比较麦冬·去心麦冬及炮制品中多糖和总黄酮的含量

周玉波 曾怡 王赛男 屠晨瑶 黄思洋

摘要 [目的]通过测定麦冬、去心麦冬及其炮制品中多糖和总黄酮的含量，比较麦冬去心前后及炮制前后有效成分的变化。[方法]苯酚-硫酸比色法测定多糖含量;以芦丁为对照，采用NaNO2-AlCl3-NaOH法测定总黄酮含量。[结果]多糖含量分别为麦冬生品10.88%、酒炙品6.92%、清炒制品10.48%、米炒制品6.81%，去心麦冬生品11.73%、酒炙品8.46%、清炒制品11.01%、米炒制品8.54%。总黄酮含量分别为麦冬生品0.83%、酒炙品0.76%、清炒制品1.03%、米炒制品0.95%，去心麦冬生品0.78%、酒炙品0.70%、清炒制品0.99%、米炒制品0.84%。[结论]麦冬去心后，多糖含量增加，麦冬生品及去心麦冬经炮制后，多糖的含量均有减少;麦冬总黄酮含量在去心后减少，麦冬生品及去心麦冬炮制后，除酒炙品以外，总黄酮的含量均有增加。

关键词 麦冬;去心;炮制;多糖;总黄酮

中图分类号 R284文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2019）22-0181-03

Abstract [Objective]By measuring the content of polysaccharides and total flavonoids in Radix Ophiopogonis， cored Radix Ophiopogonis and its processed products， the changes of active constituents before and after the removal of Radix Ophiopogonis and before and after processing were compared.[Method]The content of polysaccharides was determined by phenolsulfuric acid colorimetry，and the concentration of total flavonoids was determined by NaNO2AlCl3NaOH colorimetry as rutin for a reference substance.[Result]The contents of polysaccharides in Radix Ophiopogonis and the processed products were as follows： crud Radix Ophiopogonis 10.88%， stirheating Radix Ophiopogonis with yellow wine 6.92%， plainfrying Radix Ophiopogonis 10.48%， stirfrying with Radix Ophiopogonis rice 6.81%;cored Radix Ophiopogonis 11.73%， stirheating cored Radix Ophiopogonis with yellow wine 8.46%， plainfrying cored Radix Ophiopogonis 11.01%， stirfrying with cored Radix Ophiopogonis rice 8.54%. The concentration of total flavonoids in above Radix Ophiopogonis and the processed products were as follows： crud Radix Ophiopogonis 0.83%， stirheating Radix Ophiopogonis with yellow wine 0.76%， plainfrying Radix Ophiopogonis 1.03%， stirfrying with Radix Ophiopogonis rice 0.95%;cored Radix Ophiopogonis 0.78%， stirheating cored Radix Ophiopogonis with yellow wine 0.70%， plainfrying cored Radix Ophiopogonis 0.99%， stirfrying with cored Radix Ophiopogonis rice 0.84%. [Conclusion]The polysaccharide content in Radix Ophiopogonis was increased by coring， while decreased by processing with above methods. The concentration of total flavonoids in Radix Ophiopogonis was decreased by coring， while increased by processing with above methods except stirheating with yellow wine.

Key words Radix Ophiopogonis;Cored;Processing;Polysaccharide;Total flavonoid

麦冬为百合科沿阶草属植物麦冬[Ophiopogon japonicus（L.f.）Ker-Gawl.]的干燥块根，是一种常用中药，始载于《神农本草经》，其性微寒，味甘微苦，具有除烦清心、生津益胃、润肺养阴的功效[1]。麦冬有较多炮制方法[2-3]：麦冬去心后具有除烦作用;酒制具有引经、增强滋补、降低寒性等作用;麦冬清炒后性微寒近平，以养胃生津为强，多用于消渴善饮、气短而口干、治疗便秘等;米制目的与酒制相似，可去苦寒，常用于发热病症之后，具有较缓清补的作用。目前临床上麦冬多采用去心、轧扁、切制等炮制方式，却很少用众本草提及的清炒、米制和酒制等。多糖和黄酮是麦冬中的重要活性成分，笔者以麦冬、去心麦冬及炮制品为研究对象，分別考察其中多糖和总黄酮两类成分的含量变化，为进一步研究麦冬、去心麦冬及炮制方法提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

麦冬（产地浙江）购于浙江震元医药连锁有限公司，经鉴定为百合科沿阶草属植物麦冬[Ophiopogon japonicus（L.f.）Ker-Gawl.]的干燥块根。芦丁对照品购于中国食品药品检定研究院，批号110824-200904;D-无水葡萄糖对照品购于中国食品药品检定研究院，批号110833-201205;水为去离子水;浓H2SO4、NaNO2、AlCl3、NaOH等试剂均为分析纯。

1.2 试验主要仪器

FZ102型粉粹机（北京市永光明医疗仪器厂）;METTLER AL204型分析天平（ Mettler仪器（上海）有限公司）;80-2台式低速离心机（上海手术器械厂）;HP8453型紫外-可见分光光度计（惠普公司）。

1.3 麦冬样品的制备

（1）麦冬生品。取干燥麦冬，用纯净水清洗后晒干。

（2）去心麦冬。取干燥麦冬，捡去杂质，用温水浸泡约30 min，取出，闷润至柔软后去心，再用纯净水清洗后晒干。

（3）清炒麦冬。取麦冬生品，用文火炒至表面微黄，部分可见焦斑，具焦香气后取出放凉。

（4）清炒去心麦冬。取去心麦冬，照清炒麦冬方法制得。

（5）米炒麦冬。先将米撒于锅中，用文火炒至全部呈焦黄色，待冒烟时倒入麦冬生品，继续用文火炒至麦冬表面黄色或出现焦斑，取出后放凉，筛去米即可。其中每麦冬1 kg用米120 g。

（6）米炒去心麦冬。取去心麦冬，照米炒麦冬方法制得。其中每去心麦冬1 kg用米120 g。

（7）酒炙麦冬。取麦冬生品，加入白酒，充分搅拌均匀后，稍闷至酒吸尽，用120 ℃文火微炒干，取出后放凉。其中每麦冬20 kg用米1.25 kg。

（8）酒炙去心麦冬。取去心麦冬，照酒炙麦冬方法制得。其中每去心麦冬20 kg用米1.25 kg。

1.4 麦冬多糖含量的测定

1.4.1 葡萄糖对照品溶液的制备。

无水葡萄糖105 ℃ 干燥至恒重，精密称取0.049 5 g，置50 mL容量瓶中，加水溶解定容后，得葡萄糖对照品溶液，其浓度为0.990 mg/mL。

1.4.2 标准曲线的绘制。

精确量取“1.4.1”项下对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于50 mL容量瓶中，加水定容。各取1.0 mL上述溶液，分别加至5支具塞试管中，从中加入1.0 mL 5%苯酚溶液，再迅速垂直加入5.0 mL浓硫酸，加塞后摇匀，在沸水浴中加热30 min，取出用冰水冷至室温。以1 mL双蒸水同上进行平行操作，作为空白对照溶液，按紫外-可见分光光度法，在488 nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标（Y）、葡萄糖标准溶液的浓度为横坐标（X），进行线性回归，得到标准曲线。

1.4.3 换算因子的测定。

麦冬粉末30 g，用75%乙醇60 ℃水浴提取3次（每次2 h），取药渣挥尽乙醇，加蒸馏水90 ℃加热提取3次，抽滤，合并滤液，再减压浓缩至40 mL，浓缩液加无水乙醇使含醇量到80%，置4 ℃冰箱中醇沉过夜，沉淀经离心分离后干燥，得粗多糖。粗多糖用Servage法[4]除蛋白，再醇沉（80%含醇量，操作同上）2次，得到的沉淀分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤后，60 ℃真空干燥至恒重，得麦冬精制多糖。精密称取麦冬精制多糖0.015 9 g，置50 mL容量瓶中，加水定容后，得到0.318 mg/mL的多糖溶液。

取麥冬精制多糖溶液1.0 mL于具塞试管中，按“1.4.2”操作测定吸光度，由回归方程求出麦冬精制多糖溶液中葡萄糖的浓度C（mg/mL）。按公式f=W/（C×D）计算换算因子，其中，W为称取多糖的质量（mg），C为多糖中葡萄糖浓度（mg/mL），D为稀释倍数。

1.4.4 样品溶液的制备。

取麦冬生品、去心麦冬及各种炮制品粉末各1.0 g，精密称定，用50 mL 80%乙醇加热回流2次（每次2 h），抽滤，滤渣分别用80%热乙醇洗涤3次（每次10 mL），挥尽乙醇，再用50 mL水提取3次（每次2 h），趁热抽滤，滤渣分别用热纯化水洗涤3次（每次10 mL），将滤液和洗涤液合并后浓缩，放冷后移入50 mL容量瓶中，加水定容，摇匀，即得。

1.4.5 样品中多糖含量的测定。

精密移取“1.4.4”项下麦冬生品、去心麦冬及各炮制品供试品溶液各0.5 mL，置10 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度摇匀后，取1.0 mL于具塞刻度试管中，按“1.4.2”方法测定吸光度，再根据回归方程计算各供试品溶液中葡萄糖的浓度，按公式（C×D×f/W）×100%计算其中多糖的含量，式中，C为待测样品溶液中以葡萄糖计所得的浓度（mg/mL），D为稀释倍数，f为多糖换算因子，W为待测样品干重质量。

1.5 麦冬总黄酮含量的测定

1.5.1 对照品溶液的制备。

精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁对照品0.019 8 g，用60%乙醇配制成0.396 mg/mL的对照品溶液。

1.5.2 标准曲线的绘制。

分别精密量取芦丁对照品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL于10 mL容量瓶中，各加入0.3 mL的5%NaNO2溶液，摇匀，静置6 min，再分别加入0.3 mL的10%AlCl3溶液，摇匀，静置6 min，最后分别加入4 mL的4%NaOH溶液，用60%乙醇定容至刻度，静置15 min后，以空白溶液为参比，用紫外可见分光光度计在510 nm波长处测定吸光度A。以芦丁浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

1.5.3 供试品溶液的制备。

精密称取麦冬生品、去心麦冬及各种炮制品粉末各1.0 g，用50 mL的75%乙醇加热回流提取2 h（共提取3次），趁热滤过，滤液减压浓缩（60 ℃）蒸去乙醇，再用同体积乙醚萃取2～3次除去叶绿素及蜡质等，最后用75%乙醇稀释定容至50 mL，即得各种麦冬供试品溶液。

1.5.4 样品中总黄酮的含量测定。

精密移取“1.5.3”项下麦冬生品、去心麦冬及各炮制品供试品溶液各1.5 mL，按照“1.5.2”方法测定，根据回归方程计算各供试品溶液中总黄酮的浓度。

2 结果与分析

2.1 麦冬多糖的含量测定及方法学考察

2.1.1 标准曲线的绘制。

分别对不同浓度的葡萄糖标准溶液进行吸光度的测定，得到回归方程Y=9.416 8X-0.040 2（r=0.999 6），结果表明，葡萄糖对照品溶液在0.019 80～0.099 00 mg/mL与吸光度有良好的线性关系。

2.1.2 换算因子。

按公式f=W/（C×D）计算换算因子，得f=3.99（n=6）。

2.1.3 稳定性试验。

精密移取样品溶液0.5 mL于10 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，从中精密移取1.0 mL于具塞刻度试管中，按“1.4.2”方法测定吸光度，每15 min测定1次，连续测定2 h，RSD=1.83%，表明显色体系在室温下2 h内稳定。

2.1.4 精密度试验。

精密移取1.0 mL葡萄糖对照品溶液，按“1.4.2”方法测定吸光度，平行测定6份，结果得出RSD=1.87%，表明仪器精密度良好。

2.1.5 重复性试验。

取同一批次麦冬生品粉末6份，各约1.0 g，精密称定，按“1.4.4”方法制备6份样品液，精密移取各0.5 mL置10 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，从中精密移取1.0 mL，按“1.4.2”方法测定吸光度，RSD=2.17%，表明重复性良好。

2.1.6 加样回收率试验。

取同一批已知含量的麦冬生品6份，各约0.5 g，精密称定，分别精密加入相当于样品中葡萄糖含量80%、100%和120%的葡萄糖对照品，按“1.4.4”方法制备样品溶液，精密移取0.5 mL于10 mL容量瓶中，加水稀释摇匀后，取1.0 mL置具塞刻度试管中，按“1.4.2”方法测定吸光度，计算葡萄糖的回收率，结果显示其平均值为100.46%，相对标准偏差为2.10%（表1）。

2.1.7 样品含量测定。

测定各供试品溶液的吸光度，根据标准曲线得到各供试品溶液中葡萄糖的浓度，再按公式（C×D×f/W）×100%计算其中多糖的含量，结果见表2。从表2可以看出，麦冬去心后，多糖含量增加，麦冬经炮制后，多糖的含量均有减少。

2.2 麦冬总黄酮的含量测定及方法学考察

2.2.1 标准曲线的绘制。

以芦丁浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得到回归方程A=11.869C-0.009 5（r=0.999 6），说明芦丁在0.019 8～0.099 0 mg/mL呈现良好的线性关系。

2.2.2 精密度试验。

精密吸取同一芦丁对照品溶液，按“1.5.2”方法连续测定6次，结果得出RSD为1.53%，表明精密度良好。

2.2.3 稳定性试验。

取同一供试品溶液1.5 mL，按“1.5.2”方法，每隔10 min测定一次吸光度，连续测定6次，RSD为1.05%，表明供试品溶液60 min内稳定。

2.2.4 重复性试验。

取同一批麦冬生品6份，按“1.5.3”方法制备供试品溶液，取1.5 mL按照“1.5.2”方法测定总黄酮的含量，结果得出RSD为2.58%，表明试验重复性良好。

2.2.5 加样回收率试验。

取麦冬生品1.0 g 6份，精密称定，分别加入相当于样品中总黄酮含量80%、100%和120%的芦丁对照品，按照“1.5.3”方法制备供试品溶液，精密移取1.5 mL，按照“1.5.2”方法处理并测定吸光度，计算平均加样回收率为101.14%，RSD为2.92%（表3）。

2.2.6 样品含量测定。

精密移取各供试品溶液，按照“1.5.2”方法测定，根据回归方程计算各供试品溶液中总黄酮的浓度，结果见表4。从表4可以看出，麦冬去心后，总黄酮含量下降，麦冬经炮制后，除酒炙品总黃酮含量下降外，其余炮制品总黄酮含量均升高。

3 讨论

多糖是麦冬药材的重要活性成分之一，由果糖和多量的低聚糖类组成，现代药理研究表明，具有抗心肌缺血、增强免疫、降血糖、抗氧化、抗过敏、抗肿瘤等药理作用[5-6]。麦冬去心及炮制后对麦冬多糖的含量有影响，麦冬去心后，多糖含量有一定的增加，麦冬生品及去心麦冬经炮制后，多糖的含量均有减少，可能由于高温氧化使多糖类成分含量减少。

黄酮类化合物在植物的根、果实、茎、叶、花中广泛存在，具有复杂多样的结构类型，在抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗衰老、抗心脑血管疾病、镇痛等方面表现有药理作用，因此在医药领域中具有广阔的应用前景[7-10]。麦冬中含有丰富的黄酮类化合物，试验表明，麦冬去心后总黄酮含量有所降低，麦冬生品及去心麦冬炮制后，总黄酮的含量均按清炒制品、米炒制品、生品、酒炙品次序依次降低，除酒炙品以外，麦冬、去心麦冬经炮制后总黄酮的含量均有增高。

从该试验研究结果看，麦冬去心后总黄酮含量有所降低，而多糖含量有所升高，因此，关于去心的问题还需做更多的研究。麦冬炮制品是经过不同炮制方法制成的，而不同的炮制方法影响麦冬有效成分的含量，这是中药炮制研究的重要组成部分，该试验通过对多糖及总黄酮含量的考察，可为麦冬的炮制研究及其临床合理用药提供试验依据。

参考文献

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