基于UHPLC-Q-Exactive-MS技术的猪牙皂化学成分分析

韩君

摘要 [目的]定性分析猪牙皂的化学成分组成。[方法]采用UHPLC-Q-Exactive-MS技术，对比相关文献，通过Xcalibur软件分析鉴定猪牙皂中化学成分。[结果]鉴定了猪牙皂中17个化合物，包括3个酚类成分、7个黄酮类成分、7个皂苷类成分。[结论]该方法专属性好、结果可靠，为猪牙皂质量控制及药效物质基础提供参考。

关键词 猪牙皂;化学成分;UHPLC-Q-Exactive-MS;皂苷类

中图分类号 R284.1文献标识码 A文章编号 0517-6611（2020）24-0201-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.24.057

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Chemical Composition Analysis of Gleditsiae Fructus Abnormalis Based on UHPLCQExactiveMS Technology

HAN Jun

（National and Local Joint Engineering Research Center for Key Technology of Chinses Medicinal Composition Granules，Beijing Tcmages Pharmaceutical Co.， Ltd.， Beijing 101301）

Abstract [Objective] Qualitatively analyzed the chemical compositions of gleditsiae fructus abnormalis. [Method]The chemical compositions of gleditsiae fructus abnormalis were analyzed and authenticated by using the UHPLCQExactiveMS technology and comparing relevant documents through the Xcalibur software. [Result]The 17 chemicals were authenticated in gleditsiae fructus abnormalis， including 3 phenolic compounds， 7 flavonoids and 7 saponins. [Conclusion]The good exclusiveness and reliable result of this method provided reference to the quality control and efficacious material basis of gleditsiae fructus abnormalis.

Key words Gleditsiae fructus abnormalis;Chemical composition;UHPLCQExactiveMS;Saponins

豬牙皂为豆科植物皂荚（Gleditsia sinensis Lam.）的干燥不育果实[1]，被《中华人民共和国药典》2020年版收载为常用中药之一，但未见控制其药材的指标性成分，文献中对其化学成分分析主要以总皂苷以及三萜皂苷的苷元齐墩果酸和刺囊酸为主[2-5]，全面化学成分分析鲜见报道。目前，对猪牙皂研究主要为三萜皂苷、黄酮和木脂素[6-8]的提取分离与结构鉴定。该研究用UHPLC-Q-Exactive-MS技术对猪牙皂化学成分进行鉴定，以期为质量控制指标成分的选择和药效物质基础提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

四极杆-静电场轨道肼高分辨质谱仪串联Ultimate 3000型超高效液相色谱系统（美国赛默飞世尔科技公司）;BT25S型电子天平（Sartorius公司）;KQ-300DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

甲醇（国药集团化学试剂有限公司，批号为20190910）;色谱级乙腈（默克股份两合公司，批号为JB097430）;猪牙皂对照药材（上海源叶生物有限公司，批号为Y19N10H103559）。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件。

ZORBAX Eclipse XDB-C18 色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）;柱温为30 ℃;流动相为乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0～15 min，10%～40%A;15～25 min，40%～80%A;25～30 min，80%A;30～40 min，80%～10%A）;流速为0.2 mL/min;进样量为1 μL。

1.2.2 质谱条件。

采用电喷雾离子源（ESI），毛细管电压3 200 V，毛细管温度300 ℃，离子源温度350 ℃，质谱一级采集范围m/z 146～2 200，二级采集范围m/z 50～3 000，S-Lens RF Level 50。

1.2.3 供试品溶液的制备。

取猪牙皂对照药材约22.55 mg，置50 mL三角瓶中，加25%甲醇10 mL，超声处理30 min，滤过，即得。

2 结果与分析

2.1 UHPLC-Q-Exactive-MS分析

取“1.2.3”项下供试品溶液，按“1.2.1”和“1.2.2”色谱质谱条件进行分析，分别得到负离子模式下猪牙皂的总离子流见图1。

2.2 结构鉴定

理论值通过质量计算器获得，根据测定值与理论值二者偏差小于0.005‰，氮律等原则，结合Xcalibur软件的相对分子质量数，质谱一级、二级碎片信息，相关参考文献，共鉴定出17种化合物，包括3个酚类成分、7个黄酮类成分、7个皂苷类成分。被鉴定的化学成分的分子式、二级碎片离子、结构类型等信息见表1。

2.3 化合物的质谱裂解特征分析

2.3.1 黄酮类成分的鉴定。

该研究共分析鉴定了7个黄酮类化合物。以化合物5为例，ESI-模式下准分子离子为m/z 609.185 1[M-H]-，经过碰撞脱去一分子鼠李糖形成碎片离子m/z 463.966 0[M-H-C6H10O4]-，再脱去一分子葡萄糖形成碎片离子m/z 301.071 9[M-H-C6H10O5- C6H10O4]-，丢失B环和C环并发生重排后形成碎片离子m/z 151.002 7。根据文献[13]报道和裂解碎片特征判断，该化合物可能为新橙皮苷，该化合物的MS/MS图见图2，可能的裂解方式见图3。

2.3.2 皂苷类成分的鉴定。

皂苷类化合物是猪牙皂中的特征性成分，该研究共分析鉴别了7个皂苷类化合物。以化合物16为例，ESI-模式下准分子离子为m/z 1 635.778 7[M-H]-，脱去一分子H2O形成碎片离子m/z 1 617.770 3[M-H-H2O]-，再脱去C10H16O3形成碎片离子m/z 1 453.686 2[M-H-C10H16O3-H2O]-，再脱去一分子H2O形成碎片m/z 1 435.673 5[M-H-2H2O-C10H16O3]-，再脱去C22H35O16形成碎片离子m/z 881.490 6[M-H-C22H35O16-2H2O-C10H16O3]-，再脱去C16H27O13形成碎片离子m/z 455.353 8[M-H-C16H27O13- C22H35O16-2H2O-C10H16O3]-。

根据文献[5]报道和裂解碎片特征，判断该化合物可能为皂荚皂苷B，该化合物的MS/MS图见图4，可能的裂解方式见图5。

3 结论

采用UHPLC-Q-Exactive-MS技术，利用质谱的高分辨、高灵敏度等特点，对猪牙皂中化学成分进行研究，鉴定出17个化合物，明确了猪牙皂中黄酮类以及皂苷类成分的质谱裂解规律，为其药效物质基础及质量控制指标成分的选择提供了数据支撑。

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