斯钙素-2在子宫内膜癌中的表达

付长红，陆晓媛

作者单位：1徐州医科大学附属医院妇产科，江苏 徐州221001；2枣庄市立医院妇科，山东 枣庄277101

子宫内膜癌（endometrial cancer，EC）为子宫内膜上皮来源的恶性肿瘤，是女性生殖系统中常见的三大恶性肿瘤之一。绝大多数的子宫内膜癌来源于单层上皮细胞。目前发现有多种因素影响到子宫内膜的恶变、进展，包括有不同的癌基因、抑癌基因及转录信号，如甲状腺转录因子-1（TTF-1）、癌相关成纤维细胞（CAFs）、骨桥蛋白等通过参与细胞黏附、信号传导、细胞凋亡等多种病理生理过程，与内膜癌的发.生有着一定的联系。斯钙素-2（stanniocalcin2，STC2）是糖蛋白激素［1］，在人体各组织中均有广泛性表达，参与调节人体多种生理、病理变化过程。近年来对STC2的系列研究证明，STC2对人体多种肿瘤的发生、发展均存在密切关联［2］。STC2能够通过调控细胞增殖而促进结肠、直肠癌细胞的侵袭和转移［3］。胃癌病人的血液、癌组织细胞中的STC2表达明显升高［4］，对胃癌诊断的敏感性超过了CA199［5］和 CEA。食管鳞癌、肝癌［6］、喉癌、卵巢癌［7］、非小细胞性肺癌、鼻咽癌［8］、前列腺癌、宫颈癌［8］、神经母细胞瘤等恶性肿瘤均发现存有STC2异常表达。以上研究发现：STC2在组织中的高表达多与肿瘤的恶性程度密切相关，肿瘤倾向于深度浸润、脉管侵袭及淋巴结转移，对预测肿瘤疗效或预后提示价值。

目前，关于STC2在子宫内膜癌中表达的研究报道较少，我们采用半定量RT-PCR检测和蛋白质印迹法检测方法观察STC2在子宫内膜癌中的表达，探讨STC2与子宫内膜癌生物学行为的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取徐州医科大学第二附属医院2017年1月至2018年9月的子宫内膜癌病人50例，年龄范围为45～62岁，年龄（53.8±5.6）岁，其中＞50岁的病人32例，占64%；FIGO分期为Ⅰa期5例，占10%，Ⅰb期8例，占16%，Ⅱ期10例，占20%，Ⅲ期20例，占40%，Ⅳ期7例，占14%；病理类型为鳞癌5例，占10%，腺癌45例，占90%，其中腺癌45例中，病理呈高分化有15例，占33%，中分化16例，占36%，低分化的14例，占31%；盆腔淋巴结发生转移的27例，占54%，淋巴结无转移的23人，占46%。所有样本均于手术离体后癌灶中心组织及癌灶周围3 cm的正常组织，生理盐水冲洗后切取，约为花生粒体积大小。为避免取样组织被RNA酶破坏，获得样品在组织离体后的10 min内装入冻存管。

1.2 方法

1.2.1 半定量RT-PCR检测STC2 mRNA在中的表达 取50～100 mg子宫内膜癌组织研磨均化，4℃下离心分层出STC2 mRNA。再将mRNA沉淀、洗涤、重溶、-80℃超低温保存。抽提处于对数快速生长期的子宫内膜癌细胞，使用Trizol与组织RNA抽取类似，收集提取样本总RNA。采用DNase I处理去除基因组DNA。每个样本取2 μg的总RNA，用M-MLV Reverse Transcriptase二步法逆转录合成cDNA。以Taq酶体系PCR扩增STC2基因，引物序列：STC2：F-ATGCTACCTCAAGCACGACCFF，R-TCTGCTCACACTGAACCF；GAPDH：F-FTGTTCGACACTCCTCCGTCAGCFF，R-FCAAATCCCCCAATACGACGTT。PCR条件均为94℃预变性5 min；94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，共34循环（β-actin为29循环）；72℃延伸5 min。取出扩增后的PCR产物，以β-Actin作为内对照，2%琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物。

1.2.2 蛋白质印迹法法检测STC2蛋白在子宫内膜癌中的表达 取200 mg子宫内膜癌样品及周围正常组织分别粉碎匀浆、离心，取上清液-80℃超低温冰箱保存。配置浓度为2 000 μg/mL和1 600 μg/mL的BSA溶液设为A液B液，按照50∶1混匀，各取100 μL分别和5 μL正常组织蛋白及5 μL内膜癌样品蛋白混匀，对蛋白定量绘制蛋白含量标准曲线推算样品浓度。配置5%浓缩胶，取两种样品沸水加热使蛋白质变性、上样、电泳进行蛋白质印迹法检测后用聚偏二氟乙烯膜转膜。将转膜后的PVDF膜与兔抗人STC2抗体封闭进行免疫反应约7 h。取出PVDF膜X光底片显色，拍照成像。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行统计学分析；计量资料用s表示，两组间均值比较用t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 子宫内膜癌组织STC2 mRNA的表达增加在这50例子宫内膜癌组织中STC2 mRNA的相对表达值为2.45±0.27，而癌旁组织仅为1.19±0.13，两组差异有统计学意义（t＝28.5，P＝0.0034）。

2.2 子宫内膜癌中STC2蛋白表达增加 在50例子宫内膜癌组织中STC2蛋白表达和癌旁组织比较差异有统计学意义（t＝26.4，P＝0.026 6），见图1及表1。

图1 子宫内膜癌病人50例子宫内膜癌组织及癌旁组织中STC2蛋白的表达

表1 子宫内膜癌病人50例子宫内膜癌组织及癌旁组织蛋白质印迹法条带灰度值检测结果/s

表1 子宫内膜癌病人50例子宫内膜癌组织及癌旁组织蛋白质印迹法条带灰度值检测结果/s

注：STC2为斯钙素-2，GAPDH为内参值；两组比较，at＝26.4，P＝0.026 6

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2.3 与子宫内膜癌各项临床病理参数的相关性本研究对50例样本中STC2的表达与子宫内膜癌病人临床病理参数的相关性进行分析。计算结果显示，在病人年龄（≤50岁或＞50岁）、病理类型腺癌（鳞癌）方面，STC2高表达组与低表达组差异无统计学意义（P＞0.05）；关于FIGO分期＞Ⅱ期、病理为低分化癌及盆腔淋巴结转移阳性者［10］，STC2的高表达组与低表达组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表2。

3 讨论

子宫内膜癌是严重危及女性生命健康的恶性肿瘤。目前子宫内膜癌的诊治方案［11］比较成熟，经过规范的手术辅以放化疗和孕激素综合治疗，病人通常能够取得较满意的治疗效果［12］。随着人类对肿瘤研究的不断深入和临床运用，肿瘤标志物已不单单局限于对肿瘤的诊断、复查和随访，在治疗方案的选择、疗效的判定、存活率的预测等方面也逐渐发挥着重要作用［13］。较常用的肿瘤标志物有CEA、CA199、CA125等，对于子宫内膜癌的术前病理分期诊断的帮助、治疗方案的指导及术后病情监测等方面敏感性较低。寻找子宫内膜癌新的、特异性的肿瘤标志物是研究的热点。

表2 斯钙素-2表达与子宫内膜癌临床病理参数相关性/例

STC2是1998年从人类骨肉瘤cDNA文库中克隆出的第二个STC基因，其编码为302个氨基酸。多项研究显示STC2 mRNA和STC2蛋白在肿瘤组织中高表达［14］，及肿瘤组织的侵袭、病人预后等存在相关性［15］。STC2目前在肿瘤细胞的作用机制尚不清楚，但研究表明在许多肿瘤中发挥促癌细胞生长增殖、促癌侵袭转移的作用［16］。高表达多与肿瘤的恶性度相关，并有较好的预后提示价值。

本研究发现子宫内膜癌组织的STC2 mRNA及STC2蛋白表达明显高于相应癌旁组织。肿瘤的相关性分析显示子宫内膜癌病人多项临床的病理参数中，STC2表达与年龄［17］、鳞癌无显著相关性（P＞0.05）；但是与FIGO分期、病理分化程度及盆腔淋巴转移存在显著相关。本次研究的27例发生淋巴结转移子宫内膜癌病人中，STC2阳性表达率为70.37%；病理呈中低分化的STC2阳性表达为88.24%。故FIGO分期高，病理呈低分化，存在盆腔淋巴结转移，均提示子宫内膜癌侵袭能力较强，肿瘤复发可能性大和预后的生存期短，故高表达的STC2间接预示病人预后不良。

综上，本研究显示STC2在子宫内膜癌中的表达高于其癌旁组织，且与子宫内膜癌的病理分期，病理分化程度及是否存在淋巴结转移具有一定关联性，提示病人可能存在不良的预后。本研究样本量少，有一定的局限性，且对STC2在子宫内膜癌中的表达相关性及其机制也尚待进一步研究。