急性白血病RAD50基因多态性研究

吴小乐 谢海啸 吴长春 胡王强 陈坚

[摘要] 目的 研究温州地区急性白血病与RAD50基因多态性的关系。 方法 选取2018年6月～2019年6月来我院血液科就诊治疗的温州地区急性白血病100例患者为研究对象，并将其纳入急性白血病组（n=100）。100名体检正常者为对照组。采用PCR技术确定两组RAD50第4号内含子（rs17166050）基因分型（GA型、GG型），比较健康对照组与急性白血病组基因型频率。 结果 健康对照组与急性白血病组的RAD50（rs17166050）基因型GA型和GG型出现的频率比较差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 温州地区急性白血病与RAD50第4号内含子（rs17166050）的G等位基因的易感性相關。

[关键词] RAD50;PCR;急性白血病;多态性

[中图分类号] R733.71          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2019）29-0029-03

Study on the gene polymorphism of RAD50 in acute leukemia

WU Xiaole XIE Haixiao WU Changchun HU Wangqiang CHEN Jian

The First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou 325000，China

[Abstract] Objective To study the relationship between acute leukemia and RAD50 gene polymorphism in Wenzhou area. Methods 100 patients with acute leukemia in Wenzhou area who were diagnosed and treated in the department of hematology in our hospital from June 2018 to June 2019 were selected as the study subjects， and they were included in the acute leukemia group（n=100）， 100 normal patients receiving physical examinations were included in the control group. The genotypes （GA type， GG type） of RAD50 intron 4 （rs17166050） was determined by PCR. The genotype frequencies were compared between the healthy control group and the acute leukemia group. Results The differences in the frequencies of RAD50（rs17166050） genotypes GA and GG between the healthy control group and the acute leukemia group were statistically significant（P<0.05）. Conclusion Acute leukemia in Wenzhou area is associated with susceptibility to the G allele of RAD50 intron 4（rs17166050）.

[Key words] RAD50; PCR; Acute leukemia; Polymorphism

急性白血病俗称“血癌”，患者骨髓中大量的原始细胞增殖分化蓄积，并广泛浸润人体各器官。急性白血病的发生有多方面的因素，相关研究[1]表明急性白血病的遗传因素与肿瘤的发生有密切关系，遗传因素中基因组的不稳定性起重要作用。Mosor M等[2]发现RAD50基因中部分基因变异与儿童急性白血病的易感性相关。李雯等[3]亦研究表明RAD50的基因多态性可能会增加我国中部地区儿童急性淋巴细胞白血病的患病率。RAD50基因多态性和急性白血病的关系鲜见报道。本文以温州地区100例急性白血病患者为研究对象，探讨急性白血病与RAD50第4号内含子rs17166050（单核苷酸多态性数据库编号为17166050）基因多态性的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2018年6月～2019年6月来我院血液科就诊治疗的浙江温州地区急性白血病初诊100例患者为研究对象，入选标准是经骨髓穿刺确诊为急性白血病患者。急性白血病组中，男53例，女47例，年龄19～55岁。100例急性白血病患者中有29例急性淋巴细胞白血病（ALL），8例急性粒细胞白血病未分化型（M1），11例急性白血病部分分化型（M2），33例急性早幼粒细胞白血病（M3），19例急性单核细胞白血病（M5）。100例体检正常者为对照。对照组纳入标准：一般体格检查及血常规肝肾功能等各项检查正常。对照组中，男51例，女49例，年龄22～58岁。两组所在地均为浙江温州或其周边地区。两组构成基本资料无明显差异（P>0.05）。该项实验通过温州医科大学附属第一医院伦理委员会审批，所有参与人员均签署知情同意书。

1.2 RAD rs17166050基因的多态性分析

急性白血病组治疗前和对照组分别于早晨8点采集患者肘部静脉血2 mL，采用乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）抗凝剂抗凝，充分颠倒混匀。全血标本冻存于-40℃冰箱。DNA提取试剂盒来自北京天根生物有限公司，操作严格按照说明书进行。引物设计分别为：正向5-CGAG AAAT GATC AGTT CTCT TGG-3，反向5-GTTC AATA ACTT AATG GACT ACAA AGT-3，引物由上海桑尼生物科技有限公司合成。PCR总反应量为25 μL，包括PCR Buffer，MgCl2，dNTP，Taq DNA聚合酶和引物。反应条件：95℃预变性5 min，95℃变性30 s，55℃30 s退火，72℃30 s延伸，30个循环。PCR反应扩增目的产物长度为186 bp。PCR产物5 μL在1.2%琼脂糖凝胶上电泳，用Goldview标记PCR产物大小，待电泳出目的条带，割胶提取纯化，在全自动测序仪上进行测序（美国Applera公司，ABI 3730XL型）。

[18] Lee JH，Mand MR，Deshpande RA，et al. Ataxia Telangiectasia Mutated（ATM）Kinase Activity is regulated by ATP.Driven conformationaI changes in the Mrell/Rad50/Nbsl f MRN）Complex[J].J Biol Chem，2013，288（18）：12840-12851.

[19] Fan C，Zhang J，Ouyang T，et al. RAD50 germline mutations are associated with poor survival in BRCA1/2-negative breast cancer patients[J]. Cancer，2018，143（8）：1935-1942.

[20] 严睿成，王君，黄子真. 突变型Rad50蛋白增强放射线对鼻咽癌细胞株CNEl的杀伤作用[J]. 中华耳鼻咽头颈外科杂志，2016，51（10）：746-750.

[21] Rhee JG，Li D，Suntharalingam M，et al. Radiosensitization of head/neck sqaumous cell carcinoma by adenovirus-mediated expression of the Nbs1 protein[J]. International Journal of Radiation Oncology Biology Physics，2007，67（1）：273-278.

[22] Travis HS，John HJ. The MRE11 complex：Starting from the ends[J]. Nat Rev Mol Cell Biol，2011，12（2）：90-103.

[23] Karanika S，Karantanos T，Li L，et al. DNA damage response and prostate cancer： Defects，regulation and therapeutic implications[J].Oncogene，2015，34（22）：2815-2822.

[24] 徐忠偉，王凤梅，王聪聪. 钠钾ATP酶抑制剂通过调节DNA损伤感应复合体Mre11/Rad50/Nbs1的表达诱导肝癌HepG2细胞周期阻滞[J]. 中国药理学通报，2016， 32（3）：323-327.

（收稿日期：2019-04-23）