连翘木脂素类成分的色谱学研究进展

聂承冬 李攀越 江园园 周文洁 谷东皓 阎新佳 温 静*

（1、哈尔滨商业大学 药学院，黑龙江 哈尔滨150076 2、黑龙江省预防与治疗老年病药物研究重点实验室，黑龙江 哈尔滨150076）

连 翘（Forsythia suspensa （Thunb.） Vahl） 为 木 犀 科（Oleaceae）连翘属（Forsythia）植物，是临床常用中药，具有清热解毒，消肿散结之功效，常用于风热感冒、温病初起、温热入营、热淋尿闭、痈疽、瘰疬、乳痈、丹毒和肿毒等症[1-3]。目前，从该植物中，已分离出的木脂素有46 种以上[4]。木脂素是连翘的特征性物质，具有抗炎、抗氧化、抗癌、抗病毒和抗过敏等作用。连翘中木脂素的分离检测方法有薄层色谱法（TLC），高效液相色谱法（HPLC）等，本文对这些连翘的木脂素色谱学研究方法进行了总结，为后人进一步研究连翘木脂素提供更好的科学依据。

1 薄层色谱法（TLC）

1.1 TLC 分离木脂素的方法

在TLC 中，是在覆盖有固定相薄层的板上进行分离的，其中流动相通过毛细管力沿板移动。通常，TLC 技术仅用于分离和检测植物提取物中低或非挥发性成分。TLC 板由玻璃或氧化铝制成，并覆盖有固定相，例如硅胶，或与十八烷基，辛基，苯基，联苯基，硝酰基或五苯基等联用。TLC 可用于NP，RP，HILIC，OPTLC，HPTLC 色谱系统[7]。可以使用等度洗脱，逐步洗脱或梯度洗脱以及一维或二维分离模式进行分离。1D-TLC 使用常规的流动相进行分离，适用于分析具有极性相差较大的相对非复杂样品。因此，可能不足以分离复杂的植物提取物或具有类似特性的化合物的混合物。对于此类应用，使用正交系统的2D-TLC 分离技术是有利的，因为可以对每个维度应用不同的色谱特性和保留机制。1D-TLC 的分离效率可通过逐步梯度洗脱来提高，在该梯度洗脱中，相继应用洗脱效率不断提高的流动相，但都是仅在单个方向上进行分离。在分离中值得注意的是，在分离步骤之间更改流动相以除去残留的吸附溶剂之前，都必须先干燥2D 和1DTLC 板[5]。尽管TLC 最近被用于各种植物中分离木脂素化合物，但目前从连翘中分离木脂素的专用的TLC 方法还有待进一步研究。

1.2 TLC 检测木脂素的方法

TLC 检测木脂素的方法以木脂素Schizandrin A，Schizandrin B 为例。张敏等人对Schizandrin A，Schizandrin B 等成分进行了薄层色谱鉴别[6]。实验种分别用了四种展开剂：正己烷- 乙酸乙醋（10：1）、环己烷- 乙酸乙醋（10：1.5）、正己烷- 乙酸乙醋（7.5：2.5）、正己烷- 乙酸乙醋（8.5：1.5），比较结果显示 采用正己烷-乙酸乙醋（10：1）为展开剂效果较为满意。在检测分离相关木脂素时可以已此为参考。还可以通过使用HPTLC 或OPTLC 方法来改善TLC 的选择性，这可以缩短分离时间，并可以改善峰形，使分离出的化合物分离度更好[7]。

1.3 TLC 指纹鉴别木脂素

指纹分析是经过WHO 批准的工具，可用于质量评估和标准化用于天然药物和中草药制剂生产的植物材料。色谱指纹图谱用于比较同一物种不同品种，植物生长不同阶段的植物材料，或评估在不同地理或大气条件等条件下生长的影响。TLC 指纹法可用于确定：样品之间的相似性和差异，样品完整性或存在特征成分（选定标记）。它经常与先进的统计方法和化学计量学分析方法相结合。

2 高效液相色谱法（HPLC）

2.1 HPLC 分离木脂素

HPLC 装置可以与根据分离的化合物的不同物理化学性质操作的各种检测器联合使用，如UV-VIS 检测器等。但是，由于木脂素可能与提取物其他成分的光谱重叠，所以部分检测器可能受限制。所以基于MS 的检测方法效果更好些。MS 光谱分析能够对木脂素化合物进行初步检测，结构分析和鉴定。用于分离连翘提取物的现代分析方法如LC-MS 系统等，可用于进行提取物的分析和鉴定。LC-MS 技术常用于木脂素的检测和表征，例如通过多种离子化技术（EI，CI，FAB-MS 和ESI-MS / MS 等）获得的其碎片离子以及其特征结构，来证明其存在木脂素。

2.2 HPLC 中木脂素检测和鉴别的方法

HPLC 法分离木脂素，以梁军等人，使用HPLC-FLD 分离为例[8]。HPLC-FLD 色谱柱为 采用色谱柱Dima C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相甲醇（A）- 水（B）梯度洗脱系统，流速1.0mL/min。木脂素类成分荧光检测激发波长为270nm，发射波长为340nm；咖啡酸苯乙醇苷类成分激发波长为320nm，发射波长为460nm。还有NP-HILIC 与RP-HPLC 等多种联用方法来分离木脂素。在检测分离相关木脂素时可以已此为参考。

3 结论

连翘的富含木脂素的提取物是非常复杂的化合物混合物。由于木脂素的结构相似性和极性不同，使得通过LC 法进行分离成为一项艰巨的任务。此外，由于提取分离时，提取物中存在的其他化合物也表现出相似的极性，对木脂素化合物的分离，鉴定和测定产生了一定干扰。TLC 是一种用于初始选择时，选择分离条件，控制检测萃取、浸出效率，以及初步评估第一步分离后各馏分化学成分定性定量的方法。研究应用二维或多阶段TLC 程序，在木脂素研究中是十分有利的，最终可以通过单次分离步骤就能分离开木脂素化合物和其他化合物。目前，在木脂素分析方向的最佳方法是HPLC 或UPLC 等相关方法，因为这种方法具有更高的效率和分辨率。由于木脂素化合物的特征和复杂的核心结构，建议结合使用基于碎片离子性质的鉴定方法（MS 等）和立体构型测定方法（如CD 谱测定，IM-MS 测定）相结合来精确测定这些化合物。目前，还需要进一步的实验研究来确定连翘中其他含有木脂素的部位（如根、根茎等部分）的最佳分离条件。在开发提取分离木脂素新方法中，环境污染，提取效率低，有机试剂残留等问题需重点考虑，如何有效的进行工业制备规模的纯木脂素化合物的分离也需进一步研究开发。