d。CIN ⅠB组及CIN ⅡB组术后均给予重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊(上海华新生物高技术有限公司生产，规格：每粒含α-2b干扰素80万U)1粒每晚睡前给药(于LEEP术后15 d开始)，置于阴道穹窿处，避开月经期连续用药3个月，疗程结束后再随访3个月。CIN ⅠC组及CIN ⅡC组给予口服头孢拉定胶囊联合重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊阴道给药，各药物用药方法同上。

1.4 观察指标与方法

1.4.1 临床疗效评价[6]：术后6个月阴道镜检查宫颈光滑，未发现CIN病变存在，即为治愈；阴道镜检查仍有CIN病变存在，即为病变持续或残存。

1.4.2 HPV-DNA负荷量检测：CIN患者均于术前及术后6个月使用宫颈管刷采集宫颈脱落细胞，并用第二代杂交捕获(HCⅡ)法检测HPV-DNA含量。根据相对光单位长度(RLU)判断有无HPV-DNA存在，并设立阳性对照(CO)，以RLU/CO表示HPV-DNA负荷量，RLU/CO≥1为阳性。

1.4.3 HPV转阴率计算：以RLU/CO<1作为转阴标准，记录转阴例数，计算转阴率。

1.4.4 宫颈组织中Caspase-3蛋白、survivin蛋白阳性率测定：取宫颈活检组织，采用免疫组织化学SP法检测宫颈组织中Caspase-3蛋白、survivin蛋白表达，兔抗人Caspase-3多克隆抗体、兔抗人survivin蛋白多克隆抗体均购自上海通蔚生物科技有限公司。染色结果判断，每例标本在高倍镜(×400)下随机选取5个视野，计算每个视野内阳性细胞构成比，取平均值。无阳性细胞，即为阴性(-)；阳性细胞构成比<25%，即为弱阳性(+)；25%≤阳性细胞≤50%，即为中阳性(++)；阳性细胞>50%，即为强阳性(+++)。

2 结 果

2.1 各组临床疗效比较 CIN ⅠC组患者治愈率明显高于CIN ⅠA组与CIN ⅠB组(P<0.05)，病变持续或残存率显著低于CIN ⅠA组与CIN ⅠB组(P<0.05)，CIN ⅠA组与CIN ⅠB组相比，差异无统计学意义(P>0.05)；CIN ⅡC组患者治愈率显著高于CIN ⅡA组与CIN ⅡB组(P<0.05)，病变持续或残存率明显低于CIN ⅡA组与CIN ⅡB组(P<0.05)，CIN ⅡA组与CIN ⅡB组相比，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表2 各组CIN患者临床疗效比较 [例(%)]

2.2 各组HPV-DNA负荷量比较 术前，CIN Ⅱ级各组患者HPV-DNA负荷量高于CIN Ⅰ级各组患者，差异均有统计学意义(P<0.01)；术后6个月各组患者HPV-DNA负荷量均显著少于术前，且C组明显少于A组与B组(P<0.05)，A组与B组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表3。

2.3 各组HPV转阴率比较 术后6个月CIN ⅠC组患者HPV转阴率93.3%(28/30)显著高于CIN ⅠA组73.3%(22/30)与CIN ⅠB组70.0%(21/30)(χ2=6.634，P=0.036)；CIN ⅡC组患者HPV转阴率83.3%(25/30)明显高于CIN ⅡA组60.0%(18/30)与CIN ⅡB组56.7%(17/30)(χ2=6.104，P=0.047)；CIN Ⅰ、Ⅱ级A组与B组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.4 各组宫颈组织中Caspase-3蛋白及survivin蛋白阳性率比较 术前各组患者Caspase-3蛋白及survivin蛋白阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05)；术后6个月CIN Ⅰ、Ⅱ级各组患者Caspase-3蛋白及survivin蛋白阳性率均明显低于术前，且C组显著低于A组与B组(P<0.05)；A组与B组比较差异均无统计学意义(P>0.05)，见表4。

表1 各组CIN患者临床资料比较

3 讨 论

CIN到宫颈癌是一个连续发展的过程，在此癌变过程中HPV持续感染起决定性作用。HPV是一种双链DNA病毒，研究发现HPV-DNA负荷量与宫颈病变严重程度相关，HPV-DNA负荷量越高，进展为宫颈癌的风险越高，因此采取措施降低HPV-DNA负荷具有重要意义[7]。LEEP是目前CIN常用的治疗手段，具有创伤小、操作简便等优势，虽可有效降低HPV-DNA负荷量，但不能彻底清除HPV病毒，宫颈中残留病变是导致复发的重要原因，甚至可能进一步发展为宫颈癌。因此，CIN患者LEEP术后辅以其他治疗显得特别重要。

因LEEP术后创面有大量的细胞液渗出，可为细菌、真菌的生长提供条件，所以术后进行抗生素治疗非常关键[8]。LEEP术后使用抗生素可显著减少创面感染，头孢拉定胶囊是临床较为常用的抗生素，其主要应用于敏感菌所导致的肺炎、支气管炎等呼吸道感染和泌尿生殖道感染及皮肤软组织感染。重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊具有广谱抗病毒作用，可通过与干扰素受体特异性结合，阻止病毒蛋白质的合成和复制，起到抑制HPV病毒感染的作用[9]。重组人干扰素α-2b还具有多重免疫调节作用，通过增强自然杀伤细胞对病毒的杀伤活性，促进机体免疫自稳功能，阻止病毒、真菌等微生物侵害[10]。此外，重组人干扰素α-2b还能调节性激素分泌，加快促进创面愈合[11]。本研究中，CIN ⅠC组患者治愈率远高于CIN ⅠA组、ⅠB组，病变持续或残存率远低于CIN ⅠA组、ⅠB组，CIN ⅡC组治愈率远高于CIN ⅡA组、ⅡB组，病变持续或残存率远低于CIN ⅡA组、ⅡB组，提示CIN患者LEEP术后联合使用重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊和头孢拉定胶囊临床效果好。孙桂霞等[12]报道，CIN患者LEEP术后联合使用化湿解毒汤和重组人干扰素α-2b凝胶治疗高危型HPV患者病毒载量明显少于单独使用重组人干扰素α-2b凝胶患者，且术后6个月高危型HPV转阴率显著高于单独使用重组人干扰素α-2b凝胶。本研究发现LEEP术后6个月各组患者HPV-DNA负荷量均远少于术前，且C组远少于A组、B组。CIN ⅠC组HPV转阴率远高于CIN ⅠA、ⅠB组，CIN ⅡC组HPV转阴率远高于CIN ⅡA、ⅡB组，与孙桂霞等[12]报道相似，提示重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊联合头孢拉定胶囊可有效减少CIN患者LEEP术后HPV-DNA负荷量，促进HPV转阴。

Caspase-3是凋亡相关因子，可诱导肿瘤细胞凋亡，参与宫颈病变发生、发展过程[13]。而survivin是一种凋亡抑制蛋白，可通过与Caspase-3结合而导致肿瘤细胞增殖，也可通过调节细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)水平，影响Fas介导的细胞凋亡[14]。董晗等[15]研究发现，survivin蛋白在宫颈组织中阳性率显著升高，survivin蛋白阳性率升高可能会增加宫颈鳞癌发生风险。本研究结果发现，LEEP术后6个月各组患者宫颈组织中Caspase-3、survivin蛋白阳性率均远低于术前，且C组远低于A组、B组，与董晗等[15]研究结果类似，提示重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊的使用能明显降低CIN患者LEEP术后Caspase-3、survivin蛋白阳性率。

表3 各组CIN患者术前及术后6个月HPV-DNA负荷量比较

表4 各组CIN患者宫颈组织中Caspase-3蛋白及survivin蛋白阳性率比较 [例(%)]

综上所述，采用重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊联合头孢拉定胶囊干预CIN行LEEP术后患者，可明显减少HPV-DNA负荷量，有增加HPV转阴率，降低Caspase-3、survivin蛋白阳性率，从而预防CIN患者发展为宫颈癌。本研究所选样本量较少，且未观察重组人干扰素α-2b阴道泡腾胶囊联合头孢拉定胶囊对CIN患者LEEP术后的远期效果，下一步应增加样本量继续观察远期疗效。

利益冲突：所有作者声明无利益冲突

作者贡献声明

崔开颖：设计研究方案，实施研究过程，论文撰写；朱根海：提出研究思路，分析试验数据，论文审核；杨舒盈，陈春英：实施研究过程，资料搜集整理，论文修改；洪澜：进行统计学分析；吴梦琼：课题设计，论文撰写