关黄柏和川黄柏黄酮含量及抗氧化性的比较分析

李铁纯，潘慧敏，叔思宇，王嘉琦，宁彩琳，回瑞华

(鞍山师范学院 化学与生命科学学院,辽宁 鞍山 114007)

关黄柏为芸香科植物黄檗的干燥树皮，主产于长江以北的辽宁、吉林、黑龙江、内蒙古、河北等省；川黄柏为芸香科植物黄皮树的干燥树皮，主要产于长江以南的四川、贵州、云南、广西、湖南等省.关黄柏厚2～4 mm，川黄柏厚3～7 mm.两种黄柏均具有气微、味极苦、嚼之有黏性等特点.

目前关于黄柏化学成分的研究，特别是关于关黄柏中黄酮的报道较多[1-4].黄酮类化合物是一种天然的抗氧化剂，具有清除人体中超氧离子自由基、抗衰老、增加机体免疫力的生理活性作用.通常认为关黄柏、川黄柏有着相同的功效和组成，而关于关黄柏和川黄柏中黄酮含量和抗氧化性的比较研究少见报道.

1 仪器与材料

1525-2996液相色谱仪(美国Waters公司);KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司);IFFM-D型流动注射化学发光仪(西安瑞迈电子科技有限公司);AL-204 电子天平(梅特勒-托利多);HX-200A型华西高速中药粉碎机(浙江永康溪岸五金药具厂).

甲醇(色谱纯)、乙腈(色谱纯)、磷酸(色谱纯)、无水乙醇(分析纯)、盐酸(分析纯)、邻苯三酚(分析纯，贵州遵义市第二化工厂)，碳酸钠及碳酸氢钠 (分析纯)，3-氨基苯二甲酰肼(分析纯，陕西师范大学)，水为二次蒸馏水.芦丁(标准品，中国药品生物制品鉴定所).关黄柏和川黄柏购于鞍山某药房，粉碎后过孔径0.45 mm筛备用.

2 方法与结果

2.1 关黄柏和川黄柏中黄酮的提取

分别取2.00 g川黄柏和关黄柏样品于锥形瓶中，精密加入甲醇与15%盐酸混合溶液(4∶1(V∶V))50 mL，水浴回流1 h，放冷至室温，滤液过0.45 μm滤膜备用.

2.2 关黄柏和川黄柏中黄酮的测定

2.2.1 芦丁标准储备液 准确称取芦丁标准品10.4 mg于50 mL容量瓶中，以80%乙醇溶液定容至刻度，作为贮备液.

2.2.2 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇与0.08%磷酸混合溶液(35∶65(V∶V));检测波长280 nm；柱温30 ℃；流速1.0 mL/min；进样量10 μL.

2.2.3 测定方法的确定 精确移取经2.1制备的川黄柏和关黄柏样品溶液，按2.2.2的色谱条件进行测定.

再取经2.2.1配制的芦丁标准品溶液在2.2.2色谱条件下进样分析，结果表明：标准品芦丁的保留时间为24.0 min，样品在相同的保留时间出现吸收峰，样品的紫外吸收与标准品芦丁的紫外吸收相同，从而确定可以用芦丁作为黄柏中黄酮的标准品.

图1 芦丁标准曲线图

2.2.4 标准曲线的绘制 将2.2.1芦丁标准储备液用甲醇精确稀释至2.6,5.2,10.4,20.8,41.6 μg/mL并定容至10 mL容量瓶.

本文针对机动目标跟踪，基于降维CKF，线性简化CKF [9]，采用时变Markov转移概率IMM算法，设计了交互式多模型降维容积卡尔曼滤波算法( IMM-RDCKF)，提高了算法的鲁棒性和估计精度。仿真表明，计算量约为IMM-CKF的一半，仅比IMM-EKF增加约30%，目标跟踪精度提升，便于工程应用。尤其是匀速运动速度估计精度提升约27%。这对于预警探测、火力控制、指挥控制等军事应用领域具有非常重要的意义。

按2.2.2色谱条件，分别进样测定，以样品浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标作图，线性回归方程和标准曲线如图1所示.

其线性回归方程为y=268 585x-10 434,相关系数γ=0.996 9.

2.2.5 精密度试验 按2.2.2的色谱条件，对同一浓度的芦丁标准品溶液进行7次测定，得到其在测定波长下的峰面积，求其变异系数为0.63%.

2.2.6 稳定性试验 取按2.1提取的川黄柏和关黄柏提取液，过0.45 μm滤膜后，在2.2.2色谱条件下分别在1，2，3，4，5，6 h间隔内进行HPLC测定，由色谱峰相对峰面积计算其RSD为1.06%，结果表明该方法稳定性良好.

2.2.7 回收率实验 按2.2.2的色谱条件，用2.2.1配制的芦丁储备液对关黄柏和川黄柏进行加标实验，分别加入不同量的芦丁标准品，在测定波长下测定峰面积，回收率如表1所示.

表1 回收率实验

由表1可知，川黄柏的回收率为92.4%～106.8%；关黄柏的回收率为90.2%～98.4%.

2.2.8 样品测定 取2.1提取的川黄柏和关黄柏提取液，过0.45 μm滤膜后在2.2.2色谱条件下进样，对样品进行3次平行测定，结果如表2所示.

表2 高效液相色谱样品测定

由表2可知，川黄柏中黄酮含量为0.401 4 mg/g，关黄柏中黄酮含量为0.236 mg/g.

2.3 流动注射化学发光法测定川黄柏和关黄柏的抗氧化性

2.3.1 邻苯三酚-碳酸盐缓冲溶液-3-氨基苯二甲酰肼发光体系的确定 在试管中分别加入5×10-5mol/L的邻苯三酚溶液、pH为9.95的碳酸盐缓冲溶液(含浓度为0.2 mmol/L的3-氨基苯二甲酰肼)，由流动注射化学发光仪测定邻苯三酚-碳酸盐缓冲溶液-3-氨基苯二甲酰肼发光体系的发光[7-8]，测定3次，取平均值进行计算.

2.3.2 抗氧化性测定及抑制率计算 按2.3.1确定的发光体系,测定一系列浓度川黄柏和关黄柏样品溶液抑制后的发光,分别测定3次,同样取平均值进行计算.发光强度以计数表示.以邻苯三酚-碳酸盐缓冲溶液-3-氨基苯二甲酰肼发光体系的发光强度为空白发光峰值,可计算出加入样品后抑制发光的程度.

抑制率%=(空白发光峰值-加样品后的发光峰值)/空白发光峰值×100%

2.3.3 抗氧化性的测定

2.3.3.1 样品溶液的配制 分别称取经粉碎过筛处理的川黄柏和关黄柏样品1.00 g，加入25 mL水，于室温水浴超声15 min，过滤，滤液用水定容至50 mL.

2.3.3.2 样品抗氧化性的测定 从2.3.4配制的样品液中吸取不同梯度量的样品于25 mL容量瓶中，用水定容至刻度，配成不同浓度的测定液.在邻苯三酚-碳酸盐缓冲溶液-3-氨基苯二甲酰肼发光体系中测定样品的抗氧化性结果如图2、图3.

图2 关黄柏抗氧化性测定 图3 川黄柏抗氧化性测定

由图2可知，川黄柏抑制率50%对应的浓度为0.64 mg/mL.由图3可知，关黄柏抑制率50%对应的浓度为0.76 mg/mL.

3 讨论

实验表明川黄柏和关黄柏中都含有丰富的黄酮类化合物，川黄柏中黄酮含量为0.401 4 mg/g，关黄柏中黄酮含量为0.236 mg/g，川黄柏中黄酮含量大于关黄柏中黄酮含量.

黄酮类化合物是一种天然的抗氧化剂，由于川黄柏和关黄柏中都含有丰富的黄酮，因此它们都具有较强的抗氧化性能.经测定，川黄柏抗氧化性的IC50(抑制率为50% 时的溶液的浓度)为0.64 mg/mL，关黄柏抗氧化性的IC50为0.76 mg/mL，川黄柏抗氧化性大于关黄柏抗氧化性.