锦带花乙酸乙酯提取物镇痛作用研究

李佳霓 应子斓 代鑫 崔玉芳 罗学娅

摘 要：为了研究锦带花（Weigela florida）乙酸乙酯提取物对小鼠的镇痛作用，将锦带花利用乙酸乙酯萃取制备锦带花乙酸乙酯提取物，采用热板法和扭体法疼痛动物模型，将雌雄兼用小鼠100只随机分为锦带花乙酸乙酯提取物2.00、1.00、0.50 g/kg剂量组，盐酸曲马多0.04 g/kg剂量组和生理盐水组，每组10只，灌胃给药。分别观察给药后不同时间点的小鼠痛阈值，或不同时间段的小鼠扭体反应数。根据痛阈值和扭体反应数的变化评判锦带花乙酸乙酯提取物的镇痛作用。结果显示，在热板法中，锦带花乙酸乙酯提取物1.00 g/kg剂量组给药后60 min和2.00 g/kg剂量组给药后30、45、60 min的痛阈值高于生理盐水组；1.00 g/kg剂量组给药后45、60 min和2.00 g/kg剂量组给药后15～60 min的痛阈值分别高于各自给药前痛阈值（P<0.05或P<0.01）。在扭体法中，锦带花乙酸乙酯提取物0.50 g/kg剂量组给药后21～30 min，>31～40 min和>41～50 min，1g/kg剂量组给药后31～40 min和41～50 min以及2.00 g/kg剂量组给药后11～50 min 4个时间段的扭体反应数分别比生理盐水组明显减少（P<0.05或P<0.01），扭体反应抑制率显著提高。由此得出结论：锦带花乙酸乙酯提取物对小鼠具有一定的镇痛作用，且以2.00 g/kg剂量的镇痛效果最佳。盐酸曲马多具有显著的镇痛作用。

关键词：锦带花；乙酸乙酯提取物；镇痛作用

基金项目：大连大学大学生创新创业训练计划项目（201911258184）

疼痛是一种复杂的生理心理活动，即机体对伤害性刺激产生的痛感觉和痛反应，是临床常见症状之一，因而镇痛也是临床面临的重要问题之一。目前应用的镇痛药主要包括以吗啡为代表的阿片类麻醉性镇痛药和以阿司匹林为代表的非甾体解热镇痛抗炎药，其在选择性抑制和缓解各种疼痛、解除患者病痛方面发挥了巨大作用，但反复应用过程中，阿片类药物易产生成瘾性，非甾体抗炎药会有消化性溃疡等不良反应。这些都促使人们积极地去寻找有效且副作用小的镇痛药物。我国传统中药主要来源于天然药及其加工品，药材丰富，毒副作用和不良反应相对较少，因此，许多学者围绕着从中药中寻找镇痛效果良好且恰当的镇痛药展开工作。中药锦带花（Weigela florida）属忍冬科植物，在我国东北、河北、山东、山西和江苏北部等地广泛分布[1]，是东北、华北地区主要的早春花灌木之一，具有观赏、食用[2]、蚕丝印染[3]等价值，而在药用方面，研究认为其具有凉血、清热、解毒、止痛、活血等功效，主要用于瘟病初起、咽喉肿痛、感冒发热、丹毒等症治疗[4]。此外，锦带花还具有抑菌[5-6]、抗流感病毒[7-8]等方面的作用。本课题组以锦带花中药学方面的功效为基础，对其进行了系列研究，旨在探讨锦带花乙酸乙酯提取物的镇痛作用。

1 实验

1.1 实验动物

昆明种小鼠100只，清洁级，体重19～23 g，5～6周龄，雌雄兼用，购于大连医科大学实验动物中心，动物合格证号：SCXK（辽）2018—0003。在实验过程中严格执行国家有关实验动物保护和使用指南。

1.2 实验药品与仪器

在大连大学校园内采集锦带花，由大连大学医学院中药学教授高松鉴定。盐酸曲马多注射液（多多药业有限责任公司），冰醋酸（西陇化工股份有限公司），YLS-6B智能热板仪（山东省医学科学院设备站），KDM（A）自动恒温电热套（天津泰斯特仪器有限公司），旋转蒸发器RE—2000A（巩义市予华仪器有限公司）等。

1.3 实验方法

1.3.1 制备锦带花乙酸乙酯提取物

锦带花干燥药材50.00 g，适度粉碎，2 L 75%乙醇浸泡24 h，70 ℃自动恒温电热套加热回流提取2 h，提取过滤液；1 L 75%乙醇继续加热回流1 h，回流液过滤，弃固体锦带花留滤液。合并两次滤液，用旋转蒸发仪少量多次回收乙醇，将挥发乙醇后所得溶液倒入分液漏斗，加适量环己烷萃取，萃取步骤重复4次后将萃取液换成乙酸乙酯，重复萃取5次后放于烘干箱烘干，得膏状药物4.80 g（每克膏状药物相当于10.42 g原药），于4 ℃冰箱中保存备用。

1.3.2 小鼠热板法疼痛模型的制备及实验

取雌性小鼠数只，先测量每只小鼠的给药前痛阈值，即将小鼠分别置于测痛仪（55.0±0.5）℃的热板上，至小鼠出现舔后足为止，此段时间为痛阈值。凡小鼠在30 s内不舔后足或者逃避、跳跃者舍弃。每鼠测两次痛阈值并取其均值为给药前痛阈值。挑选给药前痛阈值30 s内的小鼠50只，随机分5组，即锦带花乙酸乙酯提取物2.0、1.0、0.5 g/kg剂量组，盐酸曲马多0.04 g/kg剂量组和生理盐水组，每组10只，给小鼠分别以0.2 mL/10 g灌胃不同剂量的锦带花乙酸乙酯提取物、0.2%盐酸曲马多注射液及等容积生理盐水。给药后15、30、45、60、75、90 min各测一次小鼠痛阈值至90 min为止[9]。

1.3.3 小鼠扭体法疼痛模型的制备及实验

取雌雄各半小鼠数只，1%冰醋酸溶液10 mL/kg，腹腔注射[10]。挑选在注射冰醋酸后的10 min内出现扭体反应的小鼠50只，分组及给药同热板法。给药后观察每隔10 min（11～20 min、21～30 min、31～40 min、41～50 min）内的小鼠扭體反应数至50 min为止。并按下式计算扭体反应抑制率：

1.4 统计学方法

SPSS23.0统计学软件，实验数据用均数±标准差（_

x±s）表示，采用t检验对两组间数据进行比较，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 锦带花乙酸乙酯提取物对小鼠痛阈值的影响

由表1可见，与生理盐水组比较，锦带花乙酸乙酯提取物1.00 g/kg灌胃给药后60 min和2.00 g/kg给药后30、45、 60 min的痛阈值高于生理盐水组，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。与给药前比较，1.00 g/kg给药后45、60 min和2.00 g/kg给药后15～60 min的痛阈值分别高于各自给药前，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结果表明锦带花乙酸乙酯提取物对小鼠具有一定的镇痛作用，以2.00 g/kg效果较佳。

盐酸曲马多0.04 g/kg灌胃给药后不同时间的痛阈值与生理盐水组比较以及各时间给药后与给药前比较均明显提高，差异具有有统计学意义（P<0.01）。结果表明盐酸曲马多对小鼠有明显的镇痛作用。

2.2 锦带花乙酸乙酯提取物对小鼠扭体反应的影响

由表2可知，锦带花乙酸乙酯提取物0.50 g/kg灌胃给药后21～30 min、31～40 min和41～50 min，1.00 g/kg给药后31～40 min和41～50 min时间段以及2.00 g/kg给药后10～50 min的5个时间段，小鼠扭体反应数分别与生理盐水组比较明显减少，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01），扭体抑制率显著提高。结果表明锦带花乙酸乙酯提取物对小鼠具有一定的镇痛作用，且以2.00 g/kg效果为佳。

盐酸曲马多0.04 g/kg灌胃给药后不同时段的扭体反应数与生理盐水组比较差异均有统计学意义（P<0.01）。表明盐酸曲马多对小鼠的镇痛作用显著。

3 讨论

在临床上，疼痛伴随着多种疾病而出现，象征着危险，促使人们紧急行动，避险去害。疼痛时机体常伴有恐惧、紧张、不安等情绪活动，而剧烈疼痛还可导致生理功能紊乱，甚至引发休克而致命。因此，适当使用镇痛药以缓解疼痛是非常必要的。临床上常用的阿片类镇痛药和非甾体抗炎药的副作用是明确的，因此，寻找有效且副作用较小的镇痛药具有实际意义。中药药材丰富，毒副作用和不良反应相对较少。锦带花作为传统中药，具有清热、解毒、止痛等效果，近年的研究还表明其具有抑菌、抗流感病毒等方面的作用。以此为基础，本研究初步探讨了其乙酸乙酯提取物的镇痛作用。

在镇痛药物的研究中，多采用动物致痛模型实验来筛选具有镇痛作用的化合物以及评价镇痛药物的药效强度。本研究采用的物理致痛法、小鼠热板法、化学致痛法和醋酸扭体法，是镇痛药物外周镇痛效果评价和筛选的常用经典动物模型，以此来观察药物对急性非特异性炎性反应的抗炎及镇痛效果。本研究过程中严格控制各种影响因素，研究指标观察统一，数据处理采用通用的统计方法，因而研究结果可信、可靠。由本实验结果可见锦带花乙酸乙酯提取物2.00、1.00、0.50 g/kg给予小鼠灌胃后，痛阈值有一定程度的提高；给药后小鼠扭体反应数降低，扭体抑制率提高，表明锦带花乙酸乙酯提取物对小鼠具有一定的镇痛作用，从实验数据看2.00 g/kg镇痛效果更为明显。盐酸曲马多作为阳性对照药物，其痛閾值提高和扭体反应数降低的改变均是显著的，说明盐酸曲马多的镇痛作用明确、显著。

目前，对于锦带花的研究以栽培育种方面居多[11-12]，也有其对空气质量影响的研究报道[13]，但药用方面研究甚少。有资料报道，在锦带花乙酸乙酯提取物化学成分研究中，发现其成分主要为槲皮素（quercetin，I）、原儿茶酸（protocatechuic，II）、莨菪亭（Scopoletin ，III）等[14]，提示锦带花乙酸乙酯提取物除了镇痛作用外，可能还具有祛痰、止咳、平喘等作用，有待于进一步深入研究。

4 结语

锦带花乙酸乙酯提取物镇痛作用研究是对锦带花进行系列研究的一部分，是对锦带花药理作用研究空白的填补。有关锦带花乙酸乙酯提取物的镇痛作用机制及其镇痛作用部位等问题，将在下一步的工作中进一步进行深入研究。

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Study on analgesic effect of extracts from Weigela Florida Ethyl Acetate

Li Jiani， Ying Zilan， Dai Xin， Cui Yufang， Luo Xueya

（Medical College， Dalian University， Liaoning 116622， China）

Abstract：In order to study the analgesic effect of Weigela Florida ethyl acetate extract on mice， ethyl acetate extract of Weigela Florida was prepared by ethyl acetate extraction. The hot plate method and writhing method were used to establish the pain animal model. 100 male and female mice were randomly divided into 2.00， 1.00 and 0.50 g/kg group， tramadol hydrochloride with 0.04 g/kg group. 10 rats in each group were given intragastric administration. The pain threshold of mice at different time points and the numbers of writhing reactions in different time periods were observed. The analgesic effect of ethyl acetate extract from broccoli was evaluated according to the changes of pain threshold and writhing reaction numbers. The results showed that in the hot plate method， the pain threshold of 1.00 g/kg ethyl acetate extract group at 60 min and 2.00 g/kg group at 30， 45 and 60 min after administration was higher than that in normal saline group； the pain threshold of 1.00 g/kg ethyl acetate extract group at 45， 60 min and 2.00 g/kg group at 15～60 min after administration was higher than that before administration respectively（P<0.05 or P<0.01）. In the writhing method， the numbers of writhing reaction 0.50 g/kg of ethyl acetate extract group were significantly decreased in the four time periods that 21～30 min， 31～40 min and 41～50 min， 1.00 g/kg group in 31～40 min and 41～50 min， and 2.00 g/kg group in 10～50 min（P<0.05 or P<0.01）， and the inhibition rates of writhing reaction were significantly increased. The conclusion is drawn that the ethyl acetate extract of broccoli has certain analgesic effect on mice， and the analgesic effect of 2.00 g/kg is the best. Tramadol hydrochloride has significant analgesic effect.

Key words：Weigela florida； ethyl acetate extract； analgesic effect