婴幼儿配方乳粉中维生素B6的检测方法研究

□ 滕布雷 连云港市质量技术综合检验检测中心 戴丽娜 陈泳君 连云港市食品药品检验检测中心

维生素B6（Vitamin B6）又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在人体内以磷酸酯的形式存在，是一种水溶性维生素，遇光或碱易分解，不耐高温[1]。在酸液中稳定，在碱液中易分别，吡哆醇耐热，吡哆醛和吡哆胺不耐高温。维生素B6在酵母菌、肝脏、谷粒、肉、鱼、蛋、豆类及花生中含量较多。维生素B6为人体内某些辅酶的组成成分，参与多种代谢反应，尤其是和氨基酸代谢有密切关系。

1 材料与方法

1.1 仪器

高效液相色谱仪（安捷伦LC1260，配有DAD+荧光检测器）；紫外分光光度计（珀金埃尔默，Lambda365）；涡旋混合器（德国IKA，VORTOX 2）；超声波振荡器（昆山禾创，KH-700DE）。

1.2 试剂

试剂均为分析纯，水为GB/T 6682-2008规定的一级水。维生素B6的3种标准物质盐酸吡哆醇购于德国Dr.E公司，盐酸吡哆醛和双盐酸吡哆胺购于北京曼哈格。

1.3 标准溶液配制

（1）1 mg·mL-1储备液。分别准确称取盐酸吡哆醇、盐酸吡哆醛和盐酸吡哆胺标准品（简称吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺）60.8、60.9、71.7 mg，用0.1 mol·L-1盐酸溶液溶解后定容到50 mL，在-20 ℃下避光保存，有效期1个月。使用前需要对储备液进行浓度校正。

（2）20 μg·mL-1中间液。分别准确吸取吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺的标准储备液各1.00 mL，用0.1 mol·L-1盐酸溶液稀释并定容到50 mL。用前配制。

混合标准工作液。分别准确吸取维生素B6混合标准中间液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mL和10.0 mL至 100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，则标准系列溶液的浓度分别为0.10、0.20、0.40、0.60、1.00 μg·mL-1和2.00 μg·mL-1。用前配制。

1.4 奶粉样品的前处理

按标准GB 5009.154-2016中条款5.1.2不含淀粉的试样中固体制样的处理方法进行处理。

1.5 待测液的制备

按标准GB 5009.154-2016《食品安全国家标准 食品中维生素B6的测定》中条款5.1.3进行。

1.6 仪器参考条件

色谱柱：C18柱，150 mm×4.6 mm。以国家标准中流动相为本实验缓冲液，即甲醇50 mL、辛烷磺酸钠2.0 g、三乙胺2.5 mL，用水溶解并定容到1 000 mL后，用冰乙酸调pH至3.0±0.1，过0.45 μm微孔滤膜过滤。流动相：甲醇+缓冲液=30+70。流速：1 mL·min-1。柱温：30 ℃。检测器：荧光检测器（FLD）。检测波长：激发波长293 nm，发射波长395 nm。进样体积：10 μL。

2 结果与讨论

2.1 维生素B6各组分标准溶液的浓度校正

①配制10 μg·mL-1标准校正液：分别准确吸取1.00 mL吡哆醇、吡哆醛、吡哆胺标准储备液，用0.1 mol·L-1盐酸溶液定容到100 mL。②对照液：0.1 mol·L-1盐酸溶液。③吸收值的测定：用1 cm比色杯于最大吸收波长下，以对照溶液为空白对照，测定各标准校正溶液的吸收值。④标准溶液的浓度计算：各标准储备液的质量浓度按式（1）计算。

式（1） 中，ρi-维 生 素 B6各 组分标准储备液的质量浓度，单位为μg·mL-1；Ai-维生素B6各组分标准测试液在各自最大吸收波长λmax下的吸收值（本次浓度校正紫外分光光度计测定值）；b-比色皿的厚度，单位cm（本实验采用1 cm比色皿）；Mi-维生素B6各组分标准品的分子量，单位g·mol-1；εi-维生素B6各组分在0.1 mol·L-1HCl中的摩尔吸收系数，单位L·mmol-1·cm-1；V-稀释因子；Fi-无维生素B6各组分的对照溶液的换算因子。

2.2 维生素B6各组分标准溶液浓度检测结果

从表1可以看出，校正后的各组分浓度与原配制浓度有稍微的差距，经过这一步校正能够使最终结果更加准确可靠。表1中计算出的各储备液的质量浓度分别为1.082 9、0.995 1、0.105 0 μg·mL-1，可根据配制过程得出相应的混合中间液及各自工作液中各组的浓度。

表1 浓度校正后各组分混合中间液及工作液的浓度表

2.3 正确度（加标回收率）

本实验以不同加标浓度的回收率来评估实验的正确度，根据奶粉中吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺的含量不同来确定加入标准中间液的量。奶粉样品及分别加入低、中、高不同浓度的标准品的液相叠图如图1，不同浓度的加标回收率能够较好的反应仪器对不同含量样品中VB6的检测正确度。随着加入标品浓度的增大，图中相应的峰高及峰面积均有一定程度的增加，表明该方法的回收率较好。

图1 标准曲线各工作液叠图

3 结论

本实验对婴幼儿奶粉中的维生素B6检测方法进行改进和研究，完善了其各组分标准溶液的浓度校正公式（紫外分光光度计法），调整其流动相比例，缩短了出峰时间。方法检出限均小于0.02 mg/100 g，方法定量限均小于0.06 mg/100 g。方法的回收率为82%～120%，RSD均小于4.0%，精密度高和重现性好。