血红蛋白电泳联合红细胞Hb、MCV、MCH检测对地中海贫血的诊断价值评价

林列坤，卢春生，杨菊红，郑义，王一娜，谭鸿熙

（中国科学院大学深圳医院，广东 深圳 518106）

地中海贫血是遗传性溶血性贫血疾病的一种,广泛分布于世界许多地区，在我国广东，广西，海南，四川多见。重型地中海贫血的治疗较为困难，定期输血和骨髓移植是目前有效的治疗措施，治疗重型地中海贫血对社会和家庭都是重大的负担[1]。因此，有效的孕前及产前筛查，控制地中海贫血的出生缺陷是目前减少重型地贫的发生至关重要及非常行之有效的方法[2,3]。2015年，广东省作为我国地贫的高发地区,开始实行地贫防控试点工作,按国家要求制定了相关技术服务规范。常规实行血红蛋白电泳与血常规的贫血指标 Hb，MCV，MCH联合筛查检测,但该检测规范运用的初筛评价方法因为实行时间较短，仍然有待临床验证。本研究以基因检测为地中海贫血疾病的诊断标准，回顾性汇总分析地贫基因患者血红蛋白电泳HbA2,HbF，血常规检测中 Hb(血红蛋白浓度)、MCV（平均红细胞体积）、MCH（平均血红蛋白含量）多项指标独立及联合应用检测，判断其在地贫诊断中的临床应用，为今后地中海贫血疾病的筛查、防控提供临床依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2018年1月-2018年12月在我院接受产检并经基因检测为地中海贫血的患者696例,基因诊断检测为诊断标准，确诊α地贫患者408例,年龄18~42岁，确诊β地贫患者272例,年龄21~44岁,另α地贫合并β地贫16例，取同时间段非地贫健康孕检夫妇1200例作为对照组。

1.2 临床资料收集 回顾性收集我院以上地贫基因患者及正常对照组检测对象当时检测的血红蛋白电泳和血常规检测中Hb(血红蛋白浓度)、MCV(平均红细胞体积)、MCH(平均血红蛋白含量)的结果。

1.3 方法与仪器 ⑴血红蛋白电泳分析：2ml静脉血EDTA-K2抗凝，采用法国Sebia公司Capillarys 2全自动电泳仪及其配套试剂和质控品进行血红蛋白电泳分析。HbA2正常值为2.5%~3.5%，HbF正常值为<2.0%,HbA2<2.5%或者>3.5%,HbF>2.0%均为异常。

⑵HB、MCV、MCH 检测：2ml静脉血 EDTA-K2抗凝,采用日本Sysmex公司XE-5000全自动血液分析仪,进行血常规检测,检测Hb、MCV和MCH水平,Hb的正常值男性为120~155g/L,女性为110~145g/L,MCV正常值为82~100 fl,MCH正常值为27~34pg,Hb<110g/L,MCV<82fl,MCH<27pg为异常。

⑶地贫基因检测：2ml静脉血EDTA-K2抗凝,采用潮州凯普生物公司生产的试剂盒,采用GAPPCR和PCR+导流杂交法检测α-和β-地中海贫血基因。α-地贫试剂检测包括：3种α地贫基因缺失型（--SEA、-α3.7 和 -α4.2）、3 种 α-地贫基因突变型（CS、QS、WS）。 β-地贫试剂检测包括：17 种突变位点（41-42M，43M，654M，17M，14-15M，-28M，-29M，71-72M，βEM，IVS-I-1M，27-28M，IVS-I-5M，CapM、IntM、31M，-30M，-32M）。

1.4 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件进行分析，计量资料采用（）表示，行 t检验，多组数据比较采用方差分析；计数资料采用百分率表示，卡方检验；P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各地贫基因组 Hb，MCV，MCH，HbA2,HbF 与正常对照组比较 696例地贫患者按基因检测结果分为α地贫组、β地贫组、α合并β地贫组,汇总各组 Hb、MCV、MCH、HbA2、HbF 与正常对照组的比较分析，见表1。

2.2 α-各类型地贫基因组 Hb，MCV，MCH，HbA2,HbF与正常对照组比较 408例α地贫患者按基因检测结果分为α地贫静止型，α地贫标准型，α地贫中间型，汇总各组 Hb、MCV、MCH、HbA2、HbF与正常对照组的比较分析，见表2。

2.3 Hb， MCV，MCH，HbA2的临床应用性能评价见表 3、表 4、表 5、表 6。

3 讨论

地中海贫血是由于珠蛋白基因缺失或点突变造成的肽链合成不平衡,血红蛋白成分发生改变而引起的一类小细胞低色素性贫血[4]。地中海贫血根据不同的肽链合成障碍分为α型、β型、δβ型和δ型4种，其中以β和α地中海贫血较为常见，属于常染色体遗传的疾病[5]。该疾病对我国人民的身心健康产生很大的负面影响,特别是南方地区出生缺陷的重要影响因素[6]。减少重型地贫患儿的缺陷出生是目前地贫防控工作的目标，所以，施行有效的防控筛查手段至关重要[7]。

表1 各地贫基因组Hb，MCV，MCH，HbA2、HbF与正常对照组比较

表2 α-各类型地贫基因组Hb，MCV，MCH，HbA2、HbF与正常对照组比较

表3 各地贫组Hb，MCV，MCH，HbA2的阳性率

表 4 Hb，MCV，MCH，HbA2的性能评价

现在临床普遍使用血红蛋白电泳异常和MCV<82fl,HCH<27pg作为地贫筛查的标准，但从本文结果可见，由于各指标的临床诊断价值不同，运用单一标准可能会带来地贫筛查的漏诊。696例地贫在各监测指标的表现有很大区别。三组地贫Hb,MCH、MCV与HbA2水平与对照组比较均有统计学意义（P<0.05）。α-地贫组HbF与对照组无区别 （P>0.05），所以不再作HbF的相关分析。Hb，MCV，MCH下降最明显的是β-地贫，其次是α合并β地贫，然后再到α-地贫。而HbA2上升最明显的是β-地贫，其次是α合并β地贫。相反，α-地贫HbA2表现为下降，HbF无统计学意义上的变化。这与相关研究的结论基本一致[8]。而在静止型α地贫因为仅缺失一个α基因，五个指标与正常组比较无显著性，如果运用常用地贫筛查标准,会造成静止型α地贫的漏诊。α合并β地贫因为有α链的缺失，同时也有β链的缺失,导致α链和β链合成不平衡的状况得到一定的改善,所以临床表型比单纯的β-地贫稍好。在16例α合并β地贫中,有一例病例为2个β链基因突变和一个α基因的缺失。正常成人重度β地贫基本不能存活，但因为他同时有α链的缺失，改善了α链和β链合成不平衡的状况,同时目前还有地贫修饰基因的存在的学说作用,所以临床表现为中度地贫[9]。

表5 各地贫组HbA2分别联合Hb，MCV，MCH的阳性率结果

表6 HbA2联合Hb，MCV，MCH的性能评价

综合单个筛查指征的分析,敏感性和特异性最高的均是MCV和MCH,然后是HbA2,最低是Hb,这结论与相关研究基本一致[10]。因为如果是地贫患者,体内红细胞珠蛋白肽链合成障碍，红细胞粗制滥造,形态首先最受影响，所以MCV和MCH最先表现异常,而血红蛋白浓度有一定的储存能力可以缓冲,同时孕妇妊娠期缺铁性贫血的干扰较大[11]，所以Hb的敏感性和特异性最低。HbA2升高对β地贫的敏感性较高，为96%。因为临床上引起HbA2异常升高的其他疾病原因不多。在本研究272例β地贫中，虽然有11例HbA2表现为正常值，但结果均为3.2~3.4之间，相对正常组别均值2.68±0.28来说，还是偏高，估计跟机体可能同时有缺铁性贫血等有关系，待后继续跟进研究[12]。

本研究按现行地贫筛查标准实行HbA2联合红细胞参数指标综合分析比较,联合指标的特异性较单个 HbA2，Hb，MCV，MCH 有了明显的提高，基本达到90%以上,同时对地贫的阳性预测值均有一定数值的提高,说明联合指标筛查方法提高了对地贫的阳性预测值。但与表4比较，敏感性下降,敏感性下降会导致假阴性的提高，也就是可能会给指标临界值的地贫孕产妇或其他患者造成漏诊[13]。

血红蛋白电泳分析联合红细胞参数检测是目前所采用的地贫普遍筛查方法,汇总本次研究分析,该方法敏感度和特异性基本满足典型地贫的筛查要求。但由于地中海贫血是一种常染色体遗传病，同时我国南方地区具有高携带率的遗传特性，孕产妇本身同时也具有的其他基础疾病等原因，这些因素综合分析，作为地贫初筛方法的选择，要避免假阴性结果的出现，要考虑的影响因素非常多[14]。所以，要提高筛查的敏感性，初筛结果判断应分两步走：⑴先运用常规标准判断；⑵出现单个因素异常必须综合分析。有条件的单位还可以增加其他帮助筛查的实验方法。尽量不筛查漏诊任何一个可疑病例[15]，特别是联合筛查指标为阴性的孕产妇的排查。因为任何一个重度地贫患儿的出生，对家庭和社会都是一个严重的压力和社会重担。优生优育，减少出生缺陷患儿，寻找高敏感性、高特异性的地贫初筛检测方法永远是我们妇产筛查工作者努力的方向。