甲酸熏蒸对大蜂螨致死剂量及对工蜂的安全性

何洁 何楠 黄少康│文

福建农林大学，福州350002

大蜂螨是西方蜜蜂的主要体外寄生虫。它寄生幼虫、蛹、成蜂，吸食血淋巴，传播多种蜜蜂病毒，导致免疫力下降，化蛹率低，成蜂残翅，体质虚弱，蜂群繁育力下降，越夏越冬失败，直到蜂群衰亡[1,2]。控制蜂螨危害是西方蜜蜂饲养过程最重要的工作内容。现有控制大蜂螨的方法常见有化学、物理方法，以及去蜂群管理法等[3,4]。氟胺氰菊酯（fluvalinate），氟氯苯氰菊酯（flumethrin），以及双甲脒（amitraz），蝇毒膦（coumaphous），溴螨酯（bromopropylate）等化学杀螨剂杀螨快速，专一性好，但这些亲酯性药物长期使用后，在蜂蜡中残留而污染蜂蜜等蜂产品[5]，而且蜂螨也会产生抗性。比如，氟胺氰菊酯（螨扑）自1995年引入我国，经20多年的使用，蜂螨对氟胺氰菊酯的抗药性显著提高，杀螨剂量已提高十倍，但效果却大不如前。另一类天然有机物也常用于杀螨，如草酸、甲酸、麝香草酚、薄荷醇等，它们的水溶性特点使之不易在蜂蜡中残留，蜂螨尚未见产生抗性，在许多国家广泛使用[6]。

甲酸治螨始于1980年。国外许多研究者都曾研究过甲酸在蜂群中或离群状态下的杀螨作用[7]。在美国及欧洲，它被封包于吸附材料内，直接用于蜂群内的蜂螨防治[8]。由于我国杀螨剂用药历史，以及蜂和螨的地域性差异，对我国大蜂螨，甲酸的杀螨效果还缺乏研究，因此，我们以福州意蜂及其寄生的大蜂螨为材料，对甲酸熏杀剂量和效果进行了测试，以供养蜂实践参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 意蜂：意蜂由福建农林大学蜂学学院蜂场提供。

1.1.2 材料与仪器：甲酸（浓度＞88%，分析纯），一次性透明塑料饭盒（300ml），指形管，酒精灯，可调整式定量移液器等。

恒温恒湿箱（HPX-25085-111，上海新苗医疗器械制造有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 甲酸对大蜂螨的熏杀作用：

（1）大蜂螨的获取：提取大蜂螨危害严重的意蜂老熟子脾于恒温恒湿箱（35±1℃，50±10%RH）中羽化，将出房24h时，随机选取带螨工蜂装入用作熏蒸容器的一次性透明塑料饭盒中（带盖，盖住严实不漏水），每盒30只工蜂，其中至少带有15只大蜂螨。

（2）甲酸熏蒸：在预试验的基础上，设置6.3μl（0.021μl/ml），12.5μl（0.042μl/ml），19μl（0.063μl/ml），25.2μl（0.084μl/ml）4个浓度，以25.2μl纯水为对照组，每个处理设置4个重复。

将相应量的甲酸或纯水装入指形管中，将管插入塑料饭盒盖子上，用酒精灯加热指形管，使甲酸全部蒸发，计时5min，撤去指形管，再将盒子放入恒温恒湿箱（35±1℃，50±10%RH）中，1 小时后统计大蜂螨死亡率，并观察记录初羽化工蜂的死亡情况。

大蜂螨死亡率=死亡螨数（只）/螨总数×100%

图1 甲酸熏蒸大蜂螨的熏杀死亡率

图2 甲酸熏蒸5min后意蜂成年工蜂的累计死亡率

1.2.2 甲酸对意蜂成年工蜂的熏杀作用：从3 群意蜂群中随机抓取工蜂，每群取3 盒，每盒30～50 只工蜂，将它们分入试验组和对照组中，使得每个处理组的3 个重复均来自不同蜂群。甲酸熏蒸处理5min，然后将工蜂转入透气的饲养盒，再放入恒温恒湿箱（30±1℃，50±10%RH）正常饲养，每天清理和统计死亡工蜂，每2 天更换一次50%蔗糖液，连续观察记录14 天。

1.3 数据处理

用SPSS软件对死亡率进行平方根反正弦数据转换后，再进行方差分析，比较各处理间的差异显著性。

2 结果与分析

2.1 甲酸熏蒸对大蜂螨的熏杀作用

用不同浓度的甲酸熏蒸蜂体上携带的大蜂螨5min后，结果表明，当甲酸剂量达0.063μl/ml及以上时，1h后大蜂螨的死亡率均达100%；当浓度为0.042μl/ml时，平均死亡率达60%以上；当浓度为0.021μl/ml时，平均死亡率为20%以上（图1），各组死亡率之间差异显著（P=0.0003）。随着甲酸剂量增加，大蜂螨死亡率增加，呈明显的剂量效应关系。

2.2 甲酸熏蒸对意蜂成年工蜂的安全性

在2.1的测试中，来自大蜂螨严重感染的初出房工蜂，经所用4个浓度的甲酸熏蒸5min后，初出房工蜂均全部被击倒，而对照正常，说明甲酸熏蒸对蜂螨寄生严重的初出房工蜂有较强的致死作用。

对随机取自蜂群中的工蜂熏蒸结果显示（图2），在14d内，当甲酸浓度低至0.013μl/ml时，平均累计死亡率为5.7±8.2%，与对照（6.2±3.8%）无显著差异（P＞0.05）；浓度达0.05 μ l/m l 时，平均累计死亡率为26.8±41.9%，3个重复中的2盒，14d时，工蜂平均死亡率仅为5.3%和0；但第3盒处理1d后，52只有10只死亡，死亡率19.2%；9d时，又有23只突然死亡，9d的累计死亡率达75% ，与前2盒有较大差异。说明不同蜂群的工蜂对甲酸的耐受程度有较大差异。推测某些工蜂的生理病理特征使之对甲酸特别敏感，具体原因值得进一步研究。

3 讨论

甲酸具有很好的抑菌性，亦可用于杀虫，在农业上有广泛应用。甲酸杀螨不像氟胺氰菊酯等杀螨剂有良好的选择性，除主要用于熏杀无子时蜂体上的螨，或无蜂时封盖子脾内的螨外，还在蜂群中使用，但使用不当会伤及工蜂、雄蜂、幼虫以及蜂王[9]。为减少危害，就必须选择能杀螨而不伤蜂的剂量，明确安全的使用剂量，指导养蜂实践。

我们的试验表明，0.063μl/ml的甲酸熏蒸5min，可杀死全部大蜂螨。另一组试验也证明，处理2.5min，100%的杀螨效果（未发表数据）。尽管如此，0.05μl/ml的甲酸熏蒸仍可能导致部分工蜂死亡。Marine等（2006）试验显示，一个标准箱体内用50%的甲酸85ml，放在蜂群顶部自然熏蒸一天，可熏杀蜂体上90%～95%的大蜂螨，但有百余只幼虫和蛹被拖出，0%～25%的蜂群丢失蜂王。因此，甲酸熏蒸对蜜蜂仍会造成少量损伤。甲酸自然熏蒸使用简便，缺点是药剂使用剂量大，纯甲酸剂量相当于42.5ml/箱，大量药物剩余，而按本试验结果用的甲酸汽化熏蒸仅需3.3ml/箱，相差16倍。自然熏蒸在蜂群中药物浓度不均匀，剩余的强酸废弃物还可能污染环境。相比而言，甲酸汽化熏蒸可以显著减少使用剂量，提高处理效率，但需要使用汽（雾）化器。但甲酸杀螨的同时，仍会造成部分意蜂死亡，因此，减少单次使用剂量，缩短处理时间（如2.5min），增加熏蒸次数，有望减少对蜜蜂的损伤。对于断子期蜂群治螨应该是一种较好的选择，具体参数仍需进一步测试。

目前我们只检测了甲酸熏蒸对本地夏季意蜂工蜂的影响，观测时间2周，检测数量有限，其他地区和季节的工蜂由于健康背景状况的差异，耐受损伤的程度可能还会有差异。此外，由于甲酸对人皮肤、呼吸道等均有强烈刺激作用，使用时要注意做好防护。