同时接种PCV2和PRRSV疫苗：自然感染猪的特定免疫反应和临床保护效果

刘国民 宋庆庆 林文耀

摘  要：猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus type 2，PCV2）被认为是猪发生断奶后多系统衰竭综合征（Post-weaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS）的病原体，PMWS也是全球主要的猪病之一。PCV2还与其他统称为猪圆环病毒病（Porcine Circovirus Diseases，PCVD）的发生有关。然而，在研究PCVD的发展和对相关疾病的全面了解上需要考虑多方面的因素。流行病学调查表明，在引起PCVD的病原体中，最常见的包括猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV）、猪流感病毒（Swine Influenza Virus，SIV）、猪细小病毒（Porcine Parvovirus，PPV）、副猪嗜血杆菌、放线杆菌、胸膜肺炎菌、猪链球菌和猪肺炎支原体。

关键词：PCV2疫苗;免疫接种;净化

中图分类号：S854.5+9 文献标志码：C 文章编号：1001-0769（2019）11-0073-05

具体来说，与仅感染猪圆环病毒2型（Porcine Circovirus type 2，PCV2）的仔猪比较，试验感染PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV）的仔猪表现为PCV2的复制和分布增强，临床症状和病变更严重。

田间流行病学数据进一步验证了这些试验结果。一项回顾性调查显示，发生断奶后多系统衰竭综合征（Post-weaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS）的病例中有51.9%可以检测到PRRSV。免疫组化、血清学和分子学研究都证明了暴发PMWS的猪场存在PRRSV。保育猪同时感染猪细小病毒（Porcine Parvovirus，PPV）和PRRSV会增加PMWS的发病率。这些结果进一步证实共同感染PCV2和PRRSV或PPV是引发猪圆环病毒病（Porcine Circovirus Diseases，PCVD）的重要原因。

目前对PCVD的防控主要从管理策略、控制共同感染和疫苗接种等方面入手，其中疫苗接种是最主要的手段。从田间数据来看，所有商用PCV2疫苗都能降低猪的死亡率和淘汰率，显著提高平均日增重，同时减少猪群的交叉感染。研究报道，PCV2疫苗能减少病毒血症载量，缓解病毒诱导的特定淋巴病变，大部分已发表的相关文章还描述了它的体液免疫作用。Martelli等對田间条件下细胞介导的免疫应答在控制PCV2感染和其他相关疾病中的机制进行了研究。

在PRRSV的感染过程中，体液免疫和细胞免疫同时存在，但两者在保护机体和消除病毒的机理上仍有矛盾。

在之前的文章中我们研究了接种猪和非接种猪自然感染PRRSV-1野毒株后的免疫应答和临床变化。结果显示接种减毒活疫苗（Modified Live Virus，MLV）具有一定的临床保护作用，整体预防率是72.0%。

当前研究旨在田间条件下评估同时或单独接种PRRSV疫苗和PCV2疫苗的猪与非接种猪的临床表现、死亡率和平均日增重差异。用于试验和接种计划的疫苗都经过了实验室和田间检测，然而，目前还没有同行评议的文章描述两种疫苗同时使用的效果。此外，考虑到上述两种病毒和免疫系统之间的复杂的相互作用，本研究通过检测接种后和自然感染后的总抗体和特异性IFN-γ分泌细胞（Secreting Cells，SC）来确定体液免疫和细胞免疫的变化。

1  结果

具体试验结果见图1～图10和表1。

2  讨论和结论

本研究探索了一种改良的PRRSV-1活疫苗和一种PCV2基因型亚单位疫苗同时接种的效力，包括在保育/育肥期间感染PRRSV和遭受PCVD影响时在杆状病毒系统中衣壳蛋白的表达。本研究还对体液免疫和细胞免疫方面做了研究。两种疫苗的同时使用显示了其在临床表现上（发病率减少）和生产力上（平均日增重提高和死亡率降低）的优良成果。农场动物暴露于各种病原体（如PCV2、PRRSV和猪肺炎支原体等）是诱发PCVD的主要因素。在本研究中，与PRRSV感染相关的临床症状出现在8～16周龄猪上，而PCV2感染在15月龄猪上出现。在所有组别中，根据两个时间段内两个毒株（PRRSV和PCV2）病毒血症的出现来判断发病率。

在仔猪3周龄同时接种1头份PRRSV-1 MLV和PCV2疫苗可以减少疾病的发病情况。实际上，该方法的预防分数（PF）为40.4。另外两种分别接种的方法，即B组和C组的预防分数分别为22.0和0.5。

接种组和对照组的平均日增重和其他结果的显著差异与之前单独接种PRRS疫苗和PCV2疫苗的研究一致。

另外，疫苗接种减少了整体的死亡率，这些显著差异与猪死亡数减少有关，尤其是并发PCV2病毒血症和出现PCVD相关症状时。本研究结果显示接种PRRSV疫苗和PCV2疫苗的3周龄猪的死亡率比未接种猪的低3倍。

接种不同疫苗对受感染猪的比率和样猪血液中PRRSV含量无影响。甚至与未接种疫苗的C组和D组相比，接种PRRSV疫苗的A组（同时接种PCV2疫苗）和B组（仅接种PRRSV疫苗）也没有明显缓解病毒血症。该结果与Martellia等的田间试验数据一致，但与Labarque等和Martelli等的实验室数据相反，在实验室条件下，对PRRS接种MLV疫苗可持续降低病毒持续时间以及在一些特殊情况下减少病毒血症猪的数量。

根据每毫升血液中PCV2的含量，将感染猪分为亚临床感染（小于106个DNA拷贝）、疑似感染（介于106～107个DNA拷贝）和PCV2相关疾病（大于107个DNA拷贝）。

另外，该分类可用于预测预后，通常高滴度PCV2（大于107个DNA拷贝·mL-1）的猪预后不良。田间条件下接种PCV2疫苗的仔猪的显著特征是能减少受感动物的比例和受感动物体内的病毒含量。基于qPCR的方法是监测疫苗功效最实用的工具，因为它可以从活体动物上获取数据。目前的数据明确显示接种PCV2疫苗或者其与PRRSV活疫苗共同接种可以明显减少病毒血症动物的比率和受感动物体内的病毒含量。这种减少可以从平均日增重的提高和死亡率的降低看出来。

PRRSV的自然感染只在疫苗接种后很短时间内发生，而且对血清转化有些影响。

所有受检动物在免疫接种时的qPCR检测都呈PCV2阴性，这极有可能是母源抗体的影响。然而，给仔猪接种PCV2后无论母源抗体有多少都会引起血清转化。因此，在大约  10周龄（免疫接种6周后）达到顶峰后，保护作用开始下降。事实上，在16周龄后所有接种PCV2疫苗的动物都有了明显的血清转化功能，并且基于临床证据有了一定的保护力。相反，对照组和B组（仅接种PRRSV疫苗）的保护作用逐渐降低，在几周内便达到了一个较低的水平。在感染后期，即18周龄时，本研究显示未接种动物都没有受到保护。这些结果证实了高母源抗体浓度不会干扰单剂量PCV2疫苗或PRRSV/PCV2疫苗同时接种诱导的主动免疫，这两种方法都适用于血清反应阳性的仔猪，即便在接种疫苗后4～5月发生感染也能获得不错的保护作用。

在本研究中，我们描述了由PRRSV疫苗和PCV2疫苗接种诱导的特异性细胞介导免疫应答和随后的田间感染。

与之前描述的田间自然感染一样，与未接种的猪相比，接种PRRSV疫苗的猪在感染期间IFN-γ SC的含量更高，免疫应答更强。PRRSV自然感染出现于接种4周后，这可能是因为疫苗本身干扰了主动免疫的作用。

本文证明使用单剂量PCV2疫苗（C组）或与PRRSV疫苗共同使用（A组）在接种2～3周后会诱导PCV2特异性的细胞免疫应答。这也说明PCV2特异性细胞免疫不受残留母源抗体的影响，同时说明该方法可以提高疫苗诱导的保护作用，因为体液免疫无法针对PCV2感染提供全面保护。在未接种PCV2的动物中，IFN-γ SC的增长在感染后开始，这表明PCV2自发感染引起的免疫也会产生适应性免疫。根据Fort等和Martelli等的试验结果，IFN-γ SC应激与病毒复制息息相关，因此IFN-γ SC含量在接種动物中保持在一个稳定的状态。相反，在对照组中病毒血症症状明显、病毒复制快，随着PCV2抗体的增加，   IFN-γ SC的含量也升高。在本试验中，我们很难排除交叉感染，因这种感染影响病毒的复制、临床的异常状态，但是我们关注的两个主要感染（PRRSV和PCV2）发生在不同的时间段，也能通过疫苗接种区分开。

总而言之，本文所描述的PRRSV疫苗和PCV2疫苗同时接种是可以接受的，实际上也没有不良反应的记录。另外，单独接种同种疫苗对体液免疫和细胞介导免疫都没有影响。统计数据发现，该方法可获得良好的免疫应答，获得良好的保护力。同时接种减少了猪的死亡率、PCV2病毒血症和病毒含量，提高了猪的生产性能和平均日增重。跟单独接种PCV2疫苗相比，PRRSV的介入降低了整个试验过程中动物的死亡率。这些结果都有力地证实了本方法可以减少疾病的负面影响，提高免疫应答，增强动物健康，提高增重，降低死亡率和最小化经济损失。

原题名：Concurrent vaccinations against PCV2 and PRRSV： Study on the specificimmunity and clinical protection in naturally infected pigs（英文）